国家标准 GB/T28070一2011 黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法 DeteetionandidentifieationofTiletiavalkeriCastlebury&Carris 2011-12-30发布 2012-06-01实施国家质量监督检监检疫总局发布国家标准花管理委员会国家标准
GB/T28070一2011 前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口本标淮起草单位深圳出人境检验检疫局,深圳市检验检疫科学研究院本标准主要起草人:章桂明、程颖慧、王颖、陆清、凌杏元、龙海、陈枝楠、刘新娇、仲建忠、杨伟东、缪建锯
GB/T28070一2011 黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法范围本标准规定了黑麦草腥黑粉菌的检疫鉴定方法和检疫鉴定流程,明确了取样和样品保存方法本标准适用于黑麦草传带黑麦草腥黑粉菌的检测以及小麦中污染的黑麦草腥黑粉菌的检测. 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.2 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样黑麦草腥黑粉菌基本信息中文名:黑麦草腥黑粉菌学名;TilleliawalheriCastlebury&.Carris(简称Tw) 英文名:ryegrassbunt 属真菌界Fungi、担子菌门Basidiomycota、黑粉菌纲Ustomycetes、黑粉菌目Ustilaginales、腥黑粉菌科Tletiaceae,腥黑粉菌属Tilletia 病粒及附着于健康种子表面的冬抱子是病原菌进行远距离传播的主要途径,由于该病局部侵染的特性,在收获期间很难有效的清除混杂于健康种子中的病粒,因而病粒可随同小麦或黑麦草的资源性引种或科研性引种而进行远距离传播黑麦草腥黑粉菌的其他信息参见附录A 方法原理根据黑麦草腥黑粉菌的生物学和形态学特征以及分子生物学特征,应用相关仪器,包括显微镜和 PCR仪等对小麦印度腥黑穗病菌进行鉴定检疫鉴定流程检疫鉴定流程见图1
GB/r28070一2011 样品洗涤镜检发现疑似TW子未发现疑似TW预子查找菌娘单个冬他子分子检渊冬袍子萌发发闱疑似Tw菌粮未发现疑似TW南独 C阳录D 判定为不带TW跑子抱了培养物分了检测形态学鉴定进行形态学鉴定或附录E附录F附录G C附录A附录B、附录Q 分子检测荧车校 x 结果判定结果判定深股菌楼或洗涤检疫抱招学平海流养他学的t 了平均值小于25um 结果呈阳性结果星刚性 Hm 0m吗或大于35Hm判定为 30m31m 5 判定为W 判定为非Tw m之判定为Tw 分图1黑麦草腥黑粉病菌检疫鉴定流程图取样方法散装船运黑麦草种子及小麦参照GB/T18085取样方法进行取样袋装黑麦草及小麦参照SN/T2122取样方法进行取样
GB/T28070?2011 ?豸? ?豸 7. 1.1? 7. 1.2? 1.3? 77 7.1.4. 7.1.5? A.± 7.1.7? 7.1.8? 1.9? 7.1.10 7.1.12?? ? ? 1.15??? 1.16PCR(CR,???PCR) 1.17?(?,??) 18m(9em) ?(40 Mm20Mm) ?100Am?? ??(250ml500ml) mm18mm) ??(18" 7.1.23PR?(0.2 mL,0.5mL 7.1.24??(25mmx76mm),(a.8mm~l.0mm). ?10L.,5AL?200LIl~1oAL 7.1.25Tip?(0.1Al 7.1.26???(2AL,10L,20L,l00AL,200AL,1000AL 7.2?? й涨,??? 7.2.1? 7.2.2 7.2.3 7.2 7.2.5 7.2.670%? 7.2.7 ?? 7.2.8 Tris?? 7.2.9 Taq?
