苏云金芽胞杆菌原粉

苏云金芽胞杆菌原粉

国家标准 GB/T19567.1一2004 芽胞杆菌原粉 Bacillusthuringgiensistechnical 2004-06-22发布 2004-12-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 小 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T19567.1一2004 前 言 苏云金芽胞杆菌(Bacilwsthuringiensis,B..)是目前应用最广泛的一种微生物杀虫剂,它的主要 杀虫成分是伴胞晶体中的毒素蛋白,其中,本标准所检测的对鳞翅目害虫有毒力的毒素蛋白的相对分子 量为130kDa 生物测定中甜菜夜蛾用于检测对鳞翅目贪夜蛾属害虫有特性的苏云金芽胞杆菌原粉的 毒力,小菜蛾和棉铃虫用于检测对苏云金芽胞杆菌鳞翅目害虫有活性的苏云金芽胞杆菌原粉的毒力 本标准是根据我国以往制定的苏云金芽胞杆菌行业和企业标准等有关材料,结合我国的实际情况 制定的 本标准对苏云金芽胞杆菌原粉的要求,试验方法、抽样以及包装、运输等作了具体要求和规定,从而 为苏云金芽胞杆菌生产提供了统一的技术依据 本标准的附录A是资料性附录,附录B是规范性附录 本标准由农业部提出 本标准起草单位;农业部农药检定所、华中农业大学微生物农药国家工程研究中心,湖北省生物农 药工程研究中心 本标准主要起草人:姜辉、喻子牛、陈守文、王开梅、王晓军、吴新平、顾宝根 本标准由农业部农药检定所负责解释
GB/T19567.1一2004 苏云金芽胞杆菌原粉 范围 本标准规定了苏云金芽胞杆菌原粉的要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮运 本标准适用于防治鳞翅目害虫的苏云金芽胞杆菌原粉 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T1250极限数值的表示方法和判定方法 GB/T1600一2001农药水分测定方法 GB/T1601农药pH值的测定方法 GB/T1604商品农药验收规则 GB/T1605一2001商品农药采样方法 GB3796农药包装通则 GB/T161501995农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法 要求 3.1外观:灰白色或棕褐色粉末 3.2苏云金芽胞杆菌原粉应符合表1要求 表1苏云金芽胞杆菌原粉控制项目指标 指 标 顶 目 B.t.a B.t.k 等品 合格品 -等品 合格品 毒素蛋白(130kDa)/(% 8.0 7.0 7.0 6.0 50000 40000 毒力效价(P.r.,H.a,)/(lU/mg 毒力效价(S.e.)/(IUn 60000 50000 //mg pH值 5.5~7.0 水分/% 6.0 细度(75Am)/%) 98 注1，Pr.,H.d 和s. .分别为小菜蛾(Puela.zywela),棉铃虫(Helohisarwigera)和甜菜夜蛾(s" dopleruerigu)缩写 注2:B.1.4为苏云金芽胞杆菌泽亚种;B.1.人为苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种 试验方法 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,所述溶液均为水溶液
