国家标准 GB/T30987一2020 代替GB/T30987一2014 植物中游离氨基酸的测定 Determinationoffreeaminaeidsinplant 2020-03-31发布 2020-03-31实施国家市场监督管理总局发布国家标涯花管理委员会国家标准
GB/T30987一2020 次目前言范围 2 规范性引用文件术语和定义全自动氨基酸分析仪法(第高效液相色谱法(第二法液相色谱-串联质谱法(第三法 13 附录A资料性附录氨基酸化合物信息及定量限附录B(资料性附录》21种氨基酸混合标准工作游液色谐图 18 附录C(资料性附录液相色谱-串联质谱参数参考条件
GB/30987一2020 前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准代替GB/T30987一2014《植物中游离氨基酸的测定》本标准与GB/T30987一2014相比,主要技术变化如下: -增加了液相色谱-串联质谱法(见第6章); 修改了方法灵敏度的表示方式(见4.5.5.6,5.5.6.4,2014年版的4.10,5.10) 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口本标准起草单位:测试技术研究院生物研究所、测试技术研究院、河北省食品检验研究院本标准主要起草人:李怀平唐祥凯、杨杰斌,邹燕、赵爱平,吴微、张岩本标准所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T309872014
GB/30987一2020 植物中游离氨基酸的测定范围本标准规定了植物中游离氨基酸含量的测定方法,包括全自动氨基酸分析仪法(第一法)、高效液相色谱仪法(第二法)和液相色谱-串联质谱法(第三法)三种方法本标准适用于茶叶、中药材、烟叶等植物样品中21种游离氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺,天冬氨酸、胱氨酸、丫-氨基丁酸、谷氨酰胺将谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸,亮氨酸、赖氨酸蛋氨酸,苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、茶氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缅氨酸)的测定规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法磨碎试样的制备及其干物质含量测定 GB/T83032013 茶术语和定义下列术语和定义适用于本文件 3.1 游离氨基酸freeamimoacids 植物中未与其他化学物质结合,以单个分子或离子形式存在,可被水溶液或其他溶剂直接浸提出来的氨基酸全自动氨基酸分析仪法(第一法 4.1原理样品中游离氨基酸经沸水提取后，经氨基酸分析仪的碱酸型阳离子交换柱分离后,在135C下加热,氨基酸与诙三酮混合反应,伯胺与诙三酮生成蓝紫色化合物,仲胺与诙三酮生成黄色化合物,分别在 570nm和440nm波长下通过可见光分光光度检测器检测两种衍生产物,保留时间定性,外标工作曲线法定量 4.2试剂或材料除另有规定外,本方法所用试剂均为优级纯水为符合GB/T6682规定的一级水 4.2.1柠檬酸锂(四水). 4.2.2氯化锂 4.2.3柠檬酸 4.2.4氢氧化锂 4.2.5酬氢化钠
GB/T30987一2020 4.2.6无水乙酸钠 4.2.7苗三酮 42.8 无水乙醇 429破代双么脖 42.10聚复么幅月桃睡 2 辛酸 4212荣甲w 213三帮甲胜 42.14冰乙脱 42.15氨基酸标准品;丙氨酸(Ala)精氨酸(Arg),天冬酰胺(Asn),天冬氨酸(Asp)、胧氨酸(Cys) y氨基丁酸(GABA),谷氨酰胺(Gln),谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(Hlis),异亮氨酸(Ile),亮氨酸(Leu),赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met),苯丙氨酸(Phe),脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser),茶氨酸(The),苏氨酸(Thr),酪氨酸(Iyr),绸氨酸(Val),化合物信息参见附录A中表A.l,纯度均>98% 4.2.16快速定量滤纸 4.2.170.45m水相滤膜 4.2.180.45丛m有机相滤膜 4.3仪器设备 4.3.1氨基酸自动分析仪;配备双通道可见光检测器、六元梯度分离系统和三元反应液输送系统分析天平;感量0.0001旦和0.01mg 4.3.2 4.3.340目筛;孔径0.425mm 移液器;量程分别为10L100L,20L一200L及100AL1000l 4.3.4 4.4样品样品按GB/T83032013中6.1和6.2规定制样,过40目筛充分混匀,装人洁净的盛样容器内作为试样,标明标识 4.5试验步骤 4.5.1标准溶液配制 