人参中多种人参皂甙含量的测定液相色谱-紫外检测法

人参中多种人参皂甙含量的测定液相色谱-紫外检测法

国家标准 GB/T22996一2008 人参中多种人参皂含量的测定 液相色谱-紫外检测法 Determinationofginsen0sidesinginseng LC-UVmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22996一2008 前 言 本标准的附录A,附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局,辽宁出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:宋文斌、李军、董振霖、孙玉岭、隋凯、李佳昌、于一茫、代英成、李妹,庞国芳
GB/T22996一2008 人参中多种人参皂含量的测定 液相色谱-紫外检测法 范围 本标准规定了人参中人参皂球(ginsenosides)Re,Rg,Rf、Rb、Rc、Rb 含量的液相色谱-紫外检测 方法 本标准适用于生晒人参中人参皂武Re,Rgi,R,Rb,Rc,RRb 含量的测定 本标准的方法检出限:人参皂甫Re,Rg、Rb、Rc,Rb 均为50mg/kg,人参皂RI为25mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准 然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第1部分;总则与定义(GB/T6379.1 2004,ISo5725-1l:;1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-21994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,1ISO3696;1987,MoD) 原理 采用快速溶剂萃取法(AsE)在高温、高压的条件下,使人参皂试完全彻底地被萃取到甲醇中,经浓 缩、定容,液相色谱测定,外标法定量 试剂和材料 水为GB/T6682规定的一级水 甲醉色谱纯 4.2乙睛色谱纯 4.3海砂;化学纯,粒度.0.6Gmm- 0.85mm 4.4 纯度均大于99%. 人参皂代标准物质;Re,Rg,Rf,Rb,Rc,Rb 4.5 人参皂戚标准液 六种人参皂武Re,Rgi,Rf,RbRe,Rb标准储备液;l.0mg/ml 用分析天平准确称取适量 上述物质(4.4),分别用甲醇(4.1)配制成1.0mg/mL的标准储备液 储备液避光在2C4C下 保存 4.5.2六种人参皂武混合标准工作液:根据每种人参皂武的灵敏度和仪器的线性范围,量取适当的六 种人参皂诫标准储备液(4.5.1),用甲醇配制成混合标准工作液,避光在2C4C下保存 注称取标准物质的质量是按照纯度修正过的质量 仪器 5.1液相色谱仪:配有紫外检测器
GB/T22996一2008 加速溶剂萃取仪:型号ASE200,配有11m萃取池 5 2 5.3电子天平:感量为0.01g和0.0001g 55 4 旋转蒸发仪 5.5鸡心瓶:l50mL 容量瓶:l0n ml 5.7微量移液器;10l100Al和1000l5000L 5.8样品过滤器:PTFE,0,45 m 试样的制备与保存 6.1试样的制备 将人参样品混合均匀 分出0.5kg作为试样,用粉碎机粉碎并通过孔径20目筛 混匀密封,并做 标记 6.2试样保存 将试样置于4C条件下贮存 分析步骤 提取 分别称取人参试样1g(精确到0.ol2)和海砂13.0g,将试样与海砂充分混匀装人事先放人纤维 素滤膜的加速溶剂萃取仪的11mlL萃取池中,拧紧池盖,进行萃取 加速溶剂萃取条件如下: a)萃取溶剂:甲醇; b)压力:10.7MPa; 温度;l40C; 静态萃取时间:5min d 静态循环次数:2次; 冲洗体积50%; g)吹扫时间;100s 将收集到瓶中的提取液转移到鸡心瓶中,50C下真空浓缩至小于10ml,转移到10mL容量瓶中, 用甲醇定容,混匀 取部分样液用0.45Am滤膜过滤到进样瓶中,待液相色谱测定 7.2 色谱测定 7.2.1液相色谱测定条件 液相色谱测定条件如下: m,250mm×4.6mm(内径)或相当者; 色谱柱.Aecdlaim120Cn.,5 a b 流速:lmL/min e)检测波长;203nm d 柱温:50C; 进样量:l0AL; 流动相及梯度见表1
GB/T22996一2008 表1流动相及梯度 步骤 运行时间/min 流动相水/% 流动相乙睛/% 0.00 70 30 64 5.50 36 20 12.00 80 20.00 100 70 25.00 30 30.00 70 30 7.2.2液相色谱测定 用不同浓度的人参皂诫混合标准液分别进样,以峰面积和标准工作溶液的浓度绘制标准工作曲线， 样品溶液中人参皂诫的响应值均在仪器的测定线性范围内 在上述色谱条件下,各种人参皂诫的保留 时间见表2 各种人参皂试的标准物质色谱图参见附录A中的图A.1 各种人参皂试的添加浓度及其 平均回收率的结果参见附录B中的表B.1 表2各种人参皂诫参考保留时间 保留时间/min 保留时间/min 人参皂武 人参皂武 Re 4.632 Rb 10.31o Rg 4.871 Re 10.540 R 0.014 Rb l1.215 7.3平行试验 按照上述步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.4空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行 结果计算 人参中人参皂武含量按式(I)计算 1000 人 x=cx" 1000 n 式中: 试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/kg) -从标准曲线上得到被测组分游液的浓度,单位为微克每毫升(/4烟/ml) 样品溶液定容体积,.单位为毫升(nl 样品溶液所代表试样的质量,单位为克(g) 77 计算结果应扣除空白值 精密度 一般规定 9.1 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其重复性和再现性的 值是以95%的可信度来计算 2 9. 重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,人参中人参皂武添加浓 度范围及重复性方程见表3
GB/T22996一2008 表3人参中人参皂的添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克 人参皂K 添加浓度范围 重复性限r" 再现性限R =5.773十2.653lgm gR=5.639十2.661lgm Re 50200 lgr一 50200 -3.510+1.482g"m gR=3.367十1.485gm Rs lgr= Rf 25~100 g"=1.803十0.623g" gR=1.653十0.623g" Rb 50200 lgr=2.523十0.970lgm gR=2.388+0.9777lgm Re 50200 lgr=1.2480.318lgm lgR=3.445十1.528lgm Rb. 50200 lgr=7.354十3.432lgm lgR=7.216十3,429lgm 注，"为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，人参中人参皂俄添加 浓度范围及再现性方程见表3
GB/T22996一2008 附 录A 资料性附录 标准物质色谱图 人参皂武标准物质色谱图,见图A.1 10.014 176 150 125 10.310 11.215 10.540 4.871 100 4.632 75 50 25 iminr Re;4.632 4.871 R:10.014 Ra" Rb:10.31o Re;l10,540 Rb;l1.215 人参皂诫标准物质色谱图
GB/T22996一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 本方法中人参皂武添加浓度及其平均回收率试验数据,见表B.1 表B.1人参皂甫添加浓度及其平均回收率试验数据 人参皂R 添加浓度/mg/kg 平均回收率/% 50 91.98 100 87.19 Re 150 91.37 200 94.78 9. 50 10o 86.69 Rg 150 91.28 97 卫 25 90.69 91.09 50 Rf 75 102.79 8.52 o0 丽 丽.丽 92.26 l00 Rb 93,95 150 20o 0. .95 0. 50 100 87.09 Re 150 94.17 200 99.61 89.95 0 l00 87.24 R 15o 96.6o 200 100,43