GB/T19567.1一2004 抽样 按照GB/T1605一2001中“商品原药采样”进行,用随机数表法确定抽样的包装件,最终抽样量不 少于100g 4.2毒素蛋白含量 用十二烧基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶图像处理法进行测定 4.2.1方法提要 用碱性溶液处理苏云金芽胞杆菌原粉中的伴胞晶体,使其降解为毒素蛋白,然后通过SDs-PAGE， 依蛋白质相对分子质量的差异,使毒素蛋白与苏云金芽胞杆菌杂蛋白分离,之后用电泳图像扫描蛋白区 带面积,进行定量 4.2.2仪器设备 电泳仪; a b)双垂直式电泳槽(1.5mm凹形带槽橡胶模框),凝胶板面积170mm×170mm(1.5 mm,20孔 样品槽模具). 电泳凝胶成像系统; c d)离心机:l0000r/min; 分析天平;精确至0.0001g e 试剂和溶液 4.2.3.1过硫酸APS) 十二婉基硫酸钠(sDS) 4.2.3.3四甲基乙二胺(TEMED) 4.2.3.4氢氧化钠 30%丙烯酰胺凝胶母液称取丙烯酷胺30g,亚甲基双丙烯酰胶<原称;甲叉双内烯毗胺》 4.2.3.5 .8g.溶于100mL蒸僧水中,过滤,于4C暗处贮存备用 4.2.3.6分离胶缓冲液;称取三羚基甲基氨基甲婉(Tris)18.17g和sDs0.4g溶于蒸水中,用浓盐 酸调至pH8.8,用蒸水定容至100ml 浓缩胶缓冲液;称取Tris6.06g和sDs0.4g溶于蒸憎水中,用浓盐酸调至pH6,8,用蒸懈 水定容至100mlL 4.2.3.8电极缓冲液;称取Tis3.036g甘氨酸14.42g.SDs1g,用水溶解并定容至1000ml 4.2.3.93×样品稀释液:1mol/ ,pHG.8TtislHCl18.75mLsDs6只甘油30mL,摧基乙醉 15ml,少许澳酚蓝,用蒸水定容至100mL 4.2.3.10固定液;量取95%乙醇500mL,冰乙酸160mL,用蒸水定容至1000ml 4.2.3.11染色液;称取考马斯亮蓝(CBB)R-2501g,加人95%乙醇250mL,冰乙酸80mL,燕水定 容至1000ml,溶解过滤后使用 4.2.3.12脱色液;量取95%乙醇250mL,冰乙酸80ml,用燕僧水定容至1000ml 4.2.3.13毒素蛋白标样毒素蛋白相对分子量为130kDa)含量为8.0%的原粉 4.2.4样品处理 称取标样,试样各20.0mg(精确到0.1mg),移至1.5mL离心管中,加1mL.水充分悬浮 取 100L加人另一1.5mL离心管,加人0.5mol/L氢氧化钠溶液25L使氢氧化钠溶液的终浓度为 0.1mol/L),放置约5min,再加人3×样品稀释液75AL,使最终体积为200AL,于100C沸水中煮沸 6min,离心(2000r/min)10min后取上层清液,以备电泳上样 4.2.5SDs-PAGE分离毒素蛋白 4.2.5.1制备8%10%聚丙烯酰胺凝胶 采用不连续缓冲系统,制胶方法参见附录A(资料性附录)
GB/T19567.1一2004 4.2.5.2上样 取上述标样溶解液上层清液,于聚丙烯酰胺凝胶的上样孔中分别上样6,8、10,12,l4L(毒素蛋白 含量约为34g~74g),作为标准曲线;再取一定体积的试样溶液上层清液(毒素蛋白含量约为54g),加 人到上样孔中,注人电极缓冲液后,接通电源 4.2.5.3电泳 电泳初期电压控制在100V左右,待试样进人分离胶后,加大电压到170V,继续电泳,当指示剂前 沿到达距底端1cm左右时停止电泳,取出胶板,在7.5%体积分数)乙酸中浸泡30min. 4.2.5.4染色 将分离胶部分取下,用考马斯亮蓝(CBB)R-250染色液染色过夜 4.2.5.5脱色 倒去染色液,先用漂洗液洗涤凝胶,然后加人脱色液，37C保温脱色,更换几次脱色液，至背景清晰 为止 4.2.6测定 胶板经脱色后,可清晰地看到分子量为130kD蛋白区带,用凝胶成像系统对凝胶进行分析 样品中毒素蛋白的百分含量(X)按式(1)进行计算 X=- X"xI0 式中 M 由标准蛋白回归曲线计算得到的蛋白量; 样品的浓度; 样品的加样体积 样品的稀释倍数 n 4.2.7允许差 取其算术平均值为测定结果 两次平行测定结果相对偏差小于等于5% 毒力效价的测定 按附录B规范性附录)进行 pl值的测定 按GB/T1601测定 细度的测定 按GB/T16150一1995中2.2进行测定 水分的测定 按GB/T1600一2001中“共沸蒸馏法”进行测定 检验规则 需符合GB/T1604有关规定 极限值按GB/T1250处理 标志.标签,包装、贮运 6. 产品包装应符合GB3790规定,同时注明所用标准编号及检测所用试虫 原粉主要采用塑料袋包装,密封 贮存时严防日晒,勿受压,置于阴凉干燥处 6.3 运输时注意轻放,防止损坏 保证期在正常贮运条件下,原粉质量保证期从生产日期算起为两年,产品出厂时毒力效价和毒素 6.5 蛋白的含量不低于3.2指标,两年内产品毒力效价和毒素蛋白的含量不低于3.2指标的70%