4.5.1.1混合氨基酸标准储备液配制称取各氨基酸标准品适量(精确到0.01mg),用水溶解,配制成混合溶液混合标准溶液中的茶氨酸和其他20种氨基酸的浓度分别为5.004nmol/mL和1.25Mnmol/mL 储备溶液冷冻保存有效期为 1个月 4.5.1.2混合氨基酸标准工作液配制准确吸取2mL混合氨基酸标准储备液至5ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,混匀,即得到第一份标准溶液将第一份标准溶液用水逐级稀释,制成总共7个不同浓度的系列混合标准工作溶液 7个浓度的混合标准工作溶液中茶氨酸及其他20种氨基酸的浓度分别为:2000.00nmol/mL和 500.00nmol/mL,1000.00nmol/mL和250.00nmol/mL,500.00nmol/m和125.00 nmol/mL 250.00nmmol/ml和62.50nmol/mlL.125.00nmol/ml和31.25nmol/mlL,62.50nmol/ml和15.63nmol/ml. 31.25mol/ml和7.81nmol/ml,现配现用
GB/30987一2020 4.5.2流动相配制 4.5.2.1 流动相BpH2.8)配制称取柠檬酸锂(四水)5.73g,氧化锂1.24g,柠檬酸19.90g,溶于700ml水中,加人30.0ml无水乙醇,5.0mL硫代双乙醇,4.0mL聚氧乙烯月桂酥,再加人0.1mL辛酸,转移至1000mL容量瓶中用水定容,过0.45m水相滤膜,备用 4.5.2.2流动相B.(p3.7)配制称取柠檬酸锂《四水)9.80g,氧化锂.36g,柠檬酸12.00g,溶于700mL水中,加人30.0mL无水乙醇,5.0ml硫代双乙醇,4.0mlL聚氧乙烯月桂酥,再加人0.1mL辛酸,转移至1000mL容量瓶中用水定容,过0.45m水相滤膜,备用 4.5.2.3流动相B.pH3.6)配制称取柠檬酸锂四水)8.79g,氯化锂26.62g,柠檬酸11.27g,溶于700m水中,加人100mL无水乙醇,3.0mL苯甲醇,4.0mL聚氧乙烯月桂酥,再加人0.1mL辛酸,转移至1000mL容量瓶中,用水定容,过0.45m水相滤膜,备用 4.5.2.4流动相BpH4.1)配制称取柠檬酸锂四水)9.80g,氯化锂38.15g,柠檬酸3.30g,溶于700ml水中,加人4.0ml聚氧乙烯月桂酥,再加人0.1mL辛酸,转移至1000mL容量瓶中,用水定容,过0.45m水相滤膜,备用 4.5.2.5流动相B配制流动相B为经0.454m水相滤膜过滤后的水 4.5.2.6流动相B 配制称取氢氧化锂8.40g,溶于700mL水中,加人30.0mL无水乙醇,4.0mL聚氧乙烯月桂艇,再加人 0.1ml辛酸,转移至1000m容量瓶中,用水定容,过0.454m水相滤膜,备用 4.5.3柱后衍生化反应溶液配制反应溶液R，配制 4.5.3.1 称取茹三酮39.0g,溶于979mL乙二醇甲酥中,超声溶解5nmin,过0.454m有机相滤膜,加人翻氢化钠81.0mg,氮气鼓泡30min,放置过夜使用注:反应溶液R制备好后宜尽快使用完毕,不宜长期储存 4.5.3.2反应溶液R配制称取无水乙酸钠204.0g,加人300ml.水,123m冰乙酸,401mL乙二醇甲酗,超声至溶解,转移至1000ml容量瓶中,用水定容,过0.454m有机相滤膜,氮气鼓泡10min,备用 4.5.3.3反应溶液R，配制准确移取无水乙醇50mL于1000mL容量瓶中,用纯水定容至1000mL,混匀后过0.45um有机相滤膜过滤,备用
GB/T30987一2020 4.5.4试样提取准确称取样品(见4.4)约2.0g(精确至0.0001g)于250ml锥形瓶中,加人200ml沸水冲泡 95C水浴加热,每隔5min混匀一次,提取10min后取出,趁热抽滤,滤液冷却至室温后,用水定容至 250ml,混匀后取适量样品溶液,经0.45m水相滤膜过滤后待测 4.5.5测定 4.5.5.1 色谱柱碱酸型阳离子交换柱,34m,4.6mm×60mm ,或同等性能的色谱柱 4.5.5.2仪器分离体系运行参考条件流动相配制见4.5.2,流动相流速为0.35ml/min,流动相及柱温梯度参考条件见表1,仪器进样体积为20l 表氨基酸分析仪分离梯度条件程序流动相时间/min 柱温/C B/% B/% B/% B/% B/% B/% 38 0,0 100 30 2.0 100 30 21.5 100 80 20 60 21.6 32.5 70 30 60 60 32.6 l0 90 40 36.5 10 90 43.5 40 10 90 43.6 100 40 50.5 100 70 70 50.6 100 68.4 100 45 69.5 100 45 z 69.6 60 40 45 74.0 60 40 45 45 74.1 00 45 82.0 100 20 80 45 82.l 70 92.5 20 80 70 99.5 20 80 70 99,6 100
