畜禽肉中保泰松残留量的测定液相色谱-紫外检测法

畜禽肉中保泰松残留量的测定液相色谱-紫外检测法

国家标准 GB/T20754一2006 畜禽肉中保泰松残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 Methodforthedeterminationofphenylbutazonein ivestoekandpoultrymuscles LC-UVdetectionmethod 2007-03-01实施 2006-12-31发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20754一2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由秦皇岛出人境检验检疫局提出 本标准由国家质量监督检验检疫总局归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人:庞国芳、王飞、曹彦忠、贾光群,李学民、张进杰,范春林,刘永明、石玉秋 本标准系首次发布的国家标准
GB/T20754一2006 畜禽肉中保泰松残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 范围 本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中保泰松残留量的液相色谱测定方法 本标准适用于牛肉猪肉羊肉和鸡肉中保泰松残留量的测定 本标准的方法检出限:5.0ug/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,Iso5725-l:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-2;1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T66821992,neqISO3696;1987) 原理 畜禽肉中保泰松残留用甲醇十二硫苏糖醇的乙酸乙酯溶液提取,提取液浓缩后,用甲醇十氨水十二 氯甲熔十二硫苏糖醇的乙酸乙酯溶液溶解,弗罗里土固相萃取柱净化,用冰乙酸十甲醇十二氯甲熔十乙 鲑混合溶液洗脱并蒸至近干,残渣用流动相溶解定容,样品溶液供液相色谱-紫外检测器测定,外标法 定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇:色谱纯 4.2冰乙酸 4.3乙睛:色谱纯 乙酸铵 4.5氢氧化锁 乙谜 4.7二硫苏糖醉;纯度>99% 4.8乙酸乙酯:色谱纯 4.9二氧甲婉:色谱纯 4.10乙酸铵溶液:0.05mol/L 称取1.95g乙酸铵(4.4),用水溶解并定容于500ml.容量瓶中 4.11流动相:0.05mol/L乙酸铵溶液(4.10)甲醉(4.1)+乙睛(4.3)(50+37+13). 4.12溶液A:0.25mg/mL 称取0.125g二硫苏糖醉(4.7),用乙酸乙酯(4.8)溶解并定容至500ml 容量瓶中
GB/T20754一2006 .13溶液B.甲醇溶液A(4.12)(1十7) 用前制备 4 4 14溶液C甲醇十氢氧化铵(4.5)十二氯甲烧(4.9)十溶液A(1+1十70十70) 用前制备 4 15溶液D,吸取2.0mL.冰乙酸(4.2)和4.0mL甲醇于100ml.容量瓶中,用二氯甲炕定容至刻度 后,与等体积乙酥混合 用前制备 4 16保泰松标准物质;纯度>95% 4.17保泰松标准储备溶液:50.04g/mL 准确称取5.0mg保泰松标准物质(4.16)于l00mL容量 甲醇溶解,加人 瓶中,用80 ml.溶液A,用甲醉定容至刻度,混匀 4C保存 ml 5.0 4.18中间浓度保泰松标准溶液:2.0 /mL 吸取0.4ml保泰松标准储备溶液(4.17)于10mL容 g 量瓶中,用流动相定容至刻度 4C保存 4.19保泰松标准工作溶液;分别吸取2.5AL5.0l12.5Al,25.0Al50.0l中间浓度保泰松标 准溶液(4.18),用流动相定容至1.0ml,配成5.0ng/ml,10.0ng/ml,25.0ng/ml、50.0ng/mL、 100.0ng/mL浓度系列保泰松标准工作溶液 在4C保存,可使用一周 4.20弗罗里土固相萃取柱或相当者:2g,12mL 用前用5mL溶液c(4.14)处理 保持柱体湿润 4.21滤膜:0.2 2Am 仪器 液相色谱仪,配有紫外检测器 5.1 5.2天平;感量0.0lg.0.0001g 5.3氮气浓缩仪 5.4离心管;50mL,具塞聚丙烯离心管 5.5固相萃取装置 5.6均质器 5.7冷冻离心机 试样制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装人洁净容器内 密 封后作为试样,标明标记 在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化 试样的保存 将试样于一18C保存 测定步骤 提取 称取2g试样,精确至0.01g,置于50mL离心管(5.4)中 加人8mL溶液B(4.13),于振荡器上 剧烈振荡10min,在5C以4000r/min离心5nmin后,取上清液于另一离心管中;重复前述步骤,将残 渣再提取两次 合并三次提取液,用氮气浓缩仪于55C水浴中吹至近干,待净化 7.2净化 用5ml 溶液c(4.14)分两次溶解残渣,分别倒人弗罗里土固相萃取柱(4.20)中,使样液以 <1.0mL/min的流速通过弗罗里土固相萃取柱,待样液全部流出后,再用1mL溶液c(4.14)洗柱,弃 去全部流出液 最后用15mL溶液D(4.15)洗脱,洗脱液收集于30mL锥形试管中,用氮气浓缩仪于 55C水浴中吹至近干,残液用1.0mL流动相溶解,定容 过0.2Am滤膜(4.21)后,供液相色谱仪 测定
GB/T20754一2006 7.3色谱测定 7.3.1液相色谱条件 色谱柱;MightysilCw,3m,l50mm×4.6mm或相当者; a bb 流动相:0.05nmol/1乙酸铵溶液十甲醇十乙睛(50十37+13). 流速;0.8mL/min ce d 柱温:40C; 进样量;40L e 波长:270nm f 7.3.2液相色谱测定 在仪器最佳工作条件下,以保泰松标准工作溶液(4.19)浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标 准工作曲线 用标准工作曲线对样品进行定量 使样品溶液中保泰松的响应值在仪器测定的线性范围 内 在上述色谱条件下,保泰松的参考保留时间为8.1 min， 1,保泰松标准溶液色谱图见图A 1 7.4平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取样品外,均按上述步骤进行 结果计算 试样中保泰松残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算 1000 e×y义 X= 000 m 式中 试样中被测组分残留量,单位为毫克每千克(mg/kg) -从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为微克每毫升(ug/m) 试样溶液定容体积,单位为毫升(mL); 试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g) 计算结果应扣除空白值 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其重复性和再现性的 值以95%的可信度来计算 9.1重复性 在重复性实验的条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限,畜禽肉中保泰松 含量范围及重复性方程见表1 表1含量范围及重复性和再现性方程 药物名称 含量范围/(ug/ke》 重复性限， 再现性限R 5.0150.0 =0.764 -0.8285 保泰松 lR一0.712w-0.701 En lgr 注:m为两次测定值的算术平均值 如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 9.2再现性 在再现性实验的条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,畜禽肉中保泰松 的含量范围及再现性方程见表1
GB/T20754一2006 附录 A 资料性附录) 标准物质液相色谱图 保泰松标准物质液相色谱图,见图A.1 0.020- 0.018 0.016 0.014 0.012 0.010 0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 -0.002 10.0o 2.00 4.00 6.00 8.00 12.00 /min 图A.1保泰松标准物质液相色谱图 附 录 B 资料性附录 收 率 本方法中保泰松添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.1 表B.1保泰松添加浓度及其平均回收率的试验数据 药物名称 平均回收率% 添加水平/(4g/kg 5.0 86.9 10.0 82.2 保泰松 50.0 91.4 100.0 90.3