动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法

动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法

国家标准 GB/T21310一2007 动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法高效液相色谱/串联质谱法 Delerminationfresiduesofthyrestatsinfodstuftsfamimalorigin一 HLC-MS/MSmethod 2007-10-29发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21310一2007 前 言 本标准的附录A、附录B,附录C均为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口 本标准起草单位:检验检疫科学研究院、山东出人境检验检疫局 本标准主要起草人:彭涛、于静、国伟、李晓娟、孙利凌云、代汉慧、张鸿伟储晓刚、唐英章
GB/T21310一2007 动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法高效液相色谱/串联质谱法 范围 TAP)、甲基 本标准规定了动物源性食品中硫脉喀唁(2-thiouracil，TU)、甲筑咪陛(methimazole. 硫氧嗜(methylthiouraeil，MTU),丙硫氧嗜(propylthiouraeil，PTU),苯基硫氧嗜(phenylthi ouracil,PhTU),2-筑基苯并咪陛(2-mereaptobenzimidazole，MB1)残留量高效液相色谱/串联质谱测定 方法 本标准适用于动物源性食品肌肉(兔肉、鸡肉、牛肉、猪肉),内脏(兔肝、鸡肝),奶和蛋中硫脉喀唉、 甲疏咪陛、甲基硫氧喀唁、丙硫氧喀、苯基硫氧唁嚏、2-疏基苯并咪幽残留量的定性确证和定量测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992，neqIS03696;1987) 方法提要 采用乙酸乙酯提取试样中残留的硫脉密啖、甲统咪陛、甲基硫氧喀啖,丙硫氧嗜啖,苯基硫氧嗜啶和 2-苑基苯并咪幽,提取液经液液分配和HLB固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱/串联质谱定性检 测,内标法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 甲醇;高效液相色谱级 甲酸;高效液相色谱级 乙酸乙酯:高效液相色谱级 4.4 正己烧高效液相色谱级 4.5乙晴:高效液相色谱级 4.6磷酸 4.7苑基乙醇 4.8 二水乙二胺四乙酸二钠 4.9无水硫酸钠;650C灼烧4h,置于干燥器中备用 4.100.1mol/I乙二胺四乙酸二钠溶液:准确称取37.2g二水乙二胺四乙酸二钠(4.8),用水溶解并 定容至lL 4.11乙晴饱和的正已烧;量取正已炕80ml于100ml分液漏斗中,加人适量乙晴后,剧烈振摇,待分 配平衡后,弃去乙睛层 4.120.1%甲酸水溶液:准确量取1ml甲酸(4.2),用水定容至1L 4.130.0025mol/L磷酸:准确量取0.2mL磷酸,用水定容至1L
GB/T21310一2007 4.14溶解液:90mL0.1%甲酸水溶液(4.12)中加人10m甲醇 4.15标准物质;硫脉啼、甲筑咪幽、甲基硫氧噼、丙硫氧密、苯基硫氧嗜、2-豌基苯并咪幽,纯 度均>99% 9 16内标物质;5,6-二甲基硫氧喀(5,6-dimethyl-2-thiouracil，DMTU),纯度>99% 417标准储备溶液;准确称取适量标准品(精确至0.0018),用甲醉溶解,配制成浓度为100唱/mL 的标准储备溶液，一18C冷冻避光保存,有效期3个月 4.18混合中间标准溶液;准确移取标准储备液(4.17)各lml于10ml容量瓶中,用甲醉定容至刻 度,配制成浓度为10 g/mL的混合中间标准溶液,4C冷藏避光保存,有效期1个月 4.19混合标准工作溶液;根据需要用甲醇把混合中间标准溶液(4.18)稀释成适合浓度的混合标准工 作溶液,现用现配 4.20内标标准储备液;准确称取适量5,6-二甲基硫氧嗜(精确至0.000lg),用甲醉溶解,配制成浓 度为100"g/ml的内标标准储备溶液，一18C冷冻避光保存,有效期3个月 