GB/30987一2020 表1(续流动相时间/min 柱温/ B/% B./% B/% B/% B/% B /9% 112.5 l00 70 112.6 100 70 121.5 00 70 121.6 100 70 38 148.0 100 4.5.5.3氨基酸反应检测体系运行参考条件反应液配制见4.5.3,反应柱温度为135C,反应液流速为0.30mL/min,反应液梯度参考条件见表2 检测器检测波长570nm和440nm 表2氨基酸分析仪反应体系条件程序反应溶液时间/nminm R/% R/% R/% 0.0 50 50 50 50 1l6.0 116.1 100 126.0 100 126.1I 50 50 148.0 50 50 4.5.5.4绘制标准工作曲线启动氨基酸自动分析仪,设定工作参数,待基线稳定后,分别吸取不同浓度的系列混合氨基酸标准工作溶液,注人氨基酸自动分析仪进行测定,分别得到21种氨基酸的峰面积分别以各氨基酸峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,建立标准工作曲线通过保留时间识别各氨基酸出峰顺序在上述条件(见 4.5.5.1一4.5.5.3)下,混合氨基酸标准工作溶液色谱图参见附录B中图B.1 4.5.5.5样品测定用氨基酸分析仪测定样品溶液,分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积,代人标准工作曲线计算含量以水作为空白样品,在相同测定条件下进行测定,计算空白样品中各氨基酸本底值样品测定值扣除空白样品中各氨基酸本底值,即得各样品中氨基酸净含量 4.5.5.6方法定量限方法定量限参见附录A中表A.1
GB/T30987一2020 4.6试验数据处理样品中各游离氨基酸含量的计算见式(1) c-c×V×M×10 W= ×100 m×mn 式中: W 试样中各氨基酸组分的含量,单位为毫克每100克(mg/100 g); 试样溶液中由标准工作曲线计算出的氨基酸浓度,单位为纳摩尔每毫升(nmol/ml); -空白试样溶液中由标准工作曲线计算出的氨基酸浓度,单位为纳摩尔每毫升(nmol/ml); 试样总体积,单位为毫升(mL) 氨基酸的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol); M 试样质量,单位为克(g); mm 试样干物率,测定方法见GB/T8303 mn 以两次测定的算术平均值作为测定结果,结果精确至0.01nmg/100g 4.7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的12% 5 高效液相色谱法(第二法) 5.1原理样品中游离氨基酸经6-氨基唾啾-N-胫基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯衍生,使之生成具有荧光的衍生物,经液相色谱分离,用荧光检测器测定,保留时间定性,外标工作曲线法定量 5.2试剂或材料除另有规定外,本方法所用试剂均为优级纯水为符合GB/T6682规定的一级水 5.2.1无水棚砂 5.2.2无水磷酸氢二钠 5.2.3无水磷酸二氢钾 5.2.4盐酸三乙胶 5.2.5磷酸 5.2.6乙腊;色谱纯 5.2.76-氨基唾啾-N-羚基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(CAs号148758-94-2):纯度>98% 5.2.8氨基酸标准品,见4.2.15 5.2.9快速定量滤纸 5.2.100,.45Am水相滤膜 5.2.110.454m有机相滤膜 5.3仪器设备 5.3.1高效液相色谱仪(HPLC);配备荧光检测器 5.3.2分析天平;感量0.0001只和0.01mg 5.3.3涡旋混匀器 5.3.4移液器;量程分别为10L100L,20AlL200L和100AL~1000L
GB/30987一2020 5.4样品见4.4 5.5试验步骤 5.5.1混合氨基酸标准工作溶液配制见4.5.1.2 5.5.2衍生试剂的配制 5.5.2.16-氨基麾啾-N-胫基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯溶液称取6-氨基隆啾-N-胫基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯3.0mg,用1.0ml乙晴溶解,加盖密封,涡旋混合10s,置于55C烘箱中加热,直到衍生试剂充分溶解,取出备用 5.5.2.2衍生用缓冲溶液配制 Am水相滤膜过滤称取无水朋砂10.06以,加水游解并定容至250ml,用磷酸副节pH至队.80.45" 后,即得0.20mol/L的酬砂盐缓冲液,备用 5.53流动相配制 5.5.3.1800mmo/L磷酸氢二钠储备液配制称取I13.58g无水确服氢二纳游解于80ml水中,加热游解冷却至室温后用水定容至1o0ml. 0.45m水相滤膜过滤后备用,溶液pH约为8.90 5.5.3.2800mmol/L，磷酸二氢钾储备液配制称取108.872只无水磷酸二氢钾,溶解于800mL水中,加热溶解,冷却至室温后用水定容至1000ml， 0.454m水相滤膜过滤后备用，溶液pH约为4.28. 5.5.3.31mol/L的盐酸三乙胺水溶液配制取137.650只盐酸三乙胺,用水溶解并定容至1000mL,0.45m水相滤膜过滤后备用 5.5.3.4流动相A(80mmol/1磷酸盐缓冲液)配制准确移取800mmol/L磷酸二氢钾储备液95mL,800mmol/I 磷酸氢二钠储备液5mL,1mol/I 的盐酸三乙胺水溶液10ml,54ml乙睛,于1000mL容量瓶中,用水定容至1000mL,混匀,超声脱气10min后备用 5.5.3.5流动相B(80mmol/L磷酸盐缓冲液)配制准确移取800mmol/L磷酸二氢钾储备液100mL到1000mL容量瓶中,加人水250mL,加人乙睛500mL,用水定容至10001 nmlL,混匀,超声脱气10min后备用 5.5.4试样提取见4.5.4