GB/T19567.1一2004 附 录 A 资料性附录 电泳凝胶的制备 制板 A.1 本实验选用双垂直电泳槽,具体操作根据实验室条件而定 基本操作是根据电泳槽高矮大小,选择 两块大小一样的玻璃板,其中一块端部带有2 -3cm高的凹槽 两块玻璃板洗净干燥后,在无凹槽 cm 的玻璃板两边各放一条“间隙条”塑料条、胶条都可以,其宽度,厚度根据需要而定),然后放上带凹槽的 玻璃板,用夹子将两块玻璃板固定,这样两块玻璃板之间就形成了一定的间隙 形成的间隙下端应该封 闭以防灌人的胶液漏出 一般用胶纸条封闭,待灌人的胶凝固后,再撕去胶纸;或用1%1.5%浓度 的琼脂封闭,方法是;在琼脂中加人电极缓冲液或燕僧水,在沸水浴中加热溶解,将带有间隙的玻璃板装 置垂直放在一个高3cm、宽3cm、比玻璃板宽而长的一个小槽内(商品电泳槽有配套装置),趁热将溶解 的琼脂胶灌人小槽内,待冷却后取出,玻璃板装置下端即封严,可进行灌注聚丙烯酰胺胶液 制备分离胶 从冰箱中取出制胶试剂,平衡至室温 按表A.1配方配制分离胶 本试验中分离胶浓度为7.5% 按表A.1配方将胶液配好,混匀后,迅速注人两块玻璃的间隙中,至胶液面离玻璃板凹槽3cm左 右 然后在胶面上轻轻铺1emm高的蒸水,加蒸水时通常沿玻璃板慢慢加人,勿扰乱胶面 垂直放 置胶板于室温,lh左右使之凝聚 此时在凝胶和蒸水之间可以看到很清晰的一条界面 然后倒掉 胶面上的蒸水 A.3制备浓缩胶 用量根据实际情况而定,制备方法按表A.1配方配制 按表A.1配方将胶液混合,取少量灌人玻璃板间隙中,冲洗分离凝胶面,而后倒出 将余下的胶液 注人玻璃板间隙间,使胶液液面与玻璃板凹槽处平齐,而后插人“梳子”(样品槽模板),在室温放置 20min30min 浓缩胶即可凝聚 凝固后,慢慢取出“梳子",取时应防止把胶孔弄破,取出“梳子”后在 形成的胶孔中加人蒸水,冲洗未凝聚的丙烯酰胺等,倒出孔中蒸馏水,再加人电极缓冲液 将灌好胶的玻璃板垂直固定在电泳槽上,带凹槽的玻璃板与电泳槽紧贴在一起,形成一个贮液槽 向其中加人电极缓冲液,使其与胶孔中的缓冲液相接触 在电泳槽下端的贮液槽中也加人电极缓冲液 表A.1SDs-PAGE凝胶的配方 存液 浓缩胶 分离胶 30%丙烯酰胺母液 18ml 2ml 分离胶缓冲液 18ml 浓缩胶缓冲液 4.5ml 11.5ml 35 双蒸水 ml 0%过硫酸胺(APs) 0.5m 0.1ml 四甲基乙二胺(TEMED) 0.1ml 0.02ml
GB/T19567.1?2004 ? B 淶?? Ч??? B.1Ч???С?(Plutellaxylostella)??? 1.1? B. ??:CS-1995,H,20000IU/mg С??:Plutella.zyostella ?ò? ?:?á ?C?, ?;??300g/em : : ?-80:?3.5X10-nm'/s?5.5X10-'m/s ?;??,80C,?,80?? ; ??CF-11 : : 15%?:??)95%? 0%??;?()? ?;(BR?)2g,0.001mol/L2ml,8ml??, ??;?8.5g,6.0g,3.0g,?-80?0.lml? 1000ml B.1.2,.豸 ??;250mL, ?;?0.1mg 綯;?,10r/min?6o0r/min. ? ??? ?? :9em2.5cmm С?:50m ?:500mL ?:18mmX180mm :?5mm ?:l0ml,5mL.2mL,lml B.1.3? B.1.3.1??