4.21内标标准工作溶液:准确移取0.mL内标标准储备液(4.20)于10ml容量瓶中,用甲醇定容至 刻度,配制成浓度为1l4g/mL的内标标准工作溶液,4C冷藏避光保存,有效期1个月 4.22HLB固相萃取柱:200mg,6ml,或相当者 4.23微孔滤膜:0.20pm,有机相 4.24氮气:纯度>99.999% 4.25缸气:纯度>99.999% 仪器和设备 5.1液相色谱/串联质谱仪;配备电喷雾离子源(ESI) 5.2组织捣碎机 5 3 分析天平;感量0.o001g.0.01g 5.4均质器10000r/min. 5 振荡器 .5 5. 6 离心机10000r/min. 57 氮吹仪 旋涡混合器 .8 55 超声波水浴 55 .10减压浓缩仪 1 梨形瓶:100mL .12 55 具塞塑料离心管:50mL .13 刻度试管;10mL 1 移液枪:5ml,lmL .,20o,L. 5. .15分液漏斗;50mL 试样制备 6 肌肉和内脏 从原始样品取出有代表性样品约500g,用组织捣碎机充分捣碎混匀,均分成两份,分别装人洁净容 器作为试样,密封,并标明标记 将试样置于一18C冷冻避光保存 奶 从原始样品取出有代表性样品约500g,充分搅拌混匀,均分成两份,分别装人洁净容器作为试样 密封,并标明标记 将试样置于4冷藏避光保存
GB/T21310一2007 6.3 蛋 从原始样品取出有代表性样品约500g,去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀,均分成两份,分别装人 洁净容器作为试样,密封,并标明标记 将试样置于4C冷藏避光保存 注:在制样的操作过程中,应防止样品污染或残留物含量发生变化 样品处理 7.1提取 称取约5g试样(精确至0.01g)于50mL 塑料离心管中,依次加人150AL内标标准工作液 (4.21),50AlL流基乙醉(4.7),30L.0.1moL/儿的乙二胺四乙酸二钠溶液(4.10)和适量无水硫酸纳 后,振荡提取 (4.9),吸去样品中的水分,再加人20ml乙酸乙酯,用均质器以10000r/min均质1 min 20min,再以4000r/min离心5min,收集上清液于100ml梨形瓶中 残渣用20ml.乙酸乙酯再提取 -次,合并上清液,在40C水浴中减压浓缩至近干 残留物用10mL乙睛溶解,并转移至50mL分液 漏斗中,用30ml乙晴饱和后的正己烧(4.11)分三次液液分配,去除油脂 收集乙睛层,在40C水浴中 减压浓缩至近干,残留物用10ml.0.0025mol/儿磷酸(4.13)溶解,超声波水浴助溶5min后,待净化 净化 HLB固相萃取柱依次用5nml甲醉,5nml水预淋洗后,转人10ml样品提取液(7.1) 先用5nml 水进行淋洗,弃去;再用5mL甲醇进行洗脱,收集洗脱液于10mL刻度试管中 整个固相萃取净化过 程控制流迷不超过又mL/min 洗脱液在40c下用N吹干f 残留物用】ml游解液(4.l)游解,涡动 1min后,过0.2am微孔滤膜,供仪器检测 7.3混合基质标准溶液的制备 称取5份约5《阴性试样(精确至0.01g)于50ml塑料离心管中,按照标准曲线最终定容浓度分 别加人混合中间标准溶液(4.18)或混合标准工作溶液(4.19),再加人150L内标标准工作液(4.21). 余下操作同7.1和7.2 测定 8.1液相色谱条件 a)色谱柱;watersAcQUITYUPLCTMBEHC50mm×2.1mm(内径),1.74m,或相当者 柱温:30C b e)流速;0.2mL/min; d)进样量;5nL 流动相及洗脱条件见表1 表1流动相及梯度洗脱条件 时间/nmin 流动相A(甲醉) 流动相B4.12) 0% 90% 1.00 10% 90% 4.00 90% 10% 90% 6.00 10% 7.00 10% 90% 10% 90% 10.00 8 串联质谱条件 参见附录A
