GB/T35525-2017
化学品扩展的一代繁殖毒性试验
Chemicals—Extendedone-generationreproductivetoxicitystudy
- 中国标准分类号（CCS）A80
- 国际标准分类号（ICS）13.300;11.100
- 实施日期2018-07-01
- 文件格式PDF
- 文本页数24页
- 文件大小1.88M
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化学品扩展的一代繁殖毒性试验
国家标准 GB/T35525一2017 化学品扩展的一代繁殖毒性试验 Chemieals一Extendedongenerationreproduetivetosieitystudy 2017-12-29发布 2018-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T35525一2017 4.7.4器官称重和组织保存 亲代和F1代成年动物 4.7.5器官称重和组织保存 刚断乳F1代 0 10 4.7.6组织病理学 亲代 F1代 10 4.7.7组织病理学 5 报告 5.1数据 12 5.2结果评价 12 5.3试验报告 12 5.3.1基本要求 12 5.3.2受试物 12 5.3.3溶剂如果有 12 5.3.4实验动物 12 ++ 5.3.5试验条件 13 5.3.6结果(按性别和剂量获得的数据 5.3.7 队列2参数 13 5.3.8队列3参数 5.！结果讨论 结果解释稍 14 5.5 5.5,1暴露效应信息 14 5.5.2受试物相关信息 14 5.5.3队列2(神经发育毒性) 14 5.5.4队列3(发育免疫毒性 15 附录A(资料性附录)功能性观察试验组合包含的观察和检查项目 16 参考文献 17 图1扩展的一代繁殖毒性试验日程 表A.1功能性观察试验组合包含的观察和检查项目(队列2A)
GB/35525一2017 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
ationforEconomicCoc ation t,OECD andDevelopment 本标准和经济合作与发展组织(Organizat popera ReproductiveToxieitystudy(英文版) TG443:《扩展的一代繁殖毒性试验》ExtendedOne-Generationl 技术内容一致
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(sAC/TC251)提出并归口
本标准起草单位:检验检疫科学研究院、宁波出人境检验检疫局、上海市检测中心,常州出人境 检验检疫局
本标准主要起草人:宋乃宁、陈会明、李海山、崔媛、陈小青、梁艺怀、殷浩文、刘君峰、程艳、张静、 王璋
GB/T35525一2017 引 言 本标准针对研究设计做出了一些改进和说明,以便于灵活应用,并且强调了以现有认知作为研究开 始的重要性,并采用活体观察结果来指导并调整试验
本标准详细说明了扩展一代繁殖毒性研究的具 体实施情况
本标准介绍了子一代动物的三个队列研究: 队列1:评估繁殖/发育终点;此项队列研究可以扩展应用到子二代
队列2;评估化学品暴露对神经系统发育的潜在影响
队列3:评估化学品暴露对免疫系统发育的潜在影响
在决定是否进行二代评估,以及是否省略发育神经毒性队列和/或发育免疫毒性队列研究时,决策 应该可以反映对待评价化学品的现有认知,以及各监管部门的需求
本标准旨在详细说明如何进行研 究.以及如何对每个队列研究进行评价
对于使用内部触发因素的各监管机构,指南文件1171口介绍了二代研究的内部触发因素的判定 规程
IN
GB/35525一2017 化学品扩展的一代繁殖毒性试验 范围 本标准规定了化学品扩展的一代繁殖毒性试验的缩略语、原理、方法描述.报告
本标准适用于化学品扩展的一代繁殖毒性试验 缩略语 下列缩略语适用于本文件
吸收、分布,代谢、排泄(Absorption ADME ,distribution,metabolism,excretion) l.oOAEL;观察到损害作用的最低剂量(L.owcesobservedadverseefetleveD) NOAEL:未观察到损害作用的剂量(Noobservedadverseeffectlevel SARs;构效关系(Structure-activityrelationships) TK:;毒代动力学(Toxicokinetics) 原理 3.1扩展的一代繁殖毒性试验主要目的是评价特殊生命阶段(其他毒性研究中未包含这一阶段)以及 测试出生前后化学物暴露可能产生的影响
对于繁殖终点作为第一步,重复剂量染毒试验(包括繁殖 发育毒性筛选试验,如指南文件422)或短期内分泌干扰物筛选试验(如子宫增殖试验指南文件440. Hershbherger试验指南文件441)可用于检测对雄性和雕性生殖器官的影响包括雄性精子生成(睾 丸组织病理),雕性发情周期,卵泡数量/卵母细胞成熟和卵巢完整性(组织学)
扩展的一代繁殖毒性试 验要求测试雌性-雄性、雌性-胚胎、雌性-子代/性成熟后的子 代(F1)相互作用的繁殖终点" 3.2该试验评价化学物对出生前后发育的影响,以及妊娠哺乳期雌性及其子代年轻和成年时的全面的 系统毒性
详细检查重要的发育终点,比如子代生存力、新生仔鼠健康、出生时发育状态、成年之前的身 体和功能发育等有利于确定子代的特定的靶器官
此外该试验可提供和/或确认受试物对成年雄性、雌 性生殖系统完整性和繁殖行为影响的信息
特异的指标如下;性腺功能,发情周期,附睾精子成熟,交配 行为,受孕,妊娠,分娩以及哺乳,但不局限以上指标,同时从神经发育毒性和免疫发育毒性评价中获得 的信息可评价受试物对该类系统潜在影响的特征
上述试验数据可用于确定各种观察终点的未观察到 损害作用的剂量(NOAEL,观察到损害作用的最低剂量(ILOAEL)和/或基准剂量,或描述以往重复剂 量染毒试验中检测到的效应,或作为后续试验的依据 3.3扩展的一代繁殖毒性试验的流程见图1
持续以递进的剂量对各组性成熟的雄性和雌性动物进行 染毒
亲代(P)在交配前(至少2周)和交配期(2周)染毒
亲代雄性继续染毒至少到子一代(F1代)断 乳
雄性至少染毒10周
如果需要研究对繁殖的影响,则可延长染毒时间
亲代雌性从妊娠期和哺乳 期持续染毒直到其仔鼠断乳(也就是8周10周)
F代从断乳到成年继续染毒
如果评价子二代 F2代)口,F1代应维持染毒直至F2代断乳或试验结束 3.4对所有动物进行临床观察和病理学检查以确定毒性体征,尤其是雄性和雌性生殖系统完整性和繁 殖行为以及子代的健康,生长发育和功能
