饲料中马杜霉素铵的测定

饲料中马杜霉素铵的测定

国家标准 GB/T23873一2009 饲料中马杜霉素铵的测定 Determinationofmaduramicinammoniuminfeeds 2009-05-26发布 2009-10-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23873一2009 饲料中马杜霉素铵的测定 范围 本标准规定了测定饲料中马杜霉素铵含量的高效液相色谱法(HPIC)和液相色谱-质谱法 (LC-MS). 本标准适用于配合饲料,浓缩饲料和添加剂预混合饲料 HPLC法为定量测定方法,定量限为 1mg/kg LC-MS法为定性测定方法,最低检测含量为0.5mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 采样 3.1采样步骤;按GB/T14699.1的规定执行 3.2试样的制备:按GB/T20195的规定执行 HPLC法 原理 用乙精提取何料中的马杜霉素锁,燕干提取液用乙睛溶解,用对二甲氨基苯甲醛溶液进行柱后衔 生,HPLC测定 4.2试剂和材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂 4.2.1水.GBT6682,一级 4.2.2甲醉;色谱纯 4.2.3乙睛色谱纯 4.2.4四复肤喃;色谱纯 我25 磷酸二氢钾;优级纯 4.2.6磷酸;优级纯 4.2.7 二甲氨基苯甲醛;纯度99% 必 4.2.8硫酸;优级纯 4.2.9磷酸-磷酸二氢钾缓冲溶液(pH3.0):准确称取2.04只磷酸二氢钾(4.2.5),加900ml水溶解 加磷酸(4.2.6)数滴调节pH至3.0,转移到1000mL容量瓶中,用水定容、摇匀 4.2.10流动相;磷酸-磷酸二氢钾缓冲溶液(4.2.9)十四氢吠喃(4.2.4)+甲醇(4.2.2)=100十40+860 4.2.11对-二甲氨基苯甲醛衍生化溶液;准确称取16g对-二甲氨基苯甲醛(4.2.7)于1000mL棕色 试剂瓶中,加人400ml 甲醇(4.2.2),在磁力搅拌器上搅排至完全溶解后,逐滴加人8ml硫酸 4.2.8),继续搅拌至溶液均匀,冷却至室温,24h内使用
GB/T23873一2009 4.2.12马杜霉素铵贮备溶液(1000g/mL):准确称取107.0mg(精确到0.1mg)马杜霉素铵化学对 照品(纯度>93.7%)于100ml容量瓶中,用乙腊(4.2.3)溶解,定容,配制成浓度为1000g/mL.的贮 备溶液 置于4C8C冰箱中,有效期为1个月 4.2.13马杜霉素铵中间溶液I(100ps/L);准确移取马杜霉素铁贮备溶液(4.2.12)5.00mL于 50ml容量瓶中,用乙睛定容 置于4C8C冰箱中,有效期为1周 4.2.14马杜霉素铵中间溶液I(10.0 4说/ml);准确移取马杜霉素做中同溶液I(4.2.13)5.00ml于 50ml容量瓶中,用乙睛定容 置于4 8C冰箱中,有效期为1周 马杜霉素铵工作溶液:准确移取马杜霉素铵中间溶液I(4.2.14)1.00mL、5.00mL于10mL 容量瓶中,马杜霉素铵中间溶液I1.00ml、5.00ml于10ml容量瓶中,马杜霉素铵贮备溶液 m 1.00nml、2.00ml,3.00ml于10ml容量瓶中,用乙腊稀释,定容,配制成浓度分别为1.00g/ /mL、10.0ug/mL、50.0ug/ml、100 0g/ml.,300 5.00 /ml、3004g/mL的工作溶液 现用现配 g 从g 4.3仪器 4.3.1实验室用样品粉碎机 4.3.2分析天平;感量0.1 mg 4.3.3碘量瓶:l50mL 4.3.4超声波清洗器 4.3.5往复式振荡器 4.3.6带盖塑料离心管.100ml. 3.了离心机. 4.3.8旋转蒸发仪;配置150mL.鸡心瓶 4.3.9旋涡混合器 4.3.10高效液相色谱仪:具紫外检测器或二极管阵列检测器 4.3. 11 柱后衍生系统 4.4分析步骤 4.4.1提取 称取约5g试样(精确到0.1mg)于碘量瓶(4.3.3)中,加人乙睛50mL,置于超声波清洗器(4.3.4) 中超声15min,然后置于往复式振荡器(4.3.5)中快速振荡提取20min 转移到离心管(4.3.6)中,用 适量乙睛清洗碘量瓶三次,清洗液合并到离心管中 置离心机(4.3.7)436o离心3min;上清液转移 到鸡心瓶(4.3.8)中,在旋转蒸发仪上60C浓缩定容至5.00mL,旋涡(4.3.9)混匀,分取适量提取液过 有机滤膜上机测定 根据试料溶液中马杜霉素铵的浓度用乙进行稀释,使其上机浓度不高于 3004g/mL 4. .4.2测定 4. 