GB/T21310一2007 8.3液相色谱/串联质谱测定 8.3.1定性测定 按照上述条件测定样品和混合基质标准溶液,如果样品的质量色谱峰保留时间与混合基质标准溶 液一致;定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过 表2的规定,则可判断样品中存在相应的被测物 混合基质标准溶液的液相色谱/串联质谱色谱图参见 图B.1 表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 >50% 相对离子丰度 >20%一50% <10% >10%一20% 士20% 士25% 士30% 士50% 允许的相对偏差 8.3.2定量测定 按照内标法进行定量计算 空白试验 除不称取试样外,均按照以上步骤进行 结果计算 按式(1)进行计算: R×c×V X= R×m 式中: 试样中分析物的含量,单位为微克每千克(4g/kg); R 样液中的分析物与内标物峰面积比值; -混合基质标准溶液中分析物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL) 样液最终定容体积,单位为毫升(mL); 混合基质标准溶液中的分析物与内标物峰面积比值， R 试样的质量,单位为克g 注;计算结果需将空白值扣除 10 测定低限(L0Q 本方法的测定低限为;硫脉喘、甲筑咪幽50pg/kg;甲基硫氧嗜碗、2筑基苯并咪幽30g/kg;两 硫氧喘嚏、苯基硫氧嘴陡5"g/kg 11 回收率和精密度 参见表C.1
GB/T21310一2007 附录A 资料性附录 串联质谱条件 毛细管电压:3.0kV; 源温度:120C 去溶剂温度:350C 锥孔气流:氮气,流速50L/h; 去溶剂气流;氮气流速600L/h; 碰撞气;氯气,碰撞气压2.60×10-'Pa 扫描方式;正离子扫描; 检测方式:多反应监测(MRM),监测条件见表A.1 表A.1多反应监测条件 驻留时间 锥孔电压 碰撞能量 母离子(m/2) 子离子(m/z 化合物 eV 57 0.1 30 15 甲流咪哗 1l5 15 TAP) 88 30 112 0. 30 13 硫脉熔吮 129 (TU 70 30 15 0. 84 0.1 30 15 甲基硫氧喀吮 143 MTU) 15 126 0.1 30 35 20 93" 0.1 2-颈基苯并咪陛 151 MB 65 25 0.1 35 5,6-二甲基硫氧密嚏 157 140 0.1 30 15 DMTU) (内标 30 15 15！ 0.1 丙硫氧嗜吭 171 PTU 30 18 112 0.1 0.1 30 23 103" 苯基硫氧喘呢 2205 PhTU 30 15 88 0. 用于定量 1 所列参数是在WwatersQuattroPremier质谱仪上完成的,此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考,并不涉 及商业目的,鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器
GB/T21310?2007 ? B ?? ???? rU 1.03 128.9>l12 3.0o 6.0o 7.00 X00 2.00 4.00 1.03 128.9>70 00 3.00 5.00" 6.00" 7.0o 2.00 4.00 14.9>57.2 X w0 3.00 4.00 .00 2.00 1.30 14.9>88 7 9.00 40o 5.0o 6.o .0o 2.0o MTU 142.6>83.6 1.38 5.0o 6.o 1.00 2.00 3.00 4.00 7.00 MTu 1.38 142.6>125.6 % .0o 2.00 3.o0 4.o0o 5.00 6.o 7.oo DMTU 156.7>139.8 2.45 T.w 2. ?0w Lw ?00 7.0w PTU 170.8>153.7 3.15 100 % 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 PTU 170.8>I1.7 3.15 100 % 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.0o 7.00 MB1 3.30 151>93 Io 40o 7.00 1.00 2.00 XO 5.00 6.00 MBt 3.30 151>65 100 % 0o .00 2.00 3.00 4.0oo 6.00 7.00 PhTU 3.60 204.9>102.? 1007 % 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 PhTU 204.9>187.8 3.60 I00 % min 1.00 3.00 4.0o 5.00 6.00 7.00 2.00 ?:???;????5,6-???2- ??? ?B.1??????