GB/r28070一2011 Gelatin 7.2.10 7.2.11澳化乙锭 7.2.12DNAMarker 7.2.13PDA培养基 7.2.14sDS提取液 7.2.15rcR缓冲液 7.2.16电泳缓冲液 7.2.17上样缓冲液 7.2.18Bigdye试剂盒 7.2.19TaManUmiversalPCRMasterMix 7 .2.20席尔氏浮载剂,见GB/T18085 7.2.21dNTPs(dATP、dGTP,dCTP,dTTP) 检测与鉴定 8.1实验室器皿和晒网前处理将所有实验器皿和筛网浸泡于1.6%的次氯酸钠中15min,然后用蒸圜水冲洗5次形态学鉴定对查找到菌癌,或通过洗涤检验获得冬袍子的,先进行形态学鉴定对菌采用解剖针挑取菌缨的冬抱子,置于席尔氏液中制片,对洗涤检验采用滴管吸取冬袍子悬浮液制片,待冬袍子胶质鞘允分展开后,进行封片,观察冬袍子的形状,袍壁结构,在100×油镜下测量冬抱子的大小,每个样品测量100 个冬袍子形态学鉴定的具体操作过程见附录B,Tw与近似种的形态学图参见附录C 8.3单个冬袍子直接分子检测对未查找到菌!,但通过洗涤检验发现疑似黑麦草腥黑粉菌冬袍子的,要进行单个袍子分子方法检测每个PCR反应检测1个冬袍子,共检测5个冬抱子每次PCR检测应设立相应的阳性对照、阴性对照和空白对照单个冬袍子直接分子鉴定的具体操作过程见附录D 8.4抱子培养物的分子检测对未查找到菌癌,但通过洗涤检验发现疑似黑麦草腥黑粉菌,而这些疑似黑麦草腥黑粉菌通过形态学和单个袍子检测无法获得准确结果时,则要对抱子进行培养(培养方法见E.1),用培养物分子检测每次PCR检测须设立相应的阳性对照、阴性对照和空白对照袍子培养物分子检测的具体操作过程见附录E、附录F 8.5序列测定与比对将PCR产物纯化后,进行测序,或由生物公司完成把测序所得的核苷酸序列与已知的黑麦草腥黑粉菌相应序列进行比对序列比对的具体操作过程见附录G
GB/T28070一2011 结果判断与表述 9 形态学鉴定结果判断和表述对查找到的菌痿中的冬袍子或通过洗涤检验获取的冬袍子,所观察的症状和形态学特征与黑麦草腥黑粉润冬袍子的一致,且对其100个袍子大小测量平均值介于30pm一31pm,则判定该样品中含有黑麦草腥黑粉菌;对其100个袍子大小测量平均值小于25Am或者大于35Am,则判定该样品不含有黑麦草腥黑粉菌;如袍子大小介于254m一30m或31Am~ 35m之间,则判定该样品含有疑似黑麦草腥黑粉菌,须进行进一步分子检测单个袍子直接分子检测结果判断和表述 9.2 9.2.1常规PCR检测结果判断和表述单个袍子进行常规CR检测,在阳性对照,阴性对照和空白对照结果均正常的情况下,如样品的扩增产生473bp的特异性条带,且测序比对与黑麦草腥黑粉菌一致的判定为该样品含有黑麦草腥黑粉菌,如没有PCR扩增条带的则须挑取袍子进行萌发,进行分子检测 9.2.2实时荧光CR检测结果判断和表述对单个袍子进行MGB探针实时荧光PCR检测,在阳性对照、,阴性对照和空白对照结果均正常的情况下,则: -检测ct值小于或等于36,判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阳性 -检测Ct值大于36,应重做实时荧光PCR,再次扩增后,如C值小于或等于36,判定同上;如再次扩增后Ct值大于36,则需要挑取冬袍子进行萌发,用袍子培养物进行分子检测 9.3抱子培养物分子检测结果判断和表述 9.3.1常规PCR判断和表述对抱子培养物进行常规PCR检测,在阳性对照,阴性对照和空白对照结果均正常的情况下,如样品的扩增产生414bp(引物Tinl1/Tin4)或473bp(引物P14)的特异性条带,则初步判定黑麦草腥黑穗菌检测结果呈阳性,但需进一步进行实时荧光PCR检测或序列测定与比对进行结果验证,按照实时荧光 PCR检测或序列测定与比对结果进行最后结果判定;如该样品无特异性扩增条带,则判定黑麦草腥黑穗菌检测结果呈阴性实时荧光PCR结果判定和表述 9.3.2.1普通探针实时荧光CR结果判定和表述普通探针的实时荧光PCR检测,在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正常的情况下,则 -检测Ct值小于34,判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阳性; -检测Ct值大于或等于34,判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阴性 g.3.2.2MG探针实时荧光PCR结果判断和表述 MGB探针实时荧光PCR检测,在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正常的情况下,则 -检测Ct值小于或等于36,判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阳性; -检测Ct值大于或等于40,判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阴性;