GB/T19567.1一2004 B.1.3.1.1标准品 用分析天平准确称取标准品100.0mg~150.0mg(精确到0.1mg),放人250mL装有10粒玻璃 珠的磨口三角瓶中 加人100mL磷酸缓冲液,浸泡10min,在振荡器上振荡3min,得到浓度为 1mg/mL的标准品母液(该母液在4C冰箱中可存放10天) 然后将标准品母液稀释成浓度为1.000、 0.500,0.250,0.125,0.0625,0.0313mg/mL六个稀释感染液 B.1.3.1.2原粉样品 称取相当于标准品毒力效价的样品适量(精确到0.2mg),加100mL磷酸缓冲液,然后参照标准品 的配制方法配制样品感染液 对有些效价过高或过低的样品,在测定前需先以3个距离相差较大的浓度做预备试验,估计致死中 浓度(LC值)的范围,据此设计稀释浓度 B.1.3.2感染饲料的配制 饲料配方:维生素c0.5g.干酪素溶液10mL.菜叶粉3.0g,酵母粉1.5g,纤维素粉1.0g,琼脂粉 2.0g,蔗糖G.0g,菜籽油0.2mL.,10%甲醛溶液0.5mL,15%尼泊金1.0mL,燕僧水100ml 将蔗糖、.胖母粉、干酪素溶液、.琼脂粉加人0ml的疾溜水中调匀 搅拌煮沸,使琼脂完全溶化,加 人尼泊金搅匀 将苏云金芽胞杆菌成分用剩余的10n蒸溜水调成糊状 当琼脂冷却至5C左右时 与之充分混合,搅匀句,置C水浴锅中保温备用 取:0mL烧梆了只,写好标签置C水浴中预热， ,分 别向每个烧杯中加人lnml对应浓度的感染液,以缓冲液作空白对照 向每个烧杯中加人9ml溶化的 感染饲料,用电动搅拌器搅拌20s,使每个烧杯中的感染液与饲料充分混匀 将烧杯静置,待冷却凝固后,用医用手术刀将感染饲料切成1em×1em的饲料块 每个浓度取4 个饲料块分别放人4支养虫管中,每管放人一块,写好标签 B.1.3.3接虫感染 随机取已放置饲料的养虫管 每管投人10头小菜蛾三龄初幼虫,每浓度4管,塞上棉塞,写好标 签,在相同饲养条件下饲养 B.1.4结果检查及计算 感染48h后检查试虫的死亡情况 判断死虫的标准是以细签轻轻触动虫体,无任何反应者判为 死亡 计算标准品和样品各浓度的供试昆虫死亡率,查Abbott表或计算校正死亡率(X) 空白对照死 亡率10%以下需要校正,大于10%则试验结果无效 校正死亡率按式(B.1)计算 B.1 x，- xI% 式中 药剂处理死亡率; 空白对照死亡率 将感染液各浓度换算成对数值,校正死亡率转换成死亡几率值,用最小二乘法分别求出标准品 LC值和待测样品LC值,计算待测样品的毒力效价(X) 毒力效价按式(B.2)计算 S×P B.2 X 式中 S -标准品IC值; -标准品效价; -样品LC值
GB/T19567.1一2004 B.1.5允许差 毒力测定法允许相对偏差,但每个样品3次重复测定结果最大相对偏差不得超过20% 毒力测定 制剂各浓度所引起的死亡率应在10%90%之间,在50%死亡率上下至少各有两个浓度 B.2毒力效价测定方法以棉铃虫(Heiothisarmigeru)作试虫的测定方法 B.2.1试剂和材料 标准品:CS-1995,HHal,,20000IU/mg 棉铃虫幼虫:Heliothisarmigera 黄豆粉;黄豆炒熟后磨碎过60目筛 大麦粉;过60目筛 酵母粉;工业用 36%乙酸溶液:乙酸(化学纯),溶于蒸憎水 苯甲酸钠:分析纯 甲醛;分析纯 维生素C:医用,分析纯 琼脂粉;凝胶强度大于300g/cm 磷酸缓冲液:同B.1.1 B.2.2仪器、设备 分析天平;精确到0.1mg 