GB/T30987一2020 5.5.5衍生化操作移取制备好的样品溶液或标准工作溶液10AL于洁净的玻璃内插管中,加人衍生用缓冲溶液70L，然后加人衍生试剂20AL,涡旋混合10s,加盖密封于进样瓶中,在室温下静置1nmin,转移至55C烘箱中加热10min,取出待测 5.5.6测定 5.5.6.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下 ×250 色谱柱:Ca,5Mm,4.6mm mm,或同等性能的色谱柱; a b 流动相:具体梯度洗脱程序见表3 荧光检测器参数;激发波长250nm,发射波长395nm; c 柱温:35C; d 流速:lmL/min: e f 进样体积:5丛L 表3高效液相色谱法洗脱程序流动相时间/min A/% B/% 100.0 0,0 5 100.0 0.0 25 97.3 2.7 40 81.2 18.8 55 74.4 25.6 67 50.2 49.8 70 0,0 100,0 75 0.0 100.0 77 100.0 0.0 5.5.6.2绘制标准工作曲线启动高效液相色谱仪,设定工作参数,待基线稳定后,分别吸取不同浓度的系列混合氨基酸标准工作溶液,按照5.5.5规定进行衍生化操作衍生化完毕后,注人高效液相色谱仪进行测定,分别得到 21种氨基酸的峰面积分别以各氨基酸峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,建立标准工作曲线通过保留时间识别各氨基酸出峰顺序在上述色谱条件(见5.5.6.1)下,混合氨基酸标准工作溶液色谱图参见附录B中图B.2 5.5.6.3样品测定样品溶液与标准工作溶液在相同条件下进行衍生化和测定操作(衍生完毕的样品建议在48h内完成测定),分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积,代人标准工作曲线计算含量以水作为空白样品,在相同测定条件下进行衍生化和测定,计算空白样品中各氨基酸本底值样品测定值扣除空白样品中各氨基酸本底值,即得各样品中氨基酸净含量
GB/30987一2020 5.5.6.4方法定量限方法定量限参见附录A中表A.1 5.6试验数据处理样品中各游离氨基酸含量的计算见式(2) c一ci)×V×M×10 2 w= ×100 m×m 式中 W -试样中各氨基酸组分的含量,单位为毫克每100克(mg/100g). 试样溶液中由标准工作曲线计算出的氨基酸浓度,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL -空白试样溶液中由标准工作曲线计算出的氨基酸浓度,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL) Ck -试样总体积,单位为毫升(mL). 氨基酸的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol) M 试样质量,单位为克(g) 7 试样干物率,测定方法见GB/T8303 n！以两次测定的算术平均值作为测定结果，结果精确至0.01mg/100g 5.7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的12% 液相色谱-串联质谱法(第三法》 6.1原理样品经沸水浸泡提取后过滤,滤液经稀释后进样,液相色谱-串联质谱仪测定,外标工作曲线法定量 6.2试剂或材料除另有规定外,本方法所用试剂均为优级纯水为符合GB/T6682规定的一级水 6.2.1 甲酸铵 6.2.2浓盐酸 6.2.3甲醉;色谱纯 6.2.4甲酸色谱纯 6.2.5乙睛:色谱纯 6.2.6氨基酸标准品,见4.2.15 6.2.7快速定量滤纸 6.2.80.454nm水相滤膜 6.2.90.45m有机相滤膜 6.3仪器设备 6.3.1液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS):配电喷雾离子源(ES). 6.3.2电子天平:感量为0.0001g和0.01mg
