食品中淀粉的测定方法酶-比色法

食品中淀粉的测定方法酶-比色法

国家标准 GB/T16287一1996 食品中淀粉的测定方法 酶 比 色 法 Methodfordeterninationofstarchinfo0d- Enzyme-colorimetricnmethodl 1996-04-10发布 1996-12-01实施 国家技术监督局 发布国家标准

次 前言 范围 原理 试剂 仪器和设备 试样的制备 试液的制备 分析步骤 分析结果的表述 允许差 附录A(标准的附录》淀粉葡萄糖苷槲、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求,试验方法 及判定规则

GB/T16287一1996 前 言 食品中碗粉测定方法，一般采用化学方法酸水解法 由于酸水解淀粉时,样晶中的其他糖类被 分解为还原糖(单糖),造成淀粉的测定结果偏高，本标准采用酶比色法是在检索了近20年74篇国外 文献的基础上,经过反复实验、验证而制定的 要使食品中的淀粉含量测定准确,必须使淀粉完全溶解 本标准吸取了法国Cuher.J.C1982年总结的有效溶解方法,即二甲基亚碱法,达到了使淀粉完全溶解 的目的 淀粉酶解后的产物 葡萄糖的测定方法,与GB/T16285一1996保持一致 本标准的附录A是标准的附录 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口 本标准起草单位;农垦北方食品监测中心 本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核 本标准主要起草人张宗城、刘宁,郝湿

