饲料中游离刀豆氨酸的测定离子交换色谱法

饲料中游离刀豆氨酸的测定离子交换色谱法

国家标准 GB/T23737一2009 饲料中游离刀豆氨酸的测定 离子交换色谱法 Deerminationoffreecanavanineinfeeds一 onexchangechromatography 2009-05-12发布 2009-09-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23737一2009 饲料中游离刀豆氨酸的测定 离子交换色谱法 范围 本标准规定了用离子交换色谱法测定饲料中游离刀豆氨酸的含量 本标准适用于单一饲料及配合饲料中游离刀豆氨酸的测定 定量限为15mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 原理 试样中的游离刀豆氨酸经磺基水杨酸振荡提取,过滤并定容 该提取液经离子交换色谱柱分离并 以苗三酮柱后衍生后在波长为570nm下测定 试剂和溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯,水符合GB/T6682中二级用水规定,色谱用水符合 GB/T6682中一级用水规定,溶液按照GB/T603配制 4.1盐酸溶液;移取1.7ml浓盐酸用水稀释到1L 碱基水杨酸溶液:50g/L 取5.0只碱基水杨酸用水稀释到100ml 4.2 4.3不同pH和离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液;按仪器说明书配制 4.4革三酮溶液;按仪器说明书配制 刀豆氨酸(CHN(O标准品;纯度98% 刀豆氨酸标准溶液;称取0.001g刀豆氨酸,精确到0.0001g,用盐酸溶液(4.1)溶解定容至 l0 ml 此溶液浓度为100g/ml,置4C冰箱中保存 刀豆氨酸标准工作液:分别吸取刀豆氨酸标准溶液(4.6)0.1ml、0.2ml,0.5ml、1.0ml 2.0ml,4.0ml于10nml容量瓶中,用盐酸溶液(4.1)定容至10nml混匀，配制成1.04g/ml 2.0 /ml、5.0 /mL、10.0 /ml、20.0ug/mL、40.0 4g/ml的刀豆氨酸标准工作液 现用现配 从g/ g/ g/ 仪器和设备 5 旋转蒸发器 实验室用样品粉碎机 3 5. 样品筛:孔径0.251 mm
GB/T23737一2009 4 分析天平:感量0.00001g 5. 5.5振荡器;往复250次/min 5.6离心机15000r/min 5.7微孔滤膜:孔径0.45Am. 5.8氨基酸自动分析仪 采样 按照GB/T14699.1的规定执行 试样制备 按照GB/T20195制备试样,磨碎,全部通过0.25mm孔筛,混匀,装人密闭容器中,避光低温保存 备用 分析步骤 试样溶液的制备 称取1发一多《试样(稍确至0.】mep),置于0mL离心管中,加人0ml碱基水畅酸落液(4.2),振 荡器(G.5)振荡提取30mm,15000，/min离心10mim,过逃到50ml容量瓶中 再对过逃后的试样用 0mL磺基水杨酸溶液(4.2)重复提取一次,合并两次滤液 最后用磺基水杨酸溶液(4.2)定容至 50mL 取1.0mL定容后的滤液,置旋转蒸发器(5.1)中,50C水浴下碱压蒸发至干,加人1.0mL盐 酸溶液(4.1)后用0,45am滤膜过滤，上机测定 定量测定 用刀豆氨酸标准工作液(4.7),按仪器说明书,调整仪器操作参数和(或)洗脱用柠檬酸钠缓冲液的 pH,注人试样溶液(8.1)和相应浓度的刀豆氨酸标准工作液(4.7),得到色谱峰面积值,用外标法定量测 定,参见附录A 结果计算 试样中刀豆氨酸的含量X以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算 xAx X= A.又m1 式中: -标准工作液(4.7)中刀豆氨酸的浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); -试样溶液(8.1)中刀豆氨酸的峰面积值 N -试样的定容体积,单位为毫升(ml) A -标准工作液(4.7)中刀豆氨酸的峰面积值 试样的质量,单位为克(g). 平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字 10 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的相对偏差不大于10%
GB/T23737?2009 ?A ?? ??? mvf 0 26.633 40 30 20 10 0.0 2.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.530.0min ?A.1???(20ug/mL)