断乳后F1代被分配到特定的亚组作进一步观察,包括性 成熟、生殖器官完整性和生殖功能、神经和行为终点、以及免疫功能
GB/T35525一2017 方法描述 4.1试验动物 4.1.1动物种属和品系 选择繁殖毒性试验的动物种属时应根据所有现有信息仔细考虑
因为大鼠有清楚的背景数据以及 与一般毒性试验的可比性，一般首选该种属
本试验方法提供的标准和建议均是以大鼠为受试动物
如果使用其他的种属,需要给出理由并对方法步骤作适当修改
避免使用低生育率或自发发育缺陷率 高的品系
4.1.2鼠龄、体重及纳入标准 用健康、未做过试验的动物
应选用雄、雌双性别,雌性必须未生育过,并且未妊娠
亲代必须已经 性成熟,染毒之前的体重相似(同一种性别,交配时鼠龄相似(大约90天龄)
购人动物后至少适应性 饲养5d
将动物随机分配到对照组和染毒组,并满足组间体重均值可比(即均值士20%)
4.1.3饲养条件 4.1.3.1实验动物房的温度应保持在22C士3C,相对湿度30%70%
人工照明要求明暗各12h. 常规饲料喂养,饮水不限量
要注意饲料中植物雌激素类物质,因为高水平的植物雌激素可能对繁殖终 L[6-7] 喂饲染毒时,选择饲料要考虑 点有影响
建议使用标准化的、配方中雌激素类物质最少化的饲料" 应该验证饲料中受试物的成分,均匀性及稳定性
应定期检测饲料和 受试物和何料混合是香恰当中 饮水中的污染物
研究期间每个批次何料样品应在合适的条件下(如-20C冻存)保存直到最终完成 报告,以备必要时进一步分析饲料的成分
4.1.3.2按同一性别和染毒组分笼饲养
也可能要单笼饲养以避免动物之间可能的伤害(如交配期之 后的雄性)
应使动物在合适的笼中交配
确认交配之后,预期妊娠的雌性应单笼饲养于分娩笼,笼中 提供合适的做窝物料
仔鼠与亲代母鼠共同饲养直到其断乳
F1代动物从断乳到试验结束按同性别 和染毒组分笼饲养
也可单笼饲养
应将垫料中的植物雌激素类物质的水平降到最低程度
4.1.4动物数量与标识 4.1.4.1一般地,每个试验组和对照组应当有足够数量的动物交配,以保证每个剂量组能有至少20个 孕鼠
其目的是保证对受试物影响亲代生育、妊娠和母鼠行为以及F1代从受孕到成熟期间的生长和 发育情况做出有意义的评价
如果达不到理想的孕鼠数量,试验不一定无效,应根据个案情况进行评 价,同时考虑与受试物可能的因果关系
染毒之前应每个亲代指定- 一的识别号
如果实验室的历史数据表明大部分雌性没有正 4.1.4.2 个唯 常的发情周期(4d或5d),就建议在试验开始之前先评价发情周期
或者增加每组的数量确保染毒之 前每组至少有20个雌性有正常的发情周期
所有的F1代应在出生后0d(PND0)或PND1作为新生 仔鼠第一次检查时进行标识
研究中所有F1代,F2代都应记录来自哪个窝别
4.2受试物 4.2.1受试物可用的信息 4.2.1.1回顾已有的资料对于确定染毒途径,溶剂、动物种属、剂量的选择,以及调整染毒日程都很重 要
需要考虑受试物所有的相关信息,如理化特征、毒物动力学(包括种属特异性的代谢)数据和特征 构效关系(SARs)、体外代谢过程,以往毒性研究的结果以及结构类似物的相关信息等
最初关于吸收、
GB/35525一2017 分布、代谢、清除(ADME)以及生物蓄积的信息来自于化学结构、理化数据、血浆蛋白结合程度或毒物 动力学(TK)研究,同时从毒性研究的结果能获得另外一些信息,如NOAEL,毒物代谢或代谢的诱 导等
4.2.1.2尽管没有要求毒物动力学数据,但是以往进行的剂量范围确定试验或其他的研究提供的数据 对于试验设计和剂量选择以及结果解释非常有用
尤其是以下数据:l)发育中的胎鼠和幼鼠确定暴露 于受试物或相关代谢物);2)提供对内剂量的估计;3)动力学过程中潜在的剂量依赖饱和度的评价
如 能得到其他的毒物动力学数据,如代谢物谱,毒物浓度时间曲线(时量曲线)等,同样要考虑
研究期间 应进一步收集补充毒物动力学数据
下列毒物动力学数据对于设计本试验是有用的 aa 妊娠晚期(即妊娠20d)-母血和胎儿血; b 哺乳期中期(PND10)-母血子代血和/或母乳; c 断乳后早期(PND28)断乳子代血样 42.1.3检测特异性分析指标(如外源化合物和/或代谢物)或采样计划时应有灵活性
举例来说在某 个特定的采样当天样品收集的数量和时间应根据染毒途径和已有对未孕动物的毒物动力学特征的认 识
对于喂饲研究,可以每天同一时间采样,而灌胃染毒要有额外的采样时间以获得更好内剂量范围
然面,任何采样当天不必产生完整的时量曲线
如果有必要,可把同一窝内相同性别仔鼠的血液合并 用于胎鼠和新生仔鼠分析
4.2.2染毒途径 选择染毒途径应更多考虑与人类暴露最相关的途径
本方法中受试物的染毒途径是通过喂饲,但 根据化学物的性质和必要的信息,可考虑通过其他途径进行(饮水、灌胃、吸人、经皮》
4.2.3溶剂选择 必要时受试物可溶于或悬浮于合适的溶剂
建议优先考虑使用水溶液/悬浮液,其次考虑油溶液 悬浮液(如玉米油)
对于除水以外的溶剂,应了解溶剂的性质
避免使用具有潜在毒性的溶剂(如丙 酮、二甲基亚碱)
应确定受试物在溶剂中的稳定性
如果为了方便染毒采用溶剂或其他添加剂,需要 考虑其对受试物吸收,分布、代谢或清除的影响;对受试物化学性质的影响或许可改变其毒性特征,对动 物的食物摄人量、饮水量或营养状态的影响
3 剂量选择 4.3.1一般情况,试验应至少包括三个剂量水平和相应的对照
在确定剂量水平时,研究者应当考虑 所有现有的信息,包括以往研究的剂量,受孕和未孕动物的毒物动力学数据,通过母乳迁移的程度,人群 暴露的估计
如果毒物动力学数据可表明此过程中剂量依赖的饱和程度,需要仔细考虑避免高剂量水 平出现明显饱和现象,当然人类暴露量预计远低于此饱和点
这种情况下,最高剂量水平应该相当于或 略微高于非线性毒物动力学的拐点
4.3.2如果没有相关毒物动力学数据,剂量水平应基于毒性效应,除非受试物的物理/化学性质受限
如果根据毒性确定剂量水平,最高剂量组应选择能引起一些系统毒性,但不致动物死亡或严重痛苦的 剂量
4.3.3选择递降的剂量水平以表明剂量-反应关系,确定NOAELs或检测限附近的剂量以推导多数敏 感终点的基准剂量
为了避免NOAEL和LOAEL之间大的剂量间隔,通常2或4倍间隔最佳
增加 第四个试验组时通常剂量组间最好采用更大的间隔(如超过10倍)
4.3.4对照组动物除了不用受试物染毒外,与试验组动物以相同的方式处理
对照组不染毒或用安慰 剂处理,如果受试物染毒时需使用溶剂则为溶剂对照组
如果使用溶剂,溶剂对照组中溶剂的量应为药
GB/T35525一2017 物处理组中所含溶剂的最高量
4.4限度试验 如果重复剂量染毒试验中至少在1000mg/kgd)剂量下没有毒性证据,或者根据结构和/或代 谢相关的化合物数据表明体内体外代谢活性相似,受试物不会产生预期的毒性,在试验中就不需要使用 多个剂量水平