电动搅拌器:无级调速,100r/min~6000r/min 微波炉或电炉 振荡器 水浴锅 组织培养盘;24孔 搪瓷盘;30cmmX20cm 磨口三角瓶;250nmlL,具塞 大烧杯:l000ml 小烧杯:50mL 试管:18mm×180mm 玻璃珠;直径5mm 注射器:50mL 标本缸 恒温培养箱 B.2.3测定步骤 B.2.3.1饲料准备 饲料配方;酵母粉12g,黄豆粉24g,维生素C1.5g,苯甲酸钠0.42g36%乙酸3.9nmL,蒸僧水 300ml 将黄豆粉、酵母粉、维生素C,苯甲酸钠和36%乙酸放人大烧杯内,加100mL蒸水湿润备用 将 余下200m蒸憎水加人琼脂粉内,在微波炉上加热至沸腾,使琼脂完全溶化,取出冷却至70C,与苏云 金芽胞杆菌成分混合,在电动搅拌器内高速搅拌1min,迅速移至60C水浴锅中加盖保温 B.2.3.2感染液的配制 称100.0mg150.0mg(精确到0.1mg)原粉样品,至盛有玻璃珠的磨口具塞三角瓶中,加磷酸缓 冲液100mL,浸泡10min,在振荡器上振荡1min即成母液 于分析天平上称取150.0mg300.0mg
GB/T19567.1一2004 标准品(精确到0.1mg),如上法制成母液 将样品和标准品母液用磷酸缓冲液以一定的倍数等比稀 释,每个样品和标准品至少各稀释5个浓度,并设一缓冲液作对照,每一浓度感染液吸取3mL至50mL 小烧杯内待用 对照吸取3mL磷酸缓冲液 B.2.3.3饲料和感染液的混合及分装 用注射器吸取27ml.饲料,注人上述已有样品或标准品感染液的烧杯内,以电动搅拌器高速搅拌 0.5min,迅速倒人组织培养盘上各小孔中(倒人量不要求一致,以铺满孔底为准) 凝固待用 B.2.3.4接虫感染 于26C一30C室温下,将未经取食的初孵幼虫(孵化后12h内)抖人直径20cm的标本缸中,静待数 分钟,选取爬上缸口的健康幼虫作供试虫,用毛笔轻轻地将它们移人已有感染饲料的组织盘的小孔内， 每孔一头虫 每个浓度和空白对照皆放48头虫,用塑料薄片盖住,然后将组织培养盘逐个叠起,用橡皮 筋捆紧,竖立放于30C恒温培养箱内培养72h B.2.4结果检查和统计分析 用肉眼或放大镜检查死、活虫数 以细签触动虫体,完全无反应的为死虫,计算死亡率 如对照有 死亡,可查Abbott校正值表或按式(B.1)计算校正死亡率 对照死亡率在6%以下不用校正,6% 5%之间需校正,大于15%则试验无效 将浓度换算成对数值,死亡率或校正死亡率换算成几率值,用 最小二乘法分别求出标准品和样品的LC值,按式(B.2)计算毒力效价 B.2.5允许差 毒力测定方法的允许相对偏差要求与B.l1.5相同 B.3毒力效价测定方法 -以甜菜夜蛾(Spodopteraexigua)作试虫的测定方法 B.3.1材料和试剂 标准品CS-2002,H,20000IU/mg 甜菜夜蛾幼虫:Sodoptera e.Z1g 黄豆粉黄豆炒熟后磨碎过60目筛 酵母粉(200目);工业用 维生索C;医用,分析纯 15%尼泊金;对羚基苯甲酸甲(化学纯)溶于95%酒精 10%甲醛;甲醛(分析纯)溶于蒸懈水 琼脂凝胶强度大于300g/em 蒸水 B.3.2仪器 分析天平;精确度0.1mg 电动搅拌器;无级调速,100r/min一6000r/min 微波炉或电炉 振荡器 水浴锅 组织培养盘;24孔 搪瓷盘;30em×20cm. 磨口三角瓶;250mL,具塞 大烧杯;1000mL 小烧杯;50m 试管:18mm×180mm 玻璃珠;直径5mm