国家标准 食品中淀粉的测定方法 GB/T16287一1996 酶 比 色 法 Methodfordeterminaton.ofsarehinfood Enzyme-colorimetricmethod 范围 本标准规定了用酶-比色法测定食品中淀粉的方法 本标准适用于各类食品中淀粉的测定 本标准最低检出限量为0.09g淀粉)/mL(试液. 原理 淀粉在淀粉葡萄糖背酶(AGs)催化下,最终水解为葡萄糖 葡萄糖氧化酶(GoD)在有氧条件下,催 化D葡萄糖(葡萄糖水溶液)氧化,生成D葡萄糖酸-谷内脂和过氧化氢,.受过氧化物酶(POD)催化,过 氧化氢与4-氨基安替比林和苯附生成红色醋亚胺 在505n波长处测醋亚胺的吸光度,计算食品中淀 粉的含量 CH.O)十i0.,CH,O. GOD RcH.Q十H C,H.O,+O. H.O+CaHOH+C;H,N0c,H,NO+HO 试剂 3.1组合试剂盒 1号瓶内含淀粉葡萄糖苷酶(amyloglucosidase)20ou(活力单位)柠檬酸、柠檬酸三钠， 2 号瓶:内含0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.0)200mL,其中含4-氨基安替比林为 0.0015mol/儿L. 3号瓶:内含0.022mol/L苯酚溶液200mL; 4号瓶;内含葡萄糖氧化酶(elrcoeoxidae)800U(活力单位),过氧化物酶(辣根，peroxidae) 2000U(活力单位) 1,23.4号瓶须在4c左右保存 32酶试剂溶液 321将1号瓶中的物质用重燕溜水溶解,使其体积为66mL 轻轻播动(勿剧烈摇动),使酶完全溶 解 此溶液即为诧粉葡萄糖甘酶试剂溶液,其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1nmol/L,pH=4.6 在4c 左右保存,有效期1个月 3.2.2将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合 32.3将4号瓶中的腾溶解在3.2.2混合液中,轻轻摇动勿剧烈摇动),使阵完全帝解,即就翡精飘化 国家技术监督局1996-04-10批准 1996-12-01实施
GB/T16287一1996 酶-过氧化物酶试剂溶液 在4C左右保存,有效期1个月 3.3二甲基亚碱(分析纯) 3.46mol/L盐酸溶液 将12mol/儿盐酸(GB622,分析纯)与等体积重蒸水混合,摇匀 3.56rmol/L氢氧化钠溶液 称取24g氢氧化钠(GB629,分析纯),溶于1000mL重蒸溜水中,摇匀 3.6淀粉标准溶液 称取经100士2C干燥2h的可溶性淀粉(HGB3095,分析纯)0.2000g,溶于少量60C重燕水 中,冷却后定容至100mL,摇匀,将此溶液用重蒸水稀释V00一 一 丽,即2004g/mL淀粉标准溶液 仪器和设备 以 实验室常规仪器及下列各项 研钵或粉碎机 4？分析怖 43维织搞碎机 44 恒温水浴锅 45可见光分光光度计 4.6酸度计或H计 47孩最移液管,.0mL,精度o.aml 5 试样的制备 5.1固体样品 粉未状样品,取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于峦闭的玻璃容器内 颗粒状样品;取有代表性的样品至少200g,用粉碎机粉碎,或用研钵研细,通过100目分析筛,置于 密闭的玻璃容器内 5.2糊状样品 取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内 5.3固液体样品 取有代表性的样品至少200g,用组织捣碎机捣碎,置于密闭的玻璃容器内 5.4液体样品 取有代表性的样品至少200及,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内 试液的制备 6 用100mL三角瓶称取试样(5.1~5.4)0.22g(精确至0.0001g),加入20mL二甲基亚碱(3.3 和6nmo/儿盐酸溶液(3.4)5mL,于60士1C水裕锅中加热30nmin(每隔5min摇动一次) 冷却至室温 后,用6mol/几氢氧化钠溶液(3.5)和酸度计调整pH值至4.6左右 将溶液转移到250mL容量瓶中 用重蒸僧水定容至刻度,摇匀后用快速滤纸过滤 弃去最初滤液30mL,即为试液 试液中淀粉含量高于1000g/mL时,可以适当增加定容体积 分析步骤 7.1标准曲线的绘制 用微量移液管吸取Q.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL淀粉标准溶液(3.6),分别置于10mL比 色管中,各加入1L淀粉葡萄糖苷酶试剂溶液(3.2.1),摇匀,于58士2cC水浴锅中恒温20min,冷却至
GB/T16287一1996 室温,加入3mL葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液(3.2.3),摇匀,在36士1C水浴锅中恒温40min. 冷却至室温,用重蒸溜水定容至10mL,播匀 用1cm比色皿,以淀粉标准溶液含量为0.00的试剂溶液 调整分光光度计的零点,在波长505nm处测定各比色瞥中溶液的吸光度 以淀粉含量为纵坐标,吸光度为横坐标,绘制标准曲线 7.2试液吸光度的测定 用微量移液管吸取0.20一2.00mL试液6)(依试液中淀粉的含量而定),置于10mL比色管中 以 下按7.1步骤操作;但须用等量试液(6)调整分光光度计的零点 测出试液吸光度后,在标准曲线上查出 对应的淀粉含量 分析结果的表述 食品中淀粉的含量以质量百分率表示,按式(1)计算 X= OT×100- V m×铃×10000 m× 式中;X -样品中淀粉的含量,质量百分率,%; C一 标准曲线上查出的试液中淀粉含量，,Hg" 试样的质量g; 72" V 试液的定容体积,mL; -测定时吸取试液的体积,mL 计算结果精确至小数点后第二位 允许差 g 同一样品的两次测定值之差,不得超过两次测定平均值的5.0%
GB/T16287一1996 附录 A 标准的附录 淀粉葡萄糖甘辞、葡萄糖氧化翻、过氧化物辞的技术要求、,试验方法及判定规则 A1技术要求 A1.1酶活力 淀粉葡萄糖甘槲牌活力c/me)>2 葡萄糖氧化酶酶活力(U/mg):>20; 过氧化物酶酶活力(U/mg);>50 A1.2干扰酶 淀粉葡萄糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶、果糖苷酶、半乳糖苷酶和过氧 化氢酶 A2试验方法 用微量移液管吸取0.50mL淀粉标准溶液(3.6),置于10mL比色管中,加人100乳糖(HG3一 1000,分析纯),100g蔗糖(HG3-1001,分析纯)和100g纤维二糖(生化纯),再加入1mL淀粉葡萄 苷酶试剂溶液(3.2.1),以下按7.1步骤操作测定吸光度后,在标准曲线(7.1)上查出对应的淀粉含量， 按式(A1)计算淀粉的回收率: R= ×100 A1 0.5又20o 式中;R 淀粉的回收率,%; 淀粉的实测值,g A3判定规则 测得淀粉的回收率,如在95%~105%范围内,则判定淀粉葡萄糖苷酶、葡萄糖氧化酶和过氧化物 酶符合技术要求
GB/T16287一1996《食品中淀粉的测定方法 酶-比色法》第1号修改单 本修改单业经国家技术监督局于 1997年9月11日以技监国标函[1997]第200号文批准，自 1998年1月1日起实施 、3.5条第2行中的“溶于1000mL重蒸懈水中”更改为“溶于100mL重蒸懈水中” 二、7.2条改用新条文 “7.2试液吸光度的测定 用微量移液管取(0.202.00)mL(依试液中淀粉的含量而定)试液(6),置于10mL比色管中,以 下按7.1步骤操作;但须用等量试液(6)调整分光光度计零点,操作步骤如下 取等量试液(6)加人3mL葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液(3.2.3),摇匀,在(36士1)C水浴锅 中恒温401 冷却至室温,用重蒸圜水定容至10mL 用此溶液调整分光光度计零点 min 测出试液吸光度后,在标准曲线上查出对应的淀粉含量 ”
中 华人民共和国 准 标 国家 食品中淀粉的测定方法 酶 法 比 色 GB/T16287一1996 标准出版社出版发行 北京西城区复兴门外三里河北街16号 郎邮政编码:lIH5 http://www.bzcbs.com 电话: 63787337、63787447 3996年10月第一版2w5年1月电子版制作 书号;1550661-12952 版权专有侵权必究 GTT62871996 举报电话:01068533533