GB/T30987一2020 6.3.3高速离心机;最高转速大于或等于15000r/min. 6.3.4涡旋混匀器 6.35移液器;量程分别为10l~10l.,0儿一20儿和10l~10A. 6.4样品见4.4 6.5试验步骤 6.5.1溶液配制 6.5.1.10.1mol/L盐酸溶液取浓盐酸9.0mL,倒人预先盛有适量水的试剂瓶中,用水稀释至1000mL.混匀 6.5.1.250%乙脯溶液取乙睛500mL,加水500mL,混匀 6.5.1.3混合氨基酸标准储备液配制称取各氨基酸标准品适量(精确到0.01mg),用0.lmol/盐酸溶液溶解并配制成各氨基酸质量浓度均为1000mg/L的混合氨基酸标准储备液,于0C4下保存,有效期为1个月 6.5.1.4混合氨基酸标准中间液配制准确吸取1.0ml混合氨基酸标准储备液于10ml容量瓶中,用0.1mol/儿盐酸溶液稀释并定容至刻度,混匀,配制成质量浓度均为100mg/L的混合氨基酸标准中间液,现配现用 6.5.1.5混合氨基酸标准工作溶液配制准确吸取1.0mL混合氨基酸标准中间液于10ml容量瓶中,用50%乙睛溶液稀释并定容至刻度，混匀,即得第一份标准溶液将第一份标准溶液用50%乙晴溶液逐级稀释,制成总共7个不同浓度的系列混合标准工作溶液 7个浓度的混合标准工作溶液中21种氨基酸的质量浓度均为10mg/L 5.0mg/L2.5mg/L1.0mg/L,0.50mg/L,0.25mg/L0.10mg/L,现配现用 6.5.2流动相配制 6.5.2.1200mmol/I甲酸铵溶液配制称取12.612g甲酸铵溶解于1000mL水中,用甲酸调节pH至3.0 6.5.2.2流动相A(20mmwl/L甲酸铵-水溶液)配制准确移取100ml200mmol/L甲酸铵溶液,加人900mL水,混匀 6.5.2.3流动相B(20mmol/L甲酸铵-乙睛溶液)配制准确移取100ml200mmol/I甲酸铵溶液,加人900mL乙猜,混匀 6.5.3试样提取试样提取按4.5.4规定执行移取1ml提取液于10ml容量瓶中,用50%乙晴溶液稀释并定容 10
GB/30987一2020 至刻度,混匀,取2mL稀释液于4C14000, r/min下离心10min,取适量上清液待测 6.5.4测定 6.5.4.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下: 色谱柱;HLICZ,2.7m,2.1mm×150mm ,或同等性能的色谱柱; a 流动相;具体梯度洗脱程序见表4 b c 流速;0.5mL/min; d 柱温:25C; 进样量;lL 表4液相色谱-串联质谱法洗脱程序流动相时间/min A B/ l00 11.5 70 30 12 00 30 00 6.5.4.2质谱参考条件质谱参考条件如下离子源;电喷雾离子源(ESI); aa b) 扫描方式;正离子模式; 检测方式:多反应监测MRM); c d 干燥气,雾化气,碰撞气、鞘气均为高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求,参考条件参见附录C; 喷雾电压、碎裂电压、碰撞气能量等参数应优化至最佳灵敏度,参考条件参见附录C 6.5.4.3绘制标准工作曲线在相同仪器条件(见6.5.4.16.5.4.2下,将系列混合氨基酸标准工作溶液由低浓度到高浓度依次进样分析,以各氨基酸的定量离子峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,建立标准工作曲线在上述色谱条件(见6.5.4.1,6.5.4.2)下,21种氨基酸的参考保留时间参见附录c中表C.1,总离子流图参见附录B中图B.3,多反应监测图参见附录B中图B.4图B.24 6.5.4.4样品测定在相同仪器条件(见6.5.4.1.,6.5.4.2)下,将待测液注人液相色谱-质谱/质谱仪,得到样品溶液中各氨基酸的定量离子峰面积,代人标准工作曲线计算含量待测液中各氨基酸的响应值应在标准工作曲线线性范围内,如果含量超过标准工作曲线范围,应稀释到合适浓度后再进样分析 6.5.4.5定性判断在相同仪器条件(见6.5.4.1,6.5.4.2)下,如果样品中待测物质的色谱谐峰保留时间和标准工作溶液 11
GB/T30987一2020 的相同,并且样品谐图中被测组分监测离子的相对丰度和标准品的相对丰度一致,允许偏差不超过表5 规定的范围,则可判断样品中存在对应的氨基酸表5定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/% 50 >2050 >1020 10 允许的相对偏差/% 士20 士25 士30 士50 6.5.4.6方法定量限方法定量限参见附录A中表A.1 6.6试验数据处理样品中各游离氨基酸含量的计算见式(3) 10-了×100 w-xY × 式中 W 试样中各氨基酸组分的含量,单位为毫克每100克(mg/100g) -试样溶液中由标准工作曲线计算出的氨基酸质量浓度,单位为毫克每升(mg/L) p 试样总体积,单位为毫升(ml). 试样质量,单位为克(g) mn n 试样干物率,测定方法见GB/T8303 以两次测定的算术平均值作为测定结果,结果精确至0.01mg/100g 6.7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的12%. 12