GB/T21310一2007 c 附 录 资料性附录 添加回收率 表c.18种动物源性食品中甲状腺拮抗剂添加回收率(n=10 添加浓度/ 平均测定值/ 回收率范围/ 相对标准偏差/ 食品名称 化合物 /kg 4g/kg 4g 50 49.8 96.9~105.8 3.5 TU 100 l02.7 98.7~108.9 4.7 99.0~107.8 200 209.8 5.3 50 98.9~105.8 50.9 2.7 TAP 1oo 98.7" 90.8~1o1.5 9 200 91.6 92.098. 3.2 30 31.1 98,9~104.5 4.1 90.7~101.9 3.5 MTU 100 97.8 200 192.8 88.2~l09,4 9.4 鸡肉 30 28.3 92.2~99.3 3.8 MB1 100 05.2 98.2~108.6 4.8 200 192.7 93.9l00.9 4.2 81.389.1 4.5 PTU 50 51.5 97.4108.2" 5.8 100 02.2 94.7108.8 4.5 88.295.5 6.1 50 PhTU 49.1 95.7~105.2 5,7 97.0105.4 100 98.9 50 50.3 97.9~103.8 2.9 TU 100 97.7 92.7102.9 4.5 200 92.7 91.0~107.8 6.8 50 48.9 93.9~102.8 101.2 94.8~107.5 TAP 100 7.4 200 201.6 95.0~108.9 3.9 兔肉 30 27.9 88.9~104.5 6.2 MTu 98.7" 5.8 100 90.7101.9 200 198.9 97.2~101.7 30 100.2109.3 32.3 4.7 MB1 100 101 .2" 97.2~103.6 1.3 200 199.7 93,9~105.9 6.l
GB/T21310一2007 表c.1(续 添加浓度 平均测定值 回收率范围 相对标准偏差 食品名称 化合物 4g/kg ug/kg 5.l 98.2~109,l 6.9 PTU 50 49.5 91.2106.5 100 102.2 100.7l06.8 2.2 兔肉 4.8 87.299.5 6." PhTU 50 48.9 95,3~103.2 5.6 100 102.9 99,0~105.4 3.4 50 48.7 92.9103.8 6.1 TU 100 102.2 98.7~104.2 3.5 198.8 91.0~102.7 200 50 51.9 95.9106.8 3.7 TAP 100 98.2 93.8102.5 5.1 95,6~108.9 4.8 200 210.6 30 28.9 93.999.5 3.2 MTU 4." 100 105.6 96,7~108,9 200 207.7 98.2~109.7 2.3 猪肉 30 31.7 100.2109.4 5.1 MB 100 98.6 95.2101.6 200 198.7 94.9105.3 3.9 4.8 93,2~103,1 4.1 50 PTU 48.9 94.2106.2 4.8 100 102.9 101.7105.8 3.3 98.2109.5 5. " 3.9 50 95.3~101.2 4." PhTU 48.9 100 103.7 97.0~108.4 6.3 50 51.3 96,9~105.8 5." TU 100 98.5 92.7102.2 4.1 200 190.2 92.098.7 5.7 91.998.5 50 47.9 2.5 TAP 100 97.3 5.2 牛肉 94.7l02.7 200 205.9 95.7108.9 30 31.2 91.9108.9 8.8 MTU 100 98.6 96.6~103.1 3.1 200 202.2 98.2~109.7 3.7