在这种情况下,本试验可以使用对照组和1000mg/(kgd)剂量组进行试验
然而如 果在该限量剂量下出现繁殖或发育毒性,则需要进一步研究较低剂量水平以确定NOAEL
限度试验 只在当人类暴露表明不必进行较高剂量水平时应用
4.5程序 4.5.1子代暴露 喂饲染毒为首选的染毒途径
如果灌胃染毒应注意子代只通过母乳间接的暴露于受试物,直到断 乳后开始直接染毒
如果喂饲或饮水染毒,在哺乳期最后一周子代开始独立饮食时将直接额外暴露于 受试物
当通过母乳分泌接触的受试物很少,并且缺少子代持续暴露的证据时应考虑修正试验设计
在这样的情况下,哺乳期间直接给子代染毒应依据可用的毒物动力学数据、子代毒性或生物标志物的改 变s们
幼鼠直接染毒之前应仔细考虑优缺点['m 4.5.2染毒日程和剂量 4.5.2.1以往进行的重复剂量染毒研究中有关发情周期,雄性和雌性生殖系统组织病理学以及睾丸/附 睾精子分析的资料是有用的
扩展的一代繁殖毒性试验中交配前持续染毒目的是检测功能改变,这些 改变可影响交配行为和受精
亲代雌性和雄性的交配前染毒应有足够时间以便达到稳定的暴露
多数 情况下认为交配前染毒2周时间足够
对于雌性,包含了3个 个发情周期,应检测任何对发情周期 的不良影响
对于雄性,2周时间相当于成熟精子转移到附睾的时间,应在交配时检测睾丸后效应对精 子的影响(在排精和附睾精子成熟的最后阶段)
当试验结束检测睾丸和附睾组织病理学和精子参数分 析时,亲代和F1代雄性将至少暴露一个完全的生精过程].[l1m 4.5.2.2如果以往的研究清楚表明受试物具有睾丸毒性(损害精子生成)或影响精子完整性和功能,就 应在动物交配前染毒
同样地,如果受试物影响雌性发情周期进而影响性兴奋,也应在交配前染毒
特 殊情况下只有在获得精子涂片阳性时开始对亲代雌性染毒 4.5.2.3当确定交配前染毒时,动物应持续染毒7天/周直至解剖
所有动物按同样的途径染毒
对于 雌性染毒应为2周交配期,贯穿妊娠期和哺乳期直至断乳后试验结束
雄性以同一方式染毒直到F1 代断乳
优先对同一天开始哺乳的雌性进行解剖
雄性则可延长更多天,这取决于实验室条件
除非 哺乳期已经开始直接染毒,否则对F1代直接染毒应从断乳后开始持续到计划的解剖时间这由不同的 队列而定
4.5.2.4经喂饲或饮水染毒时需要确定受试物的含量不影响正常的营养或水平衡
当喂饲染毒时应详 细说明是使用恒定的饲料浓度(mg/人kg
饲料或nmg/儿饮水)还是按照动物体重计算的恒定剂量 4.5.2.5当灌胃染毒时，一次给予的液体应不超过每100g体重1ml(对于油为不超过每100g体重 0.4ml,如玉米油),刺激性和腐蚀性的受试物在较高浓度时会出现更明显的影响,除了这些物质,应通 过调整浓度减小试验容量的办法以确保所有剂量水平的染毒体积不变
每天应在相似时间染毒
每个 动物的染毒量应依据最近的体重调整,成年雄性和未孕雌性至少每周调整一次,受孕的雌性以及出生后 断乳前F1代和断乳后2周的F1代动物每两天调整一次
如果毒物动力学数据表明受试物经胎盘转 移低,妊娠最后一周调整剂量以防母鼠染毒量过高
分娩当天不应对雌性灌胃或者任何其他途径的染 毒,省去当天的受试物染毒比染毒时干扰生产过程更好
GB/35525一2017 4.5.3交配 每个亲代雌性应与来自同一剂量组(1:1配对)的随机选择的单个雄性动物同笼直至证明受精或 2周交配期结束
如果雄性不足,如交配前雄性死亡,那么之前已交配的雄性与第二个雌雕性进行1:1 配对
交配成功发现阴栓或精子)当天为妊娠0d
一旦观察到受精成功尽快将动物分离
如果两周 后仍未交配,动物应分离并且不再交配
4.5.4子代数量 出生后第4天将子代尽量随机调整到每窝5雄和5雌
如按照体重,选择性的剔除发育不良的幼 鼠是不恰当
如果每窝得不到5雕和5雄,则进行不均等调整如6雄和4雌. 4.5.5断乳后幼鼠的选择(见图1) 4.5.5.1断乳时(大约PND21)每个染毒组和对照组从所有可用子代中选择20个子代进行进一步检 查，一直持续到性成熟(如果无需更早的检测)
随机选择子代,排除明显发育不良的子代动物(体重低 于各窝子代体重均数,超过两个标准差),因为其不能代表染毒组动物
4.5.5.2PND21,F1代随机分配到如下3个队列之 a 队列1(1A和1B)=繁殖发育毒性试验 b队列3(2A和2B)=神经发育毒性试验 队列3=免疫发育毒性试验 c 队列1A;每组每窝1雄和1雌(每组每种性别20只);优先选择评价对生殖系统和一般毒性影响
队列1B;每组每窝1雄和1雌(每组每种性别20只)优先选择后续评价交配的F1代的繁殖行为 以及获得可疑繁殖或内分泌毒物的组织病理学数据
队列2A;每组分配共20只子代(每组10雄和10雌,每窝1雄或1雌)进行神经行为学试验,随后 在成年期进行神经组织学评价
队列2B:每组分配共20只子代每组10雄和10雌，每窝1雄或1雌)在断乳期(PND21或 PND22)进行神经组织学评价
如果动物数量不足,则将动物优先分配到队列2A
队列3;每组分配共20只子代(每组10雄和10雌,每窝1只)
在PND56士3需要从对照组中另外 选择子代作为T细胞依赖性抗体反应试验(TDAR)的阳性对照动物
4.5.5.3当某窝的子代数量不能满足所有队列要求时,优先考虑队列1,因为其可延长至产生F2代
剩余的子代可根据特异关注点分配到任何队列.比如怀疑受试物是神经毒物,免疫毒物或繁殖毒物
这 些子代也可用于不同时间点检查或增补终点的评价
未进人队列的子代将进行临床生化和大体解剖
GB/T35525一2017 处死亲代 染毒 交配前 交配 交配后 雄性亲代 2周 2周 6周 2周 2周 妊娠 哺乳 雌性亲代 子含内发n 子一代 断乳前 断乳 处死周龄/ 亲代 队列 设计 动物/队列 性成熟 周 13 1N 是 繁殖毒性 20雄+20雌 IB 繁殖毒性 14或20~25 是 20雄+20雌 1112 每个剂量组 神经毒性 10雄+10雕" 20窝 10雄+10雕" 否 神经毒性 10雄+10雕 免疫毒性 是 否 剩余的 备用 20窝,每窝一只,尽量能代表整个组 图1扩展的一代繁殖毒性试验日程 4.5.6亲代二次交配 -般不建议亲代动物二次交配,因为这样会丢失第一次交配中着床位点数量的重要信息(并因此丢 失着床后和围产期数据,失去可能的潜在致畸性的信息)
将研究扩展到F1代交配期能更好的确定和 阐明对雌性动物暴露后的影响
然而亲代雄性和未染毒雌性二次交配通常可用于阐明可疑的发现或者 进一步描述第一次交配中观察到的生育力影响
4.6活体观察 4.6.1临床观察 4.6.1.1每天对亲代和所选F1代动物进行一次一般临床观察
灌胃染毒时,临床观察的时间应在染毒 之前或之后因为可能出现的毒性体征与最高血浆浓度有关)
记录相关行为改变,产仔困难或延迟,以 及所有的中毒特征