GB/30987一2020 录附 A 资料性附录氨基酸化合物信息及定量限氨基酸化合物信息及定量限见表A.1 表A.1氨基酸化合物信息及定量限定量限/(4g/kg 英文相对分子序号 CAs号中文名称分子式简写质量第一法第二法第三法丙氨酸 Ala 56-41-7 CH,NO 89.09 13.92 3.03 25.00 174.2o 精氨酸 27.21 Arg ll19-34-2 CHN,O. 19,80 12.50 70-47-3 CHN.o 132.12 75.06 13.62 50.00 天冬酰胶 Asn 天冬氨酸 56-84-8 CH,NO. 133.1o 13.44 31.95 50.,00 Asp Cys 56-89-3 c,HN.OS 44.88 50.00 胱氨酸 240,30 93,63 7-氨基丁酸 GABA 56-12-2 CH,NO 103,12 20,04 4.50 12.50 谷氨酰胺 Gln 56-85-9 CHN.O 146.15 19.41 8.94 25.00 谷氨酸 Glu 56-86-0 CH,NO 147.13 22.80 21,90 25.00 NO 75.07 甘氨酸 Gly 56-40-6 16.68 6.60 50.,00 CH 5934-29-2 cH,N,o 155.16 0 组氨酸 His 5. 42 14.07 12.50 73-32-5 cHNO 131.18 30.24 2.01 12.50 1 异亮氨胶 le 亮氨酸 L.eu 61-90-5 CHNO 131.18 28.74 1.92 12.50o 12 13 赖氨酸 lys 657-27-2 CHN.O. 146.19 39.63 7.08 25.00 14 蛋氨酸 Met 63-68-3 CHmNO.S 149.20 23.79 10.l4 12.50 苯丙氨酸 Phe 165.19 15 63-91-2 C,HNO 33,63 1.41 12.50 16 脯氨酸 c,H,No Pro 147-85-3 115.13 296,.31 13,20 12.,50 56-45-1 CHNo 13.71 15.72 25.00 丝氨酸 1 Ser 105.09 18 The 3081-61-6 CHN.O 174.20 19.20 9.27 12.50 茶氨酸 19 苏氨酸 Thr 72-19-5 CH,NO. 119.13 15,90 7.83 25.00 60-18-4 181.19 41.79 10.47 20 酪氨酸 TyTr C,HNO. 25.00 21 撇氨酸 Val 72-18-4 CHNO. 1l7.15 18.81 4.65 12.50 13
GB/T30987一2020 附录 B 资料性附录) 21种氨基酸混合标准工作溶液色谱图 21种氨基酸混合标准工作溶液的第一法色谱图见图B.1,第二法色谱图见图B.2,第三法总离子流图见图B.3,各氨基酸的多反应监测图见图B.4一图B.24 60- 50- M 40 遇到 30 土等 3 20- 中 S 日思 30 80 90 100 110 /min 图B.121种氨基酸混合标准工作溶液的第一法色谱图其中茶氨酸浓度为400nmol/mL 其余氨基酸浓度均为100nmol/mL LU 225- 200 175 10 125 100 75- 是毛出 50 金路器熊发 25 A 30 40 50 l/min 20 图B.221种氨基酸混合标准工作溶液的第二法色谱图(其中茶氨酸浓度为200n nmo/ml 其余氨基酸浓度均为50mmol/mL 14
GB/30987一2020 ×10' 3 2仍 12,13,14,15 2.5叫 2.25 19 s 20,21 18 0.75- 0 0.25- 6 18 20 28 2 26 /minm 说明 Phe; GABA; 15- -Asn; 16 les The; Glu: Leu; 10 -Ala:; 17 Asp; 1 18 Met Thr His; 12 19 Tyr; Gly; Arg; 13 Val; Gln: 20 Cys; Pro 14 Ser 21 Lys 图B.321种氨基酸混合标准工作溶液的第三法总离子流图各氨基酸浓度均为1mg/L 4.063min x10 x10 4750min ×10 4466min 0.8 0.8- 3.5 0.6 0.6- 2.5 2 0.4 0.4 t 0.2 0.2 0.5 /min /min /min 图B.4Phe的MRMI图图B.5Ile的MRM图图B.6Leu的MRM图 x10 5.076minm ×10 5.508minm x10' 5.713min F 2,5" 3 1.5 2 0.5- 5.2 5.4 5.2 5.4 5.6 5.8 5.8 /min t/min /min 图B.7Met的MIRM图图B.8Iyr的MRM图图B.9Val的MRM图 15