GB/T21310一2007 表c.1(续 添加浓度 平均测定值 回收率范围 相对标准偏差 食品名称 化合物 4g/kg ug/kg 30 31.1 100.2~108.4 4." MB 97.5 95.2~101.6 100 2.8 200 198.4 94.9~103.2 5.2" 4.7 93.2~99.1 3.7 牛肉 PTU 50 51.2 94.2~106.2 4.4 100 107. 2 101.7109.8 4.6 5.2 98.2109.5 3.4 PhTU 50 51.7 95,3~109,2 2.7 100 103.小 97.0108.7 47.8 92.9103.8 5.5 50 TU 100 100.7 92.7~102.2 3.5 200 193.8 91.098.7 4.4 50 48.5 95.9106.8 3.8 TAP 100 98.2 93.8102.5 200 198.8 95,7108,9 4.6 30 32.2 100.9109,5 3.2 MTU 100 105.6 96,6~108,9 4.5 205.5 98.2109.7 200 3.4 兔肝 30 31.5 100,2l08,4 6.8 95.2~l01.6 MB1 100 96.7 2.9 200 198.7 94.9~103.2 4.5 4.7" 93.2一99.1 3.3 PTU 50 48.8 94.2106.2 2.5 100 103.4 101.7109,8 4.7 5.3 98.2109,5 3.3 50 PhTU 53.2 95.3~109.2 2.5 100 97.0107.4 102.7 5.7 50 48.4 92,9~103,8 3.5 ru 100 99.6 98.7l02.2 3.6 200 201.5 91.0~108.7 鸡肝 50 51.8 95.9106.8 4.5 TAP 100 95.9 93.8102.5 4.5 200 199.6 95.6~108.9 9.7
GB/T21310一2007 表c.1(续 平均测定值 添加浓度 回收率范围 相对标准偏差 食品名称 化合物 4g/kg ug/kg 30 26.8 82.999.5 5.5 Mru 100 104.2 3." 96.6108.9 200 212.4 95.2~108.4 30 31.3 100.2~1l084 5.3 MB1 100 97.6 95,2~101.6 5." 200 203.2 94,9103,2 3.9 鸡肝 5.1 95.2107.1 PTU 50 47.7 93.8~106.5 3.5 100 96.7 95.099.8 6.7" 4.3 83.299.5 4.8 50 PhTU 48. 3 95.5~103.5 4.9 100 102.8 96,9l05.7 5.1 51.8 2.8 50 98.4105.4 TU 100 98.8 94.6~101.5 4.3 200 193,4 92.0一99.8 6.8 50 48.8 96,9~105,8 4.4 TAP 100 103.7 98.7108,9 5.1 200 209.2 99.0~107.8 3.8 30 28.8 92.298.3 4.2 2 MTU 100 104. 98.2~108.8 5.5 200 192.8 93.2100.2 2.7 牛奶 30 29.5 96.6~103.5 MB 100 95.9 90.7101.9 3.2" 192.7 200 93.2l09.4 4.4 86.l94.3 6.9 PTU 50 95.7105.9 6.1 49.6 100 98.8 97.0~104.6 2.2 5.3 90.2108.1 6.6 50 PTU 51.9 97.4~108,2 7.6 100 104.8 101.7108.8 3.3 10
GB/T21310一2007 表c.1(续 添加浓度 平均测定值 回收率范围 相对标准偏差 食品名称 化合物 4g/kg ug/kg 50 50.2 95,9~l05.8 3.9 TU 100 97." 94.7104.9 4.2 200 201.7 97.8~107.8 3.3 50 48.7 93.8一99.8 5.5 TAP 100 103.5 94.3~106.2 6.1 200 205.6 97.0108,8 4.9 30 30.7 98.7104.4 4.5 MTU 100 98.5 91.7105.9 4.9 200 200.3 97.2~103,8 3.3 鸡蛋 30 31.8 100.2109.3 4.3 MB 100 103.2 96.2~106.6 7.7 200 199.4 93,9l04.7 2.9 5.3 98.2109.1 3.7 50 PTU 47.5 92.8~106.5 7.8 100 95.0l02.8 98.7 2.9 4.5 87.299.5 5.7 PhrU 50 49.7 95.5~103.5 4.5 100 102.5 96.9~105.8 3.2