GB/T19567.1一2004 注射器:50ml 标本缸 恒温培养箱 B.3.3测定步骤 B.3.3.1饲料配方 黄豆粉32g(60目),酵母粉16g(200目,琼脂6g,维生素C2g,15%尼泊金6.7mL,l0%甲醛 4ml.,水400mL 将黄豆粉、酵母粉、维生素C,尼泊金和10%甲醛放人大烧杯中,加人150mL水,混匀备用 将余 下的250ml.水加人琼脂,在微波炉上加热至沸腾,使琼脂完全溶化,取出冷却至70C 与苏云金芽胞 杆菌成分混合,在电动搅拌器内高速搅拌lmin,迅速移至60C水浴锅中加盖保温 B.3.3.2感染液的配制 称取CS,山-2002标准品150.0 一300.0mg(精确至0.Img),置于250m带有玻璃珠的三角瓶 mg 中,加人100ml磷酸缓冲液,浸泡10 1,在漩涡振荡器上振荡1min后即为标准品感染母液 称取 min， 100.0 mg~150.0mg原粉样品,置于250ml带有玻璃珠的三角瓶中,加人100mL 磷酸缓冲液,浸泡 10min ,在漩涡振荡器上振荡1 配制成样品感染母液 以两倍稀释法将标准品和样品母液稀释成 min -定浓度梯度,每个样品至少各稀释5个浓度梯度,每一浓度感染液吸取3ml 至50ml小烧杯中待 用 对照吸取3ml磷酸缓冲液 B.3.3.3饲料和感染液的混合及分装 用注射器吸取27nml饲料注人上述已有样品或标准品感染液的烧杯内以电动搅拌器搅拌 0.5min 1,迅速倒人组织培养盘上各小孔中(倒人量不要求一致,以铺满孔底为准) 凝固待用 B.3.3.4接虫感染 于26C30C室温下,将未经取食的初孵幼虫(孵化后12h内)抖人直径30cm的标本缸中,静待 数分钟,选取爬上缸口的健康幼虫作供试虫用毛笔轻轻地将它们移人已有感染饲料的组织盘的小孔 内.每孔一头虫 每个浓度和空白对照皆放48头虫,用塑料薄片盖住,然后将组织培养盘逐个叠起,用 橡皮筋捆紧,竖放于25C培养箱内培养72h B.3.4结果检查和统计分析 用肉眼或放大镜检查死、活虫数,以细签触动虫体,完全无反应的为死虫计算死亡率 如对照有死 亡,可查Abbott校正值表或按式(B.1)计算校正死亡率 对照死亡率在6%以下不用校正,6%~15% 之间需校正,大于15%则试验无效 将浓度换算成对数值,死亡率或校正死亡率换算成几率值,用最小 二乘法或有统计功能的计算器,分别求出标准品和样品的LC,按式(B.2)计算毒力效价 B.3.5允许差 毒力测定方法的允许相对偏差要求与B.1.5相同 B.4对掺入其他有效成分的可疑样品的检测 对于某些符合正文3 2分析指标的可疑样品,可通过测定原粉样品中胞晶混合物的毒力贡献率. 判定样品中是否掺人其他有效成分 B .4.1原粉中不同成分的分离 用丙酮将原粉稀释成10mg/m的溶液,4c下5000r/min离心10min保留沉淀组分,用等体积 的丙酮悬浮,再进行离心,共离心洗涤3次,保留沉淀组分;用等体积的蒸水悬浮沉淀组分,离心并保 留沉淀组分,共进行3次离心洗涤,保留沉淀组分,该沉淀组分即为原粉中的胞晶混合物 B.4.2毒力效价的测定 按B.1,B.2或B.3的方法,对单位质量原粉及原粉的沉淀组分(胞晶混合物)分别进行毒力效价 测定
GB/T19567.1一2004 B.4.3样品中是否掺入其他有效成分的判断 依据原粉中胞晶混合物的毒力贡献率(X.)来判断原粉样品中是否掺人其他有效成分 毒力贡献率按式(B.3)计算: B.3 X =一×100% 式中 单位质量原粉中胞晶混合物的毒力效价 单位质量原粉的毒力效价 若原粉中胞晶混合物的毒力贡献率小于70%,则判定此原粉样品不符合标准 1o