每天两次(周末每天1次)观察所有动物有无严重毒性反应,发病和死亡情况
4.6.1.2此外每周对所有亲代和F1代(断乳后)进行一次详细的检查,当给动物称重时顺便进行检查将 会使触摸应激最小化
仔细观察并使用实验室确定的评分系统记录
尽量使得试验条件的差异最小 化
记录的体征应包括皮、毛、眼、黏膜、排泄物和分泌物发生情况及自主活动如流泪、竖毛、髋孔大小、 异常呼吸模式)的改变,但不局限于上述指标
同样应记录步态,姿势,触摸反应,阵发性或紧张性活动 机械重复(如过多的梳理被毛,来回转动的探索行为)或异常行为
体重和食物/水消耗量 4.6.2 亲代染毒第一天称重,其后至少每周一次
此外哺乳期亲代雕性和其子代在同一天称重
断 4.6.2.1 乳后(PND21)所有F1代按个体称重,并且之后至少每周一次
记录进人青春期时的体重包皮完全分
GB/35525一2017 离或阴道开口)
所有动物处死时称重
4.6.2.2研究期间至少每周记录一次饲料或水的消耗量(受试物通过饮水染毒时),与动物称重在同一 天进行(除了同笼时)
从F1代进人各自队列开始记录每笼的食物消耗量
4.6.3发情周期 4.6.3.1 受试物对发情周期影响的基本信息可从以前的重复剂量染毒试验中获取,并且可以用于设计 本试验中受试物特异性的操作步骤
一般发情周期的评价通过阴道细胞学)始于染毒开始,直到确认 交配成功或者到2周交配期末
如果染毒之前已对雌性动物正常发情周期进行过检查,那么从染毒开 始持续的涂片是有用的
但是如果染毒起始时关注非特异的效应如起初食物消耗量显著减少),可以 使动物适应处理两周,再进行2周涂片检查,之后配对交配
这样雌性染毒期变长(也就是交配前染毒 4周),配对之前需要购买鼠龄小的动物,并延长雄性染毒时间
获得阴道/子宫颈细胞时,需要注意避 [15-16] 免损伤子宫黏膜而导致假孕 4.6.3.2队列1A中所有的F1代雌性应该每日阴道涂片检查,在阴道开口之后直到记录到第一次出现 角质细胞,确定两个事件的时间间隔
队列1A中所有的F1代雕性应该从大约出生后75d开始监测 发情周期两周
此外F代应该完成交配队列1B应从配对开始到交配成功进行阴道细胞学检查
4.6.4交配和妊娠 46.4.1除了标准的终点(如体重,食物消耗量,临床观察包括死亡率/发病率)之外,要记录配对日期 授精日期、分娩日期,并计算交配前间隔(配对到授精),妊娠期(授精到分娩)
亲代雌性在预计分娩期 间需要仔细观察任何难产的迹象
记录任何异常的做窝或理巢行为
4.6.4.2分娩当天对于母鼠定为哺乳期0d(LD0),对于子代定为出生后0d(PND0)
通过妊娠期的差 别来淘汰出生后发育数据的混杂,再进行所有数据的对比,应该记录分娩时间
当受试物影响妊娠期时 这一信息就很重要
4.6.5子代参数 4.6.5.1分娩后(PND0或1)应尽快检查每窝,确定子代的数量和性别,死产数,活产数,所有的异常(外 形畸形,包括聘裂,皮下出血、异常的皮肤颜色或纹理,残留挤带、胃中无奶、出现干的分泌物)
另外,新 生胎鼠第一次临床检查应该包括体温、活动状态、触摸反应
PND0或者过一段时间死亡的幼鼠应检查 可能的缺陷和死因
PND0或PND1计数存活的幼鼠,并称个体体重,此后定期称重,如至少在PND4 7、14、21
在子代称重时应进行临床检查,或者经常去检查出生时发现的特定病例
体征包括外部畸 形、皮肤、被毛,眼睛、黏膜的改变、分泌物和排泄物的出现、自发运动,当然不仅仅局限以上
同样应该 记录步态、姿势,触摸反应、出现阵发性或紧张性动作,机械重复动作或异常行为
4.6.5.2从PND0PND4至少测量 个幼鼠的AGD,并在当天称重
AGD以幼鼠的大小进行标 次 准化最好是体重的立方根 应检查雄性幼鼠的乳头/乳晕
PND12或PND13 4.6.5.3如果性成熟发生的早,在预计的包皮分离或阴道开口出现之前,所有被选择的F1代雌雄动物 应该每日评价这些终点
应注意任何生殖器官异常,如持续阴道口开放,尿道下裂或阴茎裂开
通过检 测包皮分离或阴道开口时鼠龄和体重,比较性成熟F1代动物的生理发育情况in 4.6.6评价亲代的神经发育毒性队列2A和2B) 4.6.6.1队列2A和2B中每个染毒组的10雄10雌(每个队列每窝1雄或1雌;所有的窝至少随机选 择1个子代)用于神经毒性评价
队列2A动物应进行听觉惊愕反射,功能性观察试验组合,运动活力、 神经病理学评价
尽量确保所有试验条件的差异最小并且没有与处理相关的系统偏差
声级(如间歇 噪声),温度、湿度、照明、气味、白昼时间、环境干扰会影响动物的行为
神经毒性试验的结果解释应参
GB/T35525一2017 照适当的历史对照的参考范围
队列2B动物应在PND21或PND22进行神经病理学评价
4.6.6.2听觉惊愕反射试验应对队列2A中PND24(十1)的动物进行
试验当天应平衡处理组和对照 组数量
每阶段含有50个试验
进行惊愕反射试验时,应确定每区组10个试验的平均响应振幅(分 5个区段),同时优化试验条件以产生暂时适应
这些程序应与指导文件426一致g 4.6.6.3对队列2A动物在PND63PND75之间选择合适的时间进行功能性观察试验组合,用自动分 析仪器测量运动活力
步骤应与指导文件424(和指导文件4261们一致
功能性观察试验组合包括深 人描述对象的外观、行为和功能的完整性
将动物移动到标准平台(开放式、动物可自由活动)观察,之 后再放人笼内观察,或者用手触摸进行评价
试验应从最小程度交互方式进行到最大程度
观察和检 查项目参见附录A
仔细观察所有动物,使用标准的程序盲法进行观察以减少误差
如果可能,建议由 同一人来评价试验中的动物
如果不行,要求论证观测者之间的可靠性
对于行为组合试验的每个参 数应使用明确可操作的量表和评分标准
应客观定量测量观察的终点,避免主观排序
每个动物单独 测定运动活力
试验项目应有足够的时间以证明对照组短期的适应
自动活力记录仪用于监测运动活 力
仪器应能监测活动的增加和减少(也就是仪器测定活动的基线不应太低以至不能检测到活动减少 同时也不应太高以至不能检测到活动增加)
每个设备应该使用标准的操作程序,确保设备之间以及不 同时间运行的可靠性
各处理组也应在设备使用上保持平衡
各处理组应在试验时间上平衡,避免生 物活动周期节律造成的混杂效应
4.6.6.4如果已有信息表明需要其他的功能试验(如感觉、社会、认知),应整合这些试验
如果这些试 验与标准听觉惊愕反射、功能性观察试验组合及运动活力试验用同样的动物,做好不同试验的安排以减 少试验不完整的风险
当观察经验,预期效应或机械/作用方式表明具有特定类型的神经毒性时,需补 充试验程序