GB/T30987?2020 5.840min 6.124min X10 6.187min X10 10 a.8 0.8- 0.6 0.6- 0.4 0.4 0.2 0.2 5.6 5.8 6.2 5.8 6.2 5.8 6.26.46.6 G.4 /min /min /min ?B.10ProMRM? ?B.11GABAMRM? ?B.12TheMIRM? 6.476min 6.939min 10' 6.624.min X10 X10' 1.75 l.5" 1.25 2 0.75 i5 0.5 0.25 0.5 6.6 6.8 7.2 6.2 6.6 6.8 6.8 6,4 6.2 6.6 /min /min /min ?B.13AlaRM? ?B.14IhrMIR? ?B.15GlyMIRM? x10' 7.143min 7.197min X10 7.228min X10' 0.8 0.6 6.8 7.2 7.4 6.8 7.2 7.4 7.2 7.4 7.6 /min /min /min ?B.16GlMRM? ?B.17SerMRM? ?B.18AsnMRM? 7.418min s10" x10' 9.076min 8.120min X10 1.2 3.5- 2.51 0.8 0.6 1.5 0.4 0.2 0.5 B.68.8 9.29.4 7.2 7.6 8.28.4 7.8 /min /min /min ?B.19GlMRM? ?B.20AspMRM? ?B.21HisNMRM? 16
GB/30987?2020 X10' 9,492min 10 10.008min 10.046min x10 .2- 2 L.75 0.8- 5 A 0.6 4 0.75 33 0.4 0.5 0.2- 0.25 10 9.29.49.69.8 9.5 IG 9.8 0.210.4 I/min /min /min ?B.22ArNMIRMI? ?B.23CysNMIRM? ?B.24LysMIRNM? 17
GB/T30987一2020 附录 C 资料性附录液相色谱-串联质谱参数参考条件质谱参考条件如下离子源;电喷雾离子源(ESI); a 扫描方式:正离子模式; b) 检测方式:多重反应监测(MRM); c 干燥气(N:)温度;230C; d 干燥气流速;l1.0L/nmin; 鞘气温度:39o f C; 鞘气流速:12.0L/min; g h 雾化气(N.)压力.0.14MPa(20ps); 毛细管电压;1500V; 定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量见表C.1 j 表c.121种氨基酸的定量离子对、定性离子对、碎裂电压和碰撞气能量源内碎裂碰撞气英文保留时间定量离子对定性离子对序号中文名称电压能量简写 min /尖 /文丙氨酸 Ala 90.0/44.1 90.0/42.1;90.0/44.1 50 40; 6.48 精氨酸 Arg 9.49 175.1/70.1 175.1/70.1l;l75.1/116.1 95 17;5 天冬酰胺 Asn 7.23 133.1/74.0 133.1/74.0;l133.1/87.1 70 7;1 65 天冬氨酸 Asp 8.12 134.0/74,0 134,0/74.0;134.0/88.,0 5;l 眺氨酸 10.,01 241.1/152.0 90 20;2 Cys 241.l1/73,9;241.l/152.0 GABA 104.1/87. 04.1/69.l;l04.1/87.1 65 Y氨基丁酸 6.12 7i; Gln 7.14 147.1/84.0 147.1/84.0;l47.1/130 70 0; 谷氨酷胶谷氨酸 Glu 7.42 148.1/84.0 148.1/84.0;l48.1/130.1 70 7;1 55 甘氨酸 Gly 6.94 76.0/48.1 76.0/30.l;76.0/48.1 l;1 10 80 组氨酸 His 9.08 156.1/110.0 156.l/83.l;l56.1/110.0 20;5 异亮氨酸 70 le 4.47 132.0/86,l 132.0/69.l;132.0/86.l 10; 70 亮氨酸 leu 4.75 132.1/86.1 132.1/44.l;l32.1/86.l 15;l 75 10.05 147.1/84.1 147.1/84.1l;l47.1/130.1 赖氨酸 10;1 ？ Lys 75 14 Met 5.08 150.1/104.0 150.1/104.0;150.1/133 蛋氨酸 l;1 75 15 苯丙氨酸 Phe 4.06 116,1/120,1 166,1/103,l;116,1/120.1 22;5 75 16 脯氨酸 Pro 5.84 11l6.1/70.l 1l16.1/43.l;ll6.1/70.1 25;7 17 丝氨酸 Ser 7.20 106.1/60.l 106.1/42.l;l06.1/60.1 65 15; 18 茶氨酸 The 6.19 175.2/158.l 175.2/84;175.2/158.l 75 15; 18
GB/30987一2020 表c.1(续》碰撞气源内碎裂英文保留时间定量离子对定性离子对序号中文名称能量电压简写 min /8 / 19 6.62 120.1/74.1 120.1/56.1l;120.1/74.l 65 7;l 苏氨酸 Thr 20 酪氨酸 Tyn 5.51 182.1/136.1 182.1/136.l;182.1/165.1 70 2;l 21 氨酸 Val 5.71 1l8.1/72.1 l18.1/55.l;l18.1/72.1 70 15;l 注:表C.1所列参数在Agilent6465质谱仪上完成,此处列出试验用仪器型号仅供参考,使用者可尝试采用不同厂家或型号的仪器