GB/r28070一2011 -检测Ct值在3640之间,应重做实时荧光PCR,再次扩增后,如Ct值小于或等于36或者C 值大于或等于40,判定同上 9 序列测定和比对把测序所得到的核苷酸序列与已知的黑麦草腥黑粉菌序列进行比对,如果与已知的黑麦草腥黑粉菌相应序列完全一致则判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阳性,不一致则判定黑麦草腥黑粉菌检测结果呈阴性 10 样品与原始数据保存 10.1样品保存存查样品应视样品的状态采用相应的保存方式,妥善保存6个月如发现黑麦草醒黑粉菌,该样品应保存1年,以备复验,如涉及到贸易纠纷则应保存到纠纷解决完毕保存期满后,需经灭菌处理 10.2原始数据保存样品检测结束后,其原始记录单和检验报告或证书应归档,妥善保管,以备复验、谈判和仲裁
GB/T28070一2011 附录A 资料性附录黑麦草腥黑粉菌其他信息 A.1分布主要分布在美国、澳大利亚,新西兰、加拿大、丹麦、荷兰、日本、西班牙等国家 A.2形态特征及寄主黑麦草腥黑粉菌局部为害黑麦草穗部,感病小穗形成深褐色菌瘦,外表由菌丝化的果皮包被,与感病子粒果皮本身具有的淡紫色难于区别,发病严重时,小穗的子房完全被黑粉菌袍子所代替黑麦草腥黑粉菌冬抱子直径为25Am35Am(平均30Am),较T.indica的直径254mm43Am(354m)略小冬抱子为淡黄褐色,或金褐色至暗褐色,外袍壁表面纹饰为粗糙的疣状突起,呈同心轮纹状排列,疣突外观较T.indhica更为粗糙目前已知自然寄主仅为黑麦草
GB/r28070一2011 B 附录规范性附录形态学鉴定 B.1菌瘦查找在体视显微镜下,检查黑麦草种子中有无菌! 对于感病较重的种子,菌~颜色多呈暗紫褐色,不同于健康种子,感病种子因腥黑粉菌抱子而散发出三甲胺气味对于感病轻微的种子,可采用将黑麦草种子浸泡在水中检查菌樱 B.2洗涤检验 B.2.1取50召样品放人250ml锥形瓶中,加人100ml无菌蒸溜水(含0.01%Tween-20),放于摇床 200r/min摇动3min以便释放袍子 B.2.2将洗涤液倒在上层的40m的筛网上,20m筛网在下层,进行抽气过滤,用500ml.的锥形瓶接收滤液 B.2.3用100ml.无菌蒸憎水冲洗250ml锥形瓶中样品2次,然后将样品洗涤液倒在40Am的筛网上,再用200mL300mL无菌蒸溜水冲洗40Am筛网,确保袍子从样品上分离 B.2.4移去40Am筛网,将20m筛网倾斜成45",用无菌蒸僧水将筛网上的袍子都冲洗下来,然后将袍子洗涤液倒人离心管中,1000g离心3nmin. B.2.5用移液管将上清缓缓吸出,最后加人席尔氏液,视沉淀物多少定容至100Al一500AL,混匀镜检 B.3形态学鉴定用解剖针挑起少量袍子,置于席尔氏液中制片,在显微镜下观察袍子大小,颜色和抱壁结构,在 100×油镜下测量100个冬抱子 B.4结果判定形态学鉴定的结果判定见9.1
GB/T28070?2011 ? c ?? ??????? C.1??????(EPPO,2004)?C.1 ?C.1?????? c.2????羵???(imPlaskowitz,2006)?c.2. ?c.2????羵??? c.3С??????(?,2005)?c.3
GB/r28070?2011 ?C.3С?????? С???羵???(?,05)?c.4 C.4 ?C.4С????羵??? 10
GB/T28070一2011 附录D 规范性附录单个冬袍子直接分子检测 D.1单个抱子核酸制备菌中冬袍子获取方法;用针刺破菌!,挑取其中不带植物组织的少许袍子,将这些袍子轻轻展布于载玻片上,在低倍镜下观察袍子是否分散开,再将单个抱子挑起,直接转移到PCR管的管盖中,在低倍镜下确认袍子是否已被成功放置袍子悬浮液中冬袍子的获取方法;用显微操作系统(或在倒置显微镜下人工操作)从袍子悬浮液中吸取抱子,所用毛细管孔径为100xm,整个操作过程可在检测器上进行监控,也可在显微镜下直接进行观察,确认袍子已被吸人毛细管内并被转移到PCR管的管盖内用破壁针对放置在CR管盖中的抱子实施破壁;在10×低倍镜下用破壁针头轻轻挤压袍子,促使抱子壁破裂,使袍子中的核酸释放出来,在显微镜下检测袍子壁是否已经被压破快速将PCR反应混合液加到PCR管盖中,振荡混匀,置于冰上,振荡后离心 D.2分子生物学检测 D.2.1常规CR检测 D.2.1.1常规PCR引物序列常规PCR引物序列为: 正向引物P14-1:5'-TGTTTGAGCCAcGCTATGACC-3” 反向引物P14-2:5’-AACTTcCAAGGCGACCATTC-3 D.2.1.2常规PCR扩增体系及条件反应体系总体积为25l,各成分终浓度为;2.5l10×PCR缓冲液[Tis-HClpH8.0)10mnmol/1. Mg+1.5nmmol/L,KCl50mmol/1],2Ld小NTPs(2.5mmol/L),0.25Al各引物(10mol/L). 