蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法紫外分光光度法

蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法紫外分光光度法

国家标准 GB/T23195一2008 蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法 紫外分光光度法 Methodforthedeterminationofcatalaseinbeepollen Utararioletspeetrophotometry 2008-12-31发布 2009-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23195一2008 前 言 本标准由中华全国供销合作总社提出并归口 本标准起草单位:广州市宝生园有限公司、华南农业大学 本标准主要起草人:郑尧隆、刘伟、陈伟彬
GB/T23195一2008 蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法 紫外分光光度法 范围 本标准规定了蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法 本标准适用于蜂花粉中过氧化氢酶的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696:1987,MOD 原理 过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度在一定范 围内随反应时间而降低,根据谢量吸光度的变化速度即可测定过氧化氢酶的话性 试剂 除非另有说明,在分析中仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682要求的蒸水或去离子水 4.1磷酸缓冲液;pH为6.87.0,浓度为50mmmol/L,含有1mmol/儿乙二胺四乙酸二钠(EDTA) 准确称取17.91gNa,HPO12H,O加燕馏水溶解并稀释至500mL,作为A液; 准确称取7.80gNaH,PO2H,O加燕水溶解并稀释至500mL,作为B液; 准确量取55.0mlA液与45.0mlB液于200ml烧杯中,加人0.07gEDTA,加燕水稀释混 匀加至150mL左右),用酸度计标定至6.87.0,转人200mL容量瓶中,定容至刻度,混匀 4.2过氧化氢溶液:体积分数为0.1% 准确吸取0.5ml30%过氧化氢置于50mL棕色容量瓶中,用磷酸缓冲液(4.1)定容至刻度,混匀 从中准确量取10.0ml于l00ml三角锥瓶(避光)中,再准确量取20.0ml的磷酸缓冲液(4.l)加人混 匀即得 4.3液氮 仪器设备 5.1紫外分光光度计 5.2冷冻离心机 5. 3 恒温水浴锅 酸度计 5. 5. 5 分析天平:感量0.1mg 5.6移液枪:100L,5000L 待测液的制备 称取1g样品,精确到1mg,置于已用适量液氮预冷的瓷研钵中,边加液氨边研磨,待样品充分研
GB/T23195一2008 磨后,静置至研钵解冻升温后加人约10mL新鲜配制的磷酸缓冲液(4.1)溶解,转人25mL容量瓶中 并用磷酸缓冲液冲洗研钵数次,合并洗液并定容至刻度 混合均匀后将容量瓶置4C冰箱中静置 30min h,取上清液在低温离心机4C、12000r/min的条件下离心15min,取澄清液即得待测液 分析步骤 7.1紫外分光光度计参数为;方式;时间扫描;波长;240nm;测定时间120s;读数间隔;5s 7.2将样液及过氧化氢溶液(4.2)分别置于40C恒温水浴锅中10min,准确吸取样液0.lml于石英 皿中,将石英皿放回槽中未放石英皿前仪器已消零),再准确吸取2.9mlL过氧化氢溶液(4.2)加人石 英皿中,混合均匀,立即开始读数 7.3从0s90s中截取线性较好的1nmin,计算其吸光度差值 计算与表述 以1min内过氧化氢在240nm波长下吸光度减少0.01的酶量为1个酶活单位(U) 过氧化氢酶 活性(U/g)按式(1)计算 A×V 过氧化氢酶活性 o.1XXV又m 式中: 结果中选取的1min吸光度差值; A 样液总体积,单位为毫升(mL); 240nm波长下吸光度每下降0.01为1个酶活单位(U); 0.01 1min; V,测定用样液体积,单位为毫升(mL); -样品质量,单位为克(g) 计算结果表示到整数位,报告结果为平行测定结果的算术平均值 允许差 同一实验室平行测定或重复测定结果相对标准偏差<10%