4.6.7评价潜在的免疫发育毒性(队列3) PND56(士3),队列3中每个染毒组的10雄10雌(每窝1雄或1雌;所有的窝至少随机选择1个子 代)用于T细胞依赖性抗体应答试验,也就是lgM抗体对T细胞依赖抗原产生应答,如绵羊红细胞 (SRBC)或血蓝蛋白(KLH),符合现行的免疫毒性试验程序[1们
评价该试验可在应答最高峰通过计 数脾脏中溶血空斑形成细胞(PFC)或者用ELISA方法检测血清中绵羊红细胞或血蓝蛋白特异的IgM 抗体的效价
一般应答高峰出现在静脉免疫接种后的第4天(PFC应答)或第5天(ELIsA)
如果通 过计数溶血空斑形成细胞(PFC)检测初次抗体应答,可在不同的日期评价亚组的动物,条件如下;亚组 免疫和处死同步,以便在应答最高峰计数;亚组含有来自所有剂量组相等数量的雄性和雌性;在大约相 同的出生后鼠龄时进行评价
受试物持续染毒直到收集脾脏用于PFC应答或收集血清用于ELISA试 验时
4.6.8潜在繁殖毒性后续评价(队列1B 队列1B动物可持续染毒到90d之后,必要时可繁殖到F2代
同一剂量组的雄性和雌性应该在 ND90一PND120同笼(避免兄弟姐妹交配)至少?周
程序与亲代相似
基于有力的毒性证据可以在 PND4处死幼鼠,而不必饲养到断乳或之后
4.7最终观察 4.7.1临床生化/血液学 4.7.1.1检测亲代的系统效应
试验结束时每个剂量组随机选择10个亲代雄性和雌性从确定的位置 迅速采血,保存在合适的条件下,进行血液学、临床生化、T4和TSH检测或者根据受试物已知效应特 征适当的其他检测n
血液学参数如下;红细胞压积,血红蛋白浓度、红细胞数、总的和分类分白细胞计
GB/35525一2017 数、血小板计数和血凝时间/效价
血浆和血清检测包括;葡萄糖、总胆固醇、尿素、肌酥、总蛋白、白蛋白 和至少两种指示肝脏影响的酶(如丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶,y-谷氨酰转肽酶和山梨 醇脱氢酶)
特定情况下检测其他酶和胆汁酸能提供有用的信息
此外保存动物血样用于以后可能的 分析以帮助阐明可疑的效应或者检测内剂量
如果存在二次交配的亲代,应在计划处死之前或处死过 程中收集血样
剩余的动物应在二次交配动物收集血样前几天采血
除非现有重复剂量染毒研究的数 据表明尿液参数不受影响,否则应在试验结束前进行尿液分析,参数如下;外观、体积渗透压或比重 pH值、蛋白质、葡萄糖、血液和血液细胞,细胞碎片
也可收集尿液检测受试物和/或代谢物
4.7.1.2检测F1代动物的系统效应
处死时随机选择队列1A中每个剂量组10个亲代雄性和雌性从 确定的位置迅速采血,保存在合适的条件下并进行标准临床生化检测,包括血清甲状腺激素水平(T4和 TSH),血液学总的和分类的白细胞计数及红细胞计数),尿液分析
4.7.1.3PND4剩余的子代进行大体解剖并考虑测定甲状腺激素T4水平
必要时,可将每窝的新生仔 鼠(PND4)血样合并做生化/甲状腺激素分析
收集PND22未进人队列的F1代血液进行T4和TSH 分析
4.7.2精子参数 所有亲代雄性都应检测精子参数(除非现有的0天研究数据表明精子参数不受影响》 4.7.2.1 所有 队列1A的雄性检测精子参数
4.7.2.2试验结束时记录所有亲代和代雄性(队列1A)的睾丸和附睾质量
至少保留1只附睾和 只睾丸进行组织病理学检测
剩下的附睾用于测定附睾尾精子含量[野到
此外运用损伤最小的方法 进行附睾尾或输精管中精子运动性和形态学评价的 4.7.2.3可在处死后立即评价精子运动性或者记录下来用于以后的分析
主观评价或用计算机辅助精 子运动分析仪客观地分析各级精子活动度的比例n;sn
固定或湿法处理附睾(或输精管)中精子C8],进 行形态学评价,同时每个样品至少计数200个精子,分为正常(头部、中断/尾部表现正常)或异常
形态 学异常的精子包括融合、无头,头部畸形和/或尾部畸形们
精子头畸形或大头可能表明排出的精子 畸形
4.7.2.4如果解剖时冻存精子样品,固定涂片以及记录精子运动分析图像n,随后可只在对照组与高 剂量组间比较分析
如果观察到与处理相关的效应,应评价较低的剂量组
4.7.3大体解剖 4.7.3.1死亡或到期处死的所有亲代和F1代动物都应解剖进行大体检查,肉眼观察有无任何结构异常 或病理学改变,特别是生殖器官
记录死亡的幼鼠以及处死的濒死幼鼠,如果不固定,检查可能的畸形 和/或死亡原因
4.7.3.2处死当天检查所有成年亲代和F1代雌性的阴道涂片确定发情周期.以此判断生殖器官组织病 理学相关改变
检查所有亲代雌性(包括F1代雌性)的子宫有无着床位点及数量
检查方式应不影响 组织病理学的评价
4.7.4器官称重和组织保存亲代和F1代成年动物 4.7.4.1解剖后尽快测定相关队列如下所示)所有亲代和成年F1代的体重和下面列出的器官湿重防 止变干
器官保存在合适的条件下
除非特定说明,成对器官可单独也可合并称重
子宫(包括子宫颈和输卵管),卵巢 a b 睾丸、附睾总重以及用于精子计数的附睾尾); 前列腺(背侧和腹侧)
当修剪前列腺时注意避免刺破充满液体的精囊腺
如果染毒影响前列 腺,那么应剖离固定后的前侧和背侧部分并单独称重;
GB/T35525一2017 d 精囊腺(包括腺体和液体); e 脑肝脏、肾脏、心脏、脾脏、胸腺,垂体、甲状腺固定后)、肾上腺以及已知的靶器官或组织
4.7.4.2除了上面列出的器官,应将周围神经、肌肉、脊髓、眼睛(加上视神经),胃肠道、膀胱、肺,气管 甲状腺和附着的甲状旁腺),骨髓,输精管(雄),乳腺(雄性和雌性)和阴道样品保存在合适的条件下
4.7.4.3队列1A中动物的所有器官称重,保存用于组织病理学分析
4.7.4.4为了评价出生前后诱导的免疫毒性效应,试验结束时从队列1A中每个染毒组选择10雄和 10雌(每窝1雄或1雌;所有的窝至少随机选择1个子代)进行如下检查: 称重与染毒途径离得较近和较远的淋巴结(除了队列1A中已称重肾上腺、胸腺、脾脏).; a b) 用一半的脾脏分析淋巴细胞亚群(CD4十和CD8十T淋巴细胞,B淋巴细胞、NK细胞),保存另 -半进行组织病理学评价
4.7.4.5分析队列1A中未免疫动物的脾脏淋巴细胞亚群可确定与暴露相关的免疫学稳态[包括辅助 CD+4细胞或细胞毒性(CD8十)胸腺衍生淋巴细胞或自然杀伤细胞(对肿瘤细胞和病原体快速应答 分布的改变
4.7.4.6称重队列1B动物的如下器官和相应的组织 aa 阴道(不称重); b 子宫(含子宫颈); es 卵巢; a) 睾丸(至少1个). 附睾; 精囊和凝固腺 前列腺" 垂体 D) 已知靶器官
如果队列1A中结果可以确定或怀疑受试物为繁殖或内分泌毒物,可进行队列1B的组织病理 4.7.4.7 学检查
4.7.4.8队列2A和2B:神经发育毒性试验(PND21或PND22和成年子代)
行为试验后处死队列2AN 中动物,记录大脑质量并进行完整的神经组织病理学检查以评价神经毒性