0.3AlLTaq酶(5U/AL),2.5AlLGelatin[O0.01%(wt/vol],无菌双蒸水17.2AlL 将反应体系混匀，离心后置于PCR仪中进行反应,每个PCR反应检测1个冬抱子,共检测5个冬抱子用无菌双蒸水作空白对照,阳性对照采用含有黑麦草腥黑粉菌的DNA作为模板,阴性对照以其他腥黑穗病菌DNA作为模板 PCR的反应条件为96C预变性3min,然后进人循环反应;96C变性15s,59C退火15s,72C延伸15s,共70次循环,72C延伸10min D.2.1.3琼脂糖凝胶电泳每个样品取5L的PCR产物与1AL的6×上样缓冲液混合均匀,并加到含有溴化乙锭(0.54g/mL 的1.2%琼脂糖凝胶中,在120V下进行电泳电泳结束后在凝胶成像系统中观察、拍照,并保存照片 1l
GB/r28070一2011 D.2.2实时荧光PCR检测 D.2.2.1实时荧光PCR引物及探针序列实时荧光PCR引物及探针序列为: 正向引物MP3-l;5'-CTCGAGCCACTCCGTTGG3” 反向引物MP3-2;5'-GACAACTCCAGTGATGGCTCC-3 探针序列MPb35'-FAMTACTCTTCATTGCCCTCA-MGB3 D.2.2.2实时荧光CR反应体系及条件反应体系总体积为5L.各成分为;实时荧光反应混合液2.5LTagManUniverslPCRMastee Mhix0.5,L各引物40, amolL),0.1AL探针(10mol/L),无菌双燕水1.5L 将反应体系混匀 A" 离心后置于实时荧光PCR仪中进行反应,每个实时荧光PCR反应检测1个冬袍子,共检测5个冬抱用无菌双蒸水作空白对照,阳性对照采用含有黑麦草腥黑粉病菌的DNA作为模板,阴性对照以其他腥黑穗病菌DNA作为模板设置扩增反应条件为50C预热2min,95C变性10min,然后进人循环反应95C变性15s,60 延伸1min,共40次循环对实时荧光PCR仪的程序进行设置,以使该仪器能进行FAM荧光的检测 D.3结果判定结果判定见9.2 12
GB/T28070一2011 E 附录规范性附录抱子培养物常规CR检测 E.1抱子萌发挑取冬抱子,置于2%水琼脂培养基上,1820C、每日连续光照12h条件下培养10d,解剖镜下检查萌发情况对萌发的抱子用接种针挑取置于PDA培养基上,20C一22C培养20d .2抱子培养物的核酸制备 E.2.1称取0.1g培养物,放在无菌的多层谴纸上,服去水分,置于无菌的研钵中,用液氮冷冻,用研磨棒将它们研成粉末 E.2.2立即转移到2ml的离心管中,加人65C预热的SDs提取液700Al,置于水浴锅中65C水浴 30nmin,期间不断混匀 E.2.3加人5Al10mg/mlRNA酶,充分混匀,在37C放置30min E.2.4加人等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,在12000r/min下离心15min E.2.5取上清液,加人11三氯甲炕/异戊醉(241),在12000r/min下离心15min;重复一次该步骤 E.2.6加人等体积预冷的异丙醇,轻轻摇晃,置于一20C冰箱静置30min,在12000r/min下离心 15min E.2.7弃上清液,加人70%乙醇500L,12000r/min下离心3min,弃上清液,重复2次 E.2.8得到DNA沉淀,用冷冻干燥仪进行干燥,加人30Al50ALTE或水,充分溶解后,测量DNA 的纯度和浓度后置于一20C冰箱中保存注;袍子培养物的核酸也可采用DNA提取试剂盒提取 E.3DNA纯度与浓度的测定用核酸蛋白分析仪测定DNA的纯度与浓度,分别取得260nm和280nm处的吸收值,计算核酸的纯度和浓度,计算见式(E.1)和式(E.2) E.1 DNA纯度=OD./OD DNA浓度(E/mb) =50×OD00 E.2) PCR级DNA溶液的OD/OD比值为1.71.9 E.4常规PCR E.4.1引物序列引物序列为正向引物Tinll;5’-TAATGTTGGCGTGGCGGCAT-3” 反向引物Tin4;5'*-CAACTcCAGTGATGGCTcCG;3 也可以选用D.2.1.1中的P14引物 13
