国家标准 GB/T40899一2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脉和卡立普多的测定高效液相色谱法 Determinationofprohibitedbromisoval，earbromalandcarisoprodolin eosmeties一Highperformanceliquidehromatography 2021-11-26发布 2022-06-01实施国家市场监督管理总局发布国家标涯花警理委员会国家标准
GB/T40899一2021 前言本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由轻工业联合会提出本文件由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口本文件起草单位:检验检疫科学研究院、上海香料研究所本文件主要起草人;尚宇瀚、马强、李磊、郭项雨、李文涛、孟宪双
GB/T40899一2021 引言本文件的被测物质是我国《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定的禁用原料禁用原料是指不得作为化妆品原料使用的物质《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定;若技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,国家有限量规定的应符合其规定;未规定限量的,应进行安全性风险评估,确保在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害目前我国尚未规定这些物质的限量值本文件的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/T40899一2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脉和卡立普多的测定高效液相色谱法警示- -使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验本文件并未指出所有可能的安全问题使用者有责任采用适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件范围本文件描述了化妆品中禁用物质澳米索伐、卡澳脉和卡立普多的高效液相色谱测定方法的原理,试剂和材料、仪器设备、试验步骤、结果计算,回收率、精密度等内容本文件适用于水剂类,乳液类和膏霜类化妆品中澳米索伐、卡澳脉和卡立普多的测定本文件的方法检出限和定量限溴米索伐与卡溴脉;方法检出限均为1mg/kg,定量限均为5mg/kg; 卡立普多;方法检出限为10mg/kg,定量限为20mg/kg 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义原理样品经溶剂超声提取后,提取液经离心、氮吹,重新定容并过滤以配备二极管阵列检测器<用于检测祺米索伐、卡澳脉)和蒸发光散射检测器(用于检测卡立普多)的高效液相色谐仪进行测定,根据保留时间初步定性,外标法定量试剂和材料 S 除非另有规定,仅使用分析纯试剂 5.1水:GB/T6682,一级 5.2甲醉;色谱纯 5.3乙睛:色谱纯 5.4氯化钠;固体 5.540%乙腊溶液;量取40ml乙晴(5.3)加人100mL容量瓶中,加水稀释并定容至刻度 5.6澳米索伐卡澳脉和卡立普多标准物质:纯度不小于98% 三种标准物质的英文名称,CAs号、分
GB/T40899一202 子式、相对分子质量和结构式见附录A中表A.1 5.7澳米索伐标准储备溶液;准确称取澳米索伐标准物质(5.6)100mg,精确到0.1mg,转移至100ml 容量瓶中,用40%乙睛溶液(5.5)溶解并定容至刻度,配制成质量浓度为10001 nmg/L的标准储备溶液于4C避光保存,有效期2个月 5.8卡澳脉标准储备溶液;准确称取卡澳脉标准物质(5,6)100mg,精确到0.1mg,转移至100ml容量瓶中,用40%乙晴溶液(5.5)溶解并定容至刻度,配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液,于 C避光保存,有效期2个月 5.9卡立普多标准储备溶液;准确称取卡立普多标准物质(5.6)100mg,精确到0.1mg,转移至100mL 容量瓶中,用40%乙晴溶液(5.5)溶解并定容至刻度,配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液于4C避光保存,有效期2个月 5.10具塞塑料离心管:15mL 5.11微孔滤膜;孔径0.45m,有机相 6 仪器设备 6.1高效液相色谱(HPLC)仪;配有二极管阵列检测器和蒸发光散射检测器 6.2液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)仪:配有电喷雾离子源(ESI) 6.3分析天平;感量0.0001g和0.001g 6.4超声波清洗器;频率不低于40kHz 6.5离心机:转速不低于5000r r/min 6.6氮吹仪 6.7具塞比色管;10ml 6.8氮吹管 6.9吸量管1mL,5mL,10mL,分度 6.10容量瓶:50 mL,100mL 试验步骤 7.1样品处理 7.1.1水剂类样品称取1.0g样品,精确至0.0o1g,置于10ml具塞比色管(6.7)中,加人甲醉(5.2)定容至10ml,超声提取20min,冷却至室温取定容液1mL氮吹至干,用流动相重新定容至1mL,经微孔滤膜(5.11) 过滤后待测 7.1.2乳液和膏霜类样品称取1.0g样品,精确至0.001g,置于10ml具塞比色管(6.7)中,加人甲醉(5.2)定容至10ml,混匀,加人2g氯化钠(5.4)破乳,超声提取20min,冷却至室温移取所得悬浮液5ml于15ml具塞塑料离心管(5.10)中,5000r/min离心5min 取上清液1ml.氮吹至干,用流动相重新定容至1mL,经微孔滤膜(5.11)过滤后待测 7.1.3 平行试验平行做两份试验
