饲料中喹乙醇的测定高效液相色谱法

饲料中喹乙醇的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T8381.7一2009 代替GB/T8381.7一2005 饲料中憧乙醇的测定 高效液相色谱法 Determinationofolaquindoxinfeed Highperformaneeliquidchromatography 2009-05-12发布 2009-09-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T8381.7一2009 饲料中呸乙醇的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了以高效液相色谱测定饲料中唾乙醇的方法 本标准适用于配合饲料,浓缩饲料和添加剂预混合饲料中唾乙醇的测定,最低定量限为1mg/kg" 检出限为0.1mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T66822008,IsO3696;1987,MOD) 原理 试样中的唾乙醇以甲醇溶液提取,固相萃取小柱净化,反相液相色谐柱分离测定,紫外检测器检测 外标法定量分析 试剂和溶液 除非另有规定在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级用水 警告畦乙醇对光敏感,应避光操作及使用棕色容器 甲醉(色谱纯》 4.1 4.2提取液;甲醇十水=5+95 4.3高效液相色谱流动相甲醇和超纯水(采用二元梯度》 44淋洗液10.02mol/儿盐酸 移取1.67ml盐酸定容至100ml 淋洗液2:0.1 4.5 mol/L盐酸 移取8.33ml盐酸定容至1000ml 淋洗液3 甲醉十水=5十95. 4.6 洗脱液;甲醇十水=40十60. 畦乙醇标准储备液:准确称取唾乙醇标准品0.05020g(含量>99.6%),于50ml棕色容量瓶中， 超声游解,冷却至室温,定容至刻度,摇匀使其游液浓度为lm/ml.,储存于-18C冰箱中,可使用 个月 4.9呸乙醇标准工作液:准确量取标准储备液(4.8)于容量瓶中,用洗脱液(4.7)稀释,依次配制成浓度 为0.14g/mL1.04g/ml5.04g/ml10.04g/ml.20.04g/ml,50.04g/ml100.04g/mL的标准 溶液,现配现用 仪器 5.1离心机:3500r/min. 5.2摇床:转速可达110r r/min 5.3螺口离心管;50 ml
GB/T8381.7一2009 5.4超声波清洗器 5.5微孔有机相滤膜:孔径0.224m 5.