GB/r28070一2011 E.4.2扩增体系及条件引物Tinl1/Tin4的反应体系总体积为25l,各成分为;2.5AL10×PCR缓冲液[Tris-HCl pH8.0)10mmol/L,Mg+1.5mmol/L,KCl50mmo ol/I]，lALdNTPs(10mmol/L),0.1L.各引物 (25 54mol/L),0.1lAmpliTaq(5U/L),lAlLDNA(10ng/L),无菌双蒸水20.2AlL 将反应体系混匀,离心后置于PCR仪中进行反应,每个反应重复2次用无菌双蒸水作空白对照,阳性对照采用含有黑麦草腥黑粉菌的DNA作为模板,阴性对照以其他腥黑穗病菌DNA作为模板 PCR的反应条件为94C预变性1min,然后进人循环反应:94C变性15s,65C退火15s,72延伸15s,共25次循环,72C延伸6min 引物P14的扩增体系和反应条件见D.2.1.2 E.5琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳见D.2.1.3 E.6结果判定结果判定见9.3.1 14
GB/T28070一2011 附录！规范性附录袍子培养物实时荧光CR检测袍子的萌发 F.1 袍子的萌发见E.1 r.2抱子培养物的核酸制备抱子培养物的核酸制备见E.2 .3DNA纯度与浓度的测定 DNA纯度与浓度的测定见E.3. F.4普通探针实时荧光PCR检测 F.4.1引物及探针序列引物及探针序列为(FrederickRD,2000) 引物序列同E.4.1 探针序列为:5'-FAM-ATTCCCGGCTTCGGCGTCACT-TAMRA-3’ F.4.2反应体系及条件反应体系总体积为25AL.,各成分为;实时荧光反应混合液12.5LTagManUiversalCR MasterMix,lL各引物(10Amol/L),lAL探针(10mol/L),lALDNA(10ng/L),无菌双燕水 8.5l 将反应体系混匀,离心后置于实时荧光rCR仪中进行反应,每个反应重复2次用无菌双蒸水作空白对照,阳性对照采用含有黑麦草腥黑粉菌的DNA作为模板,阴性对照以其他腥黑穗病菌 DNA作为模板反应条件为50预热2 min,95变性10min,然后进人循环反应:95C变性15s,60C延伸 min. n,共34次循环对实时荧光PCR仪的程序进行设置,使该仪器能进行FAM荧光的检测 F.5MGB探针实时荧光PCR检测 F.5.1引物及探针序列引物及探针序列为正向引物MP2-1序列为:5’-AGCG;CTAGGATCATGCGG-3 反向引物MP2-2序列为:5'-CCCGGCTTcGGCGT-3’ 探针MPb2序列为:5'-FAM-TCTGAGGCATcGCTGMGB3’ 15
GB/r28070一2011 也可采用D.2.2.1中的引物和探针进行检测 F.5.2反应体系及条件反应体系总体积为5AlL,各成分分别为:实时荧光反应混合液2.5AlLTaqManUniversalPCR Master rMix,0.45AlL各引物(10mol/1),0.lAl探针(10Mmol/L),lLDNA(10ng/AL),无菌双蒸水0.5L 将反应体系混匀,离心后置于实时荧光PCR仪中进行反应,每个反应重复2次用无菌双蒸水作空白对照,阳性对照采用含有黑麦草腥黑粉菌的DNA作为模板,阴性对照以其他腥黑穗病菌 DNA作为模板反应条件为50C预热2" min,95C变性10min,然后进人循环反应95C变性15s,60C延伸 mm,共0次循环对实时荧光CR仪的程序进行设置,使该仪器能进行FAM荧光的检测 F.6结果判定和表述结果判定和表述见9.3.2 16
GB/T28070一2011 附录 G 规范性附录序列测定与比对 G.1PCR扩增 rDNAITS片段PCR扩增方法如下 ITS4引物序列;5'-TcCTccGCTTATTGATATGC-3” ITS5引物序列:5'-GGAAGTAAAAGTcGTAACAAGG-3’ 反应体系总体积为25L,各成分为;2.5L.10×PCR缓冲液[Tris-HCl(pH8.0)10mmol/L Mg”1. mmol/L.,Kcl50mmol/L],2L.dNTP:(2.5mmol/L),I.25AL各引物(10AmolL). 3L Taq酶(5U/AL),lLDNA(10ng/L),无菌双蒸水16.7AlL 0.3 反应条件为95C预变性10min,然后进人循环反应:95C变性30s,58C退火30s72C延伸 ,共35次循环,72C延伸7 lmin， min 电泳检测见D.2.1.3 对符合条件的PCR产物进行纯化,直接测序,具体操作步骤见相关试剂盒说明书,也可将PCR产物送到生物公司进行测序也可以用附录D附录E中的常规PCR引物进行PCR扩增 G.2序列比对把测序所得的核苷酸序列与已知的黑麦草腥黑粉菌的相对应的序列进行比对 G.3结果判定结果判定见9.4 17

黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法GB/T28070-2011

黑麦草是一种重要的牧草，广泛用于畜牧业生产中。但由于腥黑粉菌的存在，黑麦草的生产受到了很大的威胁。因此，制定一套可靠的检疫鉴定方法就显得尤为必要。

GB/T28070-2011 黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法

GB/T28070-2011《黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法》是我国针对黑麦草腥黑粉菌进行检疫鉴定的标准。该标准规定了取样、处理、观察和鉴定等方面的操作步骤。具体包括：

根据黑麦草生长期和生长特点，确定取样时间和取样部位；
用适宜的处理剂液浸泡黑麦草并洗净；
采用显微镜观察、鉴定腥黑粉菌的种类和数量；
记录样品信息，制作检疫报告。

GB/T28070-2011标准的制定，为我国黑麦草生产提供了重要的法规依据。在实践应用中，该标准已被广泛采用，并起到了良好的检疫效果。

腥黑粉菌对黑麦草生产的危害

腥黑粉菌是一种常见的黑麦草病原真菌，会造成以下危害：

通过空气或种子传播，引起黑麦草的病害；
导致黑麦草生长不良、生长缓慢、叶片枯黄等现象；
降低黑麦草的营养价值，影响牲畜的生产性能。

因此，及时发现和控制腥黑粉菌的危害，对于保障黑麦草生产和畜牧业的发展具有重要意义。

结论

黑麦草是一种重要的牧草，但腥黑粉菌的存在给其生产带来了很大的威胁。而GB/T28070-2011《黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法》则提供了一套科学、规范的黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定操作标准，为保障黑麦草生产和畜牧业发展提供了有力的支持。