PND21或PND22处死队 列2B中动物,记录大脑质量并显微镜检查以评价神经毒性
队列2A要求对大脑灌注固定,队列2B则 可选[们 4.7.5器官称重和组织保存- -刚断乳F1代 断乳后(PND22)处死未进人队列的子代(包括发育不良的幼鼠)除非结果表明需要进一步观察
对处死的子代进行大体解剖,包括评价生殖器官
每组每个性别选10个子代(尽可能来自更多窝别)称 重大脑、脾脏,胸腺,并保存在合适的条件下
此外,保存这些雄性和雌性的乳腺组织进行进一步的显微 镜下分析
保存异常的靶组织进行组织病理学检测
4.7.6组织病理学- -亲代 高剂量和对照组中所有亲代动物按4.7.4列出的器官进行组织病理学检查
如果某器官出现染毒 相关病理改变,应检查较低剂量组所有动物的该器官以帮助确定NOAEL
另外对怀疑生育力下降(如 交配、受孕、授精、健康子代分娩失败,或者影响发情周期、精子数量、运动性,形态学)的所有动物的生殖 器官以及所有的显著病变进行组织病理学评价
4.7.7组织病理学F1代 4.7.7.1队列1动物 4.7.7.1.1高剂量和对照组中队列1A中所有成年的动物按4.7.4列出的器官进行组织病理学检查
每 10
GB/35525一2017 个窝别中每个性别至少有1个子代代表
同时应检查较低剂量组所有动物中出现染毒相关改变及显著 病变的器官和组织以帮助确定NOAEL
队列1A所有动物进行胸腺、脾脏和肾上腺组织病理学检查 之后,紧接着在队列1A中选择10雄和10雌评价出生前后暴露对淋巴器官的影响和淋巴结组织病理 学改变
4.7.7.1.2如果怀疑受试物是繁殖或内分泌毒物,那么应按4.7.4描述对队列1B所有动物的繁殖和内 分泌组织进行组织病理学检查
如果队列1A的结果可疑,同样应对队列1B进行组织学检查
4.7.7.13成年雌性的卵巢应包含原始和生长卵泡以及黄体;所以应进行组织病理学检测以定量评价 F1代雌性卵巢中原始和生长卵泡以及黄体
动物数量、卵巢部分的选择、卵巢样品大小应符合统计学 要求
首先进行对照组和高剂量组动物的卵泡计数,如果后者发生损害效应,则应检查较低剂量组
检 查应包括计数原始卵泡数量,其可与小生长卵泡计数结合用于评价染毒组和对照组卵巢中
评价黄体 同时应检测发情周期以便分析发情周期不同阶段的影响
检测输卵管、子宫、阴道用于评价器官的 发育
对F1代雄性进行详细的睾丸组织病理学检测以确定染毒对睾丸分化和发育以及精子生成 4.7.7.1.4 的影响灯
如果可以还应检测睾丸网
检测附睾头,附睾体,附睾尾和输精管用于评价器官的发育,参 数要求和亲代雄性的一样
4.7.7.2队列2动物 4.7.7.2.1高剂量和对照组中所有队列2A中动物在完成神经行为学试验后(PND75PND90)进行神 经组织病理学检查
高剂量和对照组中所有队列2B中动物在PN21或PND22进行大脑组织病理学 检查
同时应检查较低剂量组动物中出现染毒相关改变的器官和组织以帮助确定NOAEL
对于队列 2A和2B动物,检测大脑中多个部分包括嗅球,大脑皮层、海马,基底核、丘脑、下丘脑、中脑(顶盖、大脑 脚盖、大脑脚),脑干和小脑
只在队列2A中才检查眼(视网膜和视神经)和周围神经、肌肉和脊髓
所 有的神经组织学检查程序应与指导文件426一致1" 4.7.7.2.2对具有代表性的大脑区域(基于可靠的微观标志仔细选择同质部分)进行形态学评价(定 量),评价应包括特定大脑区域线性和/或区域性的测定
每种标志(每个水平)至少选择3个连续的部 分,选出最具同质性和最能代表特定大脑区域的部分进行评价
神经病理学家应对所测定部分与其他 a[36] 样本集中间的同质性及能否纳人做出合适的评价,因为线性测量尤其可能相对短距离内出现变换 不使用非同质部分
然而如果目的就是采集所有动物样品进行形态学评价(每个剂量水平每个性别 10只),那么数量少些也可以
如果每个剂量水平每个性别少于6只,对于本标准来说将不足以评价 运用体视学方法确定染毒相关的参数影响如特定神经解剖学区域体积和细胞数量)
组织样品的所有 前处理(从组织固定到组织样品分离、组织处理和载玻片染色)应平行设计,这样每批都包含每个染毒组 代表性的样品
当应用形态学或体视学分析时,应在同一时间将所有剂量水平的大脑包埋到合适的介 质中避免长期固定引起人为组织收缩
5 报告 5.1数据 5.1.1按个体报告数据并摘要列表
每个试验组和每一代应报告试验起始动物的数量,试验期间死亡 或动物福利原因处死的动物的数量及时间,可生育的动物数量,妊娠雌性的数量,生出幼鼠的雌性数量 出现毒性体征的动物数量
对毒性的描述,包括起始时间、持续时间及严重性
5.1.2采用合适的,公认的统计学方法评价数值结果
方法的选择应作为试验设计的一部分,同时妥 当的处理非正态数据(如计数数据),删失数据(如观察时间有限),非独立数据(如窝别效应和重复测 定),以及方差不齐数据
广义线性混合模型和剂量-效应模型覆盖一大类分析工具,或许适用于本标准 11
GB/T35525一2017 的数据
报告应包含分析方法的充分信息以及应用的计算机程序以便独立的审核人/统计学家能够评 价/重新评价统计分析
5.2结果评价 根据观察到的效应,包括大体解剖和显微镜下观察进行结果评价
评价包括剂量与异常情况出现、 发生、严重程度之间的关系,以及与大体损伤之间的关系
也应评价靶器官、临床异常、繁殖和生育功 能、体重改变、死亡率以及其他的毒性和发育影响
尤其应关注性别特异性的改变
评价试验结果时还 应考虑受试物的物理化学性质,毒物动力学数据(包括胎盘转运和母乳分泌) 5.3试验报告 5.3.1基本要求 试验报告应包括本研究获得的亲代,F1代和F2代(如果有)的信息
5.3.2受试物 受试物应包含下列信息 所有受试物相关信息,受试物的毒物动力学和毒作用性质 a) b)标识数据 c 纯度 5.3.3溶剂(如果有 选择除水之外其他溶剂的理由; 5.3.4实验动物 实验动物应包含下列信息 使用的种属和品系 a 动物的数量、鼠龄和性别; b 来源、饲养条件、饲料、做窝物料等; c d 试验开始时动物个体的体重; 染毒开始之前亲代雌性的阴道涂片数据 e 亲代配对记录(表明交配对象以及交配成功情况); f) 成年F1代动物来自哪个窝别的记录; g 5.3.5试验条件 试验条件应包含下列信息， a 选择剂量水平的理由; b 详细的受试物配方/饲料前处理,达到的浓度; c 受试物在溶剂或介质中(如饲料、饮水)的稳定性和均一性;以及血液和/母乳中的稳定性和均 -性; d 受试物染毒的细节; 将饲料/饮水中受试物浓度(mg/kg饲料或mg/L饮水)转换为染毒剂量的方法[mg/kgd] e fD 饲料和饮水质量的说明(包括饲料成分); 详细描述剔除子代以及分配子代到试验组的随机程序; 8 12