GB/T40899一2021 7.2测定条件高效液相色谱测定的参考条件如下 × 色谱柱:C固定相(4.6 250mmi.d.,5Am),或相当者; a mm b 流动相:乙睛十水=40+60(体积比),等度洗脱; 柱温:30C; c d 流速:l.0ml/min; 进样量;10L e 二极管阵列检测器检测条件;检测波长210nm; 蒸发光散射检测器检测条件;雾化器冷却模式;漂移管温度50C;载气为氮气,压力为276kPa 8 (40psi);放大系数为500. 7.3标准曲线的绘制 7.3.1溴米索伐和卡溴脉标准曲线的绘制使用吸量管分别移取0.5mlL1ml、5mL,10mL,25mL澳米索伐标准储备溶液(5.7)和卡澳脉标准储备溶液(5.8)于50mL容量瓶中,使用流动相定容至刻度,得到质量浓度为10mg/L.20mg/儿 100 0mg/L,200mg/L.和500mg/L的标准工作溶液,按7.2给出的测定条件以浓度由低到高顺序进样使用二极管阵列检测器进行检测,以质量浓度为自变量,以峰面积为因变量进行线性回归,得到标准曲线 7.3.2卡立普多标准曲线的绘制使用吸量管分别移取2.5mL5mL10mLI5mL.25mL卡立普多标准储备亲液(5.9)于50mL 容量瓶中,使用流动相定容至刻度,得到质量浓度为50mg/L,100mg/L.200mg/L300mg/儿和 500mg/L的标准工作溶液,按7.2给出的测定条件以浓度由低到高顺序进样,使用蒸发光散射检测器进行检测,以质量浓度的常用对数值为自变量,以色谱峰面积的常用对数值为因变量进行线性回归.得到标准曲线三种待测物标准溶液的高效液相色谱图见附录B中图B.1 7.4测定按7.2测定条件对样品溶液进行测定,根据保留时间初步定性,外标法定量待测物含量应在标准曲线的线性范围之内,超出线性范围则应稀释后再进行分析注:若检出阳性样品,用液相色谱-串联质谱进行确证试验(见附录C) 7.5空白试验除不称取样品外,按7.1l7.4步骤与测试平行进行测定结果计算样品中待测物的含量按式(1)计算一p×V×1000 p w m1000 式中: -样品中待测物的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
GB/T40899一202 从标准曲线得到的样品溶液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); p 从标准曲线得到的空白溶液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); p 样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL); -样品质量,单位为克(g) n 计算结果表示到小数点后两位回收率在添加浓度5mg/kg~50mg/kg范围内,澳米索伐的回收率为87.2%105.3%,卡嗅脉的回收率为90.1%103.9%;在添加浓度20mg/kg200mg/kg范围内,卡立普多的回收率为90.1% 115.2% 10精密度在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%
GB/T40899一2021 录附 A 资料性) 澳米索伐、卡澳脉和卡立普多的英文名称,CAs号分子式、相对分子质量与结构式祺米索伐、卡嗅脉和卡立普多的英文名称,CAS号,分子式、,相对分子质量与结构式见表A.1 表A.1溴米索伐、卡溴脉和卡立普多的英文名称、CAs号、分子式、相对分子质量与结构式序号中文名称英文名称 CAS号分子式相对分子质量结构式 496-67-3 223.07 祺米索伐 C,HBN.O. Bromisoval H 77-65-6 237.09 卡嗅脉 arbroma c,HBrN,O. NH 78-444 260.33 卡立普多 CHN,o Carisoprodol HN
GB/T40899一202 附录 B 资料性澳米索伐、卡澳脉和卡立普多标准溶液的高效液相色谱图溴米索伐、卡溴脉和卡立普多标准溶液的高效液相色谱图见图B.1 5X106 1.5X10 燕发光散射检测器二极管阵列检测器 5.34 10.96 4x10 1.0x10 3X10 5.,39 2X10 8.36 5.0x10+ 1×10 0.0 10 10 时间/min 时间/minm 澳米索伐和卡澳脉的高效液相色谱图卡立普多的高效液相色谱图 b 注三种待测物质量浓度均为 100mg/L;澳米索伐的保留时间为 5.34min，卡澳腺为8.36min,卡立普多为 10.96min 图B.1溴米索伐卡溴脉和卡立普多标准溶液的高效液相色谱图
GB/T40899一2021 附录 C 资料性确证试验液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下色谱柱:C固定相(2.1mm×100mmi.d.,3.54m),或相当者; a 流动相;乙睛(5.3)-0.1%甲酸水溶液(50十50,体积比),等度洗脱 b 流速;0.3mL/min; c 柱温;30C; d 进样量:5L e C.2质谱参考条件质谱参考条件如下: 离子源:电喷雾离子源(ESI); aa b 离子化模式;正离子模式; 毛细管电压;3.0kV; e d 萃取电压:3.0V; 离子源温度:150C; e fD 脱溶剂气温度:500; 数据采集方式:多反应监测(MRM). 8 C3定性测定按液相色谱-质谱条件测定样液和标准工作溶液样品溶液中待测物的响应值需在标准曲线的线性范围内,如超过线性范围则稀释后再进样测定如果所选择的离子均出现,而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致,允许相对偏差不超过表C.1规定的范围,则可判断样品中含有溴米索伐、卡嗅脉或卡立普多三种待测物的选择离子质量色谱图见图C.1 表C.1澳米索伐、卡澳脉和卡立普多的质谱分析参数相对离允许相保留时间锥孔电压碰撞能量待测物定性离子对m/ 子丰度对偏差 eV min % % 223.1/179.9,223.1/57.1 士25% 澳米索伐 1.83 20 14,18 l00,4 2.27 237.1/194.1,237.1/114.2 士20% 卡澳脉 30 8.l4 100.80 卡立普多 2,47 261.1/176.1,261.1/62.0 6,15 100,81 士20% 30
GB/T4089g一2021 100- 100- 米索伐，223.1>7. 223.1>179.9 不W 75 75 2.0 2.0 时间/min 时间/minm 100 100. 下次，237.4.2 次脉，237.1194.1 75 75 50. 25 0.5 .0 2.0 o 3.0 0.5 2.0 .5 时间/min 时间/minm 100 100 卡立普多，261.1>176.1 261.1>62.0 下豆背多家 75 75 50. 25 8o 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 时间/min 时间/mim 注澳米索伐的保留时间为1.83nmin,卡澳脉为2.27nin,卡立普多为2.17nin. 图c.1溴米索伐、卡嗅腺和卡立普多标准物质的选择离子质量色谱图