植物中游离氨基酸的测定GB/T30987-2020

一、引言

游离氨基酸是植物中重要的代谢产物之一，具有重要的生理功能。因此，对它们的测定方法及含量进行研究和分析一直备受关注。GB/T30987-2020标准从不同角度提出了游离氨基酸的测定方法，并建立了严格的规范体系，为植物分析领域提供了科学、规范的技术支持。

二、GB/T30987-2020标准内容

GB/T30987-2020标准主要针对植物中游离氨基酸的测定方法进行规范，其中包括：样品处理方法、色氨酸含量的测定、总氨基酸含量的测定、单独游离氨基酸含量的测定、游离氨基酸含量的计算方法等内容。

1.样品处理方法

样品处理是游离氨基酸分析的重要环节。GB/T30987-2020标准中，通过比较不同的样品处理方法，确定了最佳的样品制备方案，包括：混合前的样品破碎、样品预处理和提取液的配制。这些步骤不仅可以有效地保护游离氨基酸不被破坏，还可以提高其测定的准确性。

2.色氨酸含量的测定

游离氨基酸的含量测定是依据其吸收光谱来进行的。然而，在植物样品中，常常存在与游离氨基酸有相似吸收光谱的其他化合物，如色氨酸等。因此，GB/T30987-2020标准提出了一种用于测定色氨酸含量的特殊方法，以准确消除色氨酸对游离氨基酸含量测定的影响。

3.总氨基酸含量的测定

总氨基酸含量是指植物中所有氨基酸的总和。GB/T30987-2020标准提出了多种测定总氨基酸含量的方法，包括紫外线吸收光谱法和高效液相色谱法等。这些方法都具有较高的准确性和可重复性。

4.单独游离氨基酸含量的测定

在植物中，不同的游离氨基酸含量可能存在差异。为了更好地理解游离氨基酸在植物代谢中的作用，GB/T30987-2020标准还提出了一种针对单独游离氨基酸含量的测定方法。

5.游离氨基酸含量的计算方法

GB/T30987-2020标准中，游离氨基酸含量的计算方法非常重要。通过对样品中游离氨基酸含量的测定，并结合其他相关参数，如体积、吸光度等，可以准确地计算出游离氨基酸的含量。

三、结论

GB/T30987-2020标准为植物中游离氨基酸的测定提供了科学、规范的技术支持。在进行植物分析时，应依照该标准的规定来操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。

总之，本文简单介绍了GB/T30987-2020标准中关于植物中游离氨基酸的测定方法，希望能够对专业人士在进行植物分析时提供一些参考和借鉴。