GB/35525一2017 h) 环境条件; 研究人员清单(包括专业培训). iD 5.3.6结果(按性别和剂量获得的数据 结果应包含下列信息; 亲代和F1代动物的饲料和饮水消耗量,食物利用率(每消耗一克饲料增加的体重,除了同笼 和交配期),受试物消耗量(经饲料/饮水染毒); 22 吸收数据(如果有用); 亲代体重数据; 3 所选F1代断乳后的体重数据; 研究期间动物死亡的时间或者是否动物存活到试验结束; 6 血液学、尿液分析以及临床生化数据(包括TSH和T4):; 脾细胞表型分析(T细胞,B细胞及NK细胞): 骨髓细胞结构; 8 9 毒性反应数据; 0有正常或异常发情周期的亲代和F1代雌性的数量 11交配时间(性交前时间间隔,从配对到交配成功的天数); 12对繁殖的毒性或其他影响包括完成交配、奸娠、分娩及哺乳的动物数量及百分数,使雌性受孕 的雄性动物数量及百分数,难产:/滞产的雌性动物数量及百分数 13妊娠和分娩持续时间 14着床数、窝的大小、雄性子代百分比; 15着床后丢失,出生存活及死产的数量和百分数; 16窝重和子代体重数据(雄性、雌性和所有子代),剔除发育不良幼鼠的数量; 17大体可见异常的子代数量 18) 对子代出生后生长和生存力的青性或其他影响等 19子代体格检查标志性数据和其他出生后发育数据; 20F1代动物的性成熟数据; 21幼鼠及成年动物功能方面的观测数据; 22亲代和成年F1代动物处死时的体重,器官绝对和相对质量的数据 23尸体剖检的发现; 24详细描述所有组织病理学发现; 亲代和代雄性附睾尾总体精子数量各级精子活动度的比例,形态学正常的精子百分数 25 异常精子的百分数; 26亲代和F1代雌性卵巢中卵泡的数量及成熟阶段 27)F1代雌性卵巢中黄体的数量; 28结果的统计学处理
5.3.7队列2参数 队列2参数包括: 详细描述标准化的观察和操作程序,以及观察评分的定义 a b)所有试验程序的列表和选用理由; 13
GB/T35525一2017 详细说明使用的行为/功能、神经病理学和形态学测定程序,包括自动分析仪器的信息和说明; c d) 校正和确保仪器等效的程序和受试物各处理组的平衡; 涉及专业判断的简短合理的解释 e f 按照性别和剂量详细描述所有的行为/功能、神经病理学和形态学测定的发现包括与对照相 相比是增加或减少; g 大脑质量; 由神经学标志和损害得到的任何判断,包括自发的疾病或情况 h 从标本中的发现制成的图像; 用低倍显微图像对用于形态学测定的截面的同质性进行评价 结果的统计学处理,包括分析数据的统计模型,以及结果(无论有无显著性差异); 按照性别和剂量组,任何其他毒性效应与受试物潜在神经毒性这一结论的关系; m 任何毒物动力学信息对结论的影响; 试验方法可靠性和敏感性的支持性数据(也就是阳性数据和历史对照数据); n 神经病理学和功能影响的关系; o 按照性别和剂量组,雌性亲代和子代的NOAEL.或基准剂量; p 根据结果对数据的全部解释进行讨论,包括受试物是否引起神经发育毒性及其NOAEL 5.3.8队列3参数 队列3参数包括: 血清IgM抗体滴度(对绵羊红细胞SRBC或血蓝蛋白KLH的致敏作用),或脾脏IgM溶血空 a 斑形成细胞数(致敏绵羊红细胞); b)对于首次建立丁细胞依赖性抗体试验TDAR方法的实验室,应将执行过程作为试验优化的 部分,所有实验室定期优化(如每年); 对结果的全面解释和讨论包括受试物是否引起免疫发育毒性及其NoAEL. 5.4结果讨论 结论,包括亲代和子代各种效应的NOAEL;也应提供对解释结果有用的其他信息(如任何已知神 经毒物类似的效应)
5.5结果解释 5.5.1暴露效应信息 扩展的一代繁殖毒性研究可提供所有繁殖周期不同阶段受试物重复暴露效应的信息
尤其应提供 受试物对子代(一直到PND90)生殖系统、发育、生长、生存及功能等终点影响的信息
5.5.2受试物相关信息 解释结果需要考虑受试物所有的可用信息,包括物理化学性质,毒物动力学和毒作用性质,结构类 似物可用的相关信息,受试物以往研究的结果(如急性毒性,重复剂量毒性研究,代谢研究,评估体内体 外受试物代谢特征种属差异的定性定量研究)
应该把本试验大体解剖和器官质量的结果与其他重复 剂量染毒研究的观察结果相比较
子代生长减缓可考虑可能与受试物影响母乳构成有关系[G们
5.5.3队列2(神经发育毒性 根据所有的发现并运用专家判断证据权重的方法进行神经行为和神经病理学结果解释
如果存在 14
GB/35525一2017 行为模式或形态学的发现,同样应讨论剂量-反应的证据
神经发育毒性的评价应包括人类流行病学研 究或病理报告,实验动物研究(如毒物动力学数据,结构活性信息,其他毒性研究的数据)
评价还应包 括神经病理学与行为改变之间的关系
对神经发育毒性的解释可参考指导文件426][ 5.5.4队列3(发育免疫毒性 5.5.4.1通过T细胞依赖性抗体应答试验评价免疫功能,其抑制或增强应根据所有进行的观察来判 断
TDAR试验结果意义可通过对其他免疫相关指标的影响证实(如骨髓细胞结构,淋巴组织的质量 和组织病理学,淋巴细胞亚群分布)
如果在更低的暴露浓度下观察到其他的毒性,那么通过TDAR观 察到的效应就不太重要
3[33 5.5.4.2在解读繁殖和神经毒性结果时,应参考oECD指南文件43 15
GB/T35525一2017 附 录 A 资料性附录) 功能性观察试验组合包含的观察和检查项目 功能性观察试验组合包含的观察和检查项目见表A.1
表A.1功能性观察试验组合包含的观察和检查项目(队列2A 笼内和开放平台 试验操作方面 生理方面 姿势 易于移位 体温 不自主痉挛 易于抓取 体重 眼脸闭锁 肌张力 瞳孔反射 竖毛 趋向反射 瞳孔大小 触摸反射 流涎 听觉反射 流泪 鸣叫 尾部夹痛反射 直立 翻正反射 步态异常 前肢握力 觉醒 后肢握力 刻板动作 异常行为 污浊 呼吸异常 16