化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定高效液相色谱法GB/T40899-2021

化妆品是人们日常生活中必不可少的产品，但随着人们对安全性和质量的要求越来越高，一些有害物质被纳入了禁用物质范畴。其中，溴米索伐、卡溴脲和卡立普多作为化妆品中的禁用物质，其准确测定显得尤为重要。

禁用物质的测定方法

目前，针对化妆品中禁用物质的测定方法主要有气相色谱法、液相色谱法和质谱法等。而高效液相色谱法是一种快速、准确的测定方法，也是目前应用最广泛的测定方法之一。

高效液相色谱法的原理是将待测样品通过柱子分离出各种化合物，并通过检测器检测各个化合物在特定条件下所表现出来的色谱峰，从而确定其中是否含有禁用物质。

GB/T40899-2021对高效液相色谱法的规定

国家标准GB/T40899-2021《化妆品中溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定高效液相色谱法》规定了化妆品中的禁用物质的测定方法和要求。其中，高效液相色谱法是一种推荐的测定方法，并详细规定了样品的处理方法、试剂的选用、操作步骤、计算公式等。

根据该标准，进行化妆品中禁用物质的测定时，需要注意以下几点：

样品需先提取并经过净化处理。
使用高效液相色谱仪进行分离和检测。
控制柱温、流速等条件，确保分离结果的准确性。
根据标准曲线计算样品中禁用物质的含量。

结论

高效液相色谱法是一种快速、准确的化妆品中禁用物质的测定方法，其准确性和可重复性得到了广泛认可。而国家标准GB/T40899-2021对该方法的规定，有助于进一步提高化妆品禁用物质的测定准确性和标准化程度。