4.2.1液相色谱测定参数的设定 色谱柱:C柱,柱长150mm,内径2.1mm,粒度5m或类似的分析柱 柱温;25C 检测波长:585nm. 进样量;25l 流动相;磷酸-磷酸二氢钾缓冲溶液(pH3.0)十四氢吠喃十甲醇=100十40+860(4.2.10). 流速;0.4mL/" /min 4.4.2.2柱后衍生系统测定参数的设定 衍生化溶液:对-二甲氨基苯甲醛衍生化溶液(4.2.ll). 衍生化溶液流速:0.5mL/min. 反应器容积:1.00n ml
GB/T23873一2009 反应器温度:90C 4.4.2.3定量测定 在上述仪器条件下,分别注人马杜霉素铵工作溶液(4.2.15)和试料溶液(4.4.1)进行测定 用工作 溶液做单点校准或多点校准,以色谱峰的峰面积进行定量计算 4.5结果计算 饲料中马杜霉素铵的含量X以质量分数表示,单位为毫克每千克(mg/kg),按式(1)计算 AxY X= 7mn 式中: 一试料游液中马杜霉素敏峰而积的响应值对应的浓度,单位为微克每毫升(wg/ml) 试料溶液的体积,单位为毫升(mL); 试料的质量,单位为克(g) 7 每个试样取两份试料进行平行测定,以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果,保留三位有效 数字 4.6重复性 在重复性条件下完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于10% LC-MS法 5.1原理 用乙睛提取饲料中的马杜霉素铵,提取液蒸干后用乙睛溶解,用I.C-Ms测定 5.2试剂和材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂 5.2.1水,GB/T6682,一级 乙睛.色谱纯 5.2.2 流动相.乙睛(5.2.2)十水(5.2.1)=90+10 超声脱气5min. 其他同4.2.12一4.2.15 仪器 5.3 液相色谱-质谱仪 5.3.2其他同4.3.1一4.3.9 5 分析步骤 5.4.1提取 同4.4.1,但需要根据试料溶液中马杜霉素铵的含量用乙晴进行稀释,使上机溶液浓度不高于 50 /mlL 从g 测定 5.4.2 5.4.2.1液相色谱测定参数的设定 色谱柱:C柱，柱长150mm,内径2.1mm,粒度5Am或类似的分析柱 进样量:5l 流速:0.2mL/min 柱温;30C 流动相:乙睛十水=90+10(5.2.3 5.4.2.2质谱测定参数的设定 离子化模式;电喷雾离子源,负离子模式(ESL) 雾化气压力;2.76X10Pa(40.0psi) 干燥气流 速:9.0L/1 干燥气温度:350C 毛细管出口电压:一3500V 碰撞气:氨气 离子电荷控制 min
GB/T23873一2009 ICC) 1200 ):on 扫描范围:100m/ m/: 化合物稳定性:30% 质谱振幅:1.00V 开始振幅 30% 结束振幅:100% 定性离子;母离子(m/:):915,子离子(m/:):613,871. 5.4.2.3定性测定 在相同试验条件下,利用质谱定性离子定性 样品与标准溶液中马杜霉素铵的保留时间偏差应在 士2.5%之内;样品与浓度相近的标准溶液中马杜霉素铵的质谱定性离子进行比较,子离子匹配度在 700~1000之间(或者子离子相对丰度的偏差在表1规定的范围内)则判定样品中存在马杜霉素铵 表1定性确证时子离子相对丰度的允许偏差 子离子相对丰度/% 50 2050 l020 s10 士25 偏差/% 士20 士30 士50
GB/T23873?2009 ?A ?? ù? A.1ù??(IHPLC)?A.1 mAU 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 a.05 wMwm wm hmM / AA wr min ?A.1ù??(1.00g/mLl,PIcC) A.2ù??A.2 lmtcns x1r 915,6 934.17 ?? 1034.0 H6 NH 872.5 839.6 250.0 619.0652.9 0 613.3 .25 871.5 .00 0.5 839.4 0.50 0.25 653.2 271u.3 0.00 200 400 600 800 000 T ?A.2ù(Maduramiein Ammoium )?