GB/35525?2017 al [1]OECD2011).GuidanceDocumentontheCurrentImplementationofInterne TigEerss in theExtendedOneGeneration tiveTo StudyintheUnitedStatesandCanada,Serieson Reproduct )xicity ssessmentNo.l17,ENVJM/MONO(2011)21 Tes eetingandA OECD(1996).CombinedRepeatedDoseToxicityStudywiththeRe oduction/Developmen Repro alToxieityser Test,OECDGuidelineforTesting ChemicalsNo.422. reeing [3 OECD2007).UterotrophicBioassay Rodents: ScreeningTestforOestro enicProperties,OECDGuidedlineforTestimg [4]OECD2009),HershbergerBioassay ShorttermSereeningAssayforAnti)An RatS; drogenicProperties,OECDGuidelinefor hemicals,No.441 OECD2011).Guidance 443;ExtendedOneGenerationRepro [5 SuppOrtlng No.151 ductiveToxieityStudy,SeriesonTesting )enJE,SetchellKD KB,LocklearJ,SpahrT,LevinessGF,GoelzMF,Hase- [o]Tbge manJK,NewboldRR,Forsythe PhytoestrogenContentofPurifiedOpenandClosedFor mulaIaboratoryAnimalDiets.Iab 49(5);530-536 SaundersHE,CavinessGF,KisslingGE,Grant ThigpenJE,Setchel ContentbetweenDiferentMiDatesofthe MG,ForsytheDB.2007).Variations VaginalOpeninginCD1MiceandF344 Time SameDietProducesSignifieantDifferences 1n Th Ot RatsbutnotinCDSpragueDawleyRats.Environmentalhealthperspectives;l15(12),1717-1726. [8ZoetisT,WallsI,2003.PrinciplesandPracticesforDirectDosingofPre-WeaningMammals inToxiceityTestingandResearch,IlSIPress,washington,DC 2005).DirectDosingofPreweaningRodentsinToxicityTes L9MoserVC,I.Walls,Zoetis ingandResearch:DeliberationsofanILSRSIExpertWworkingGroup.InternationalJournalofToxi cology;24(2):87-94 [10]ConollyRB,BeckBD,GoodmanJI.(1999).SimulatingResearehtolmprovetheSeientific BasisofRiskAssessment.ToxicologicalSciences;49(1 [11]UIbrichB,PalmerAK.(1995).DeteetionofEffeetsonMaleReproduetion-aLiteratureSur vey.JournaloftheAmericanCollegeofToxicologists;l4(4);293-327 [12]Mangelsdorf1,BuschmannJ,OrthenB.(2003).SomeAspeetsRelatingtotheEvaluationof theEffeetsofChemicalson Fertility.RegulatoryToxicologyandPharmmacology;37(3):356-369. [13] MMitsumori Y sakaiT,TIakahashi ,MsyaharaHohno Yasuhara KawashimaK 200).colaboratve worktoevaluatetoxieityonmalereproductiveorgansbyrepeateddosestudiesin rats-overviewofthestudies.Journal ToxicologicalSeiences;25:l-21. [14]Creasy DM.(2003).EvwaluationofTestieularToxicology;ASynopsisandD iscussionofthe thology.68(5):408-415. RecommendationsProposedbytheSocietyofToxicologicPat [15]GoldmanJIM.Mu urrAs,BuckalewAR,FerrellJM,co CooperRL.(2007).TheRodentEstrous yele.(CharacteriationofVaginalCytoloegyanditsUtiltyinToxicologiealstdites.BirthDetfetsRe searchBDevReproe odToxicol;802)84-97. [16]SadleirRMFS.1979).Cyclesand seonsinRAustonandRsShortcds) Reproduetio ioninMammals;l.Ge eermCelsandFertilization,Cambridge,NewYork DG,Kt the [[17]GallavanRHJr,HolsonJF,Stump nappJF,ReynoldsVL.(1999).Interpreting 17
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化学品扩展的一代繁殖毒性试验GB/T35525-2017
一、引言
化学品是现代工业生产中不可或缺的一部分，但是它们也可能对人类和环境造成危害。因此，在生产和使用化学品时，需要进行相关的毒性试验来评估其安全性。
二、扩展的一代繁殖毒性试验
扩展的一代繁殖毒性试验是一种旨在评估化学品对生殖和发育的影响的试验方法。这个试验方法包括以下几个方面：
- 通过对小鼠进行处理，观察其产仔情况、生存率和体重等指标。
- 对所产下的第二代小鼠进行观察，以评估化学品对其生殖和发育的影响。
- 研究化学品对DNA损伤的影响。
三、试验规范
为了确保化学品扩展的一代繁殖毒性试验的科学性和可靠性，国家制定了相关的试验规范。其中，GB/T35525-2017为化学品扩展的一代繁殖毒性试验规范。
该规范主要包括以下内容：
- 试验前的准备工作
- 试验方法和步骤
- 试验数据处理和分析
- 报告编写要求等
通过遵循这些规范，可以确保试验过程的科学性和可靠性。
四、结论
化学品扩展的一代繁殖毒性试验是评估化学品安全性的重要手段之一。但是，在进行试验时，一定要遵循相关的规范，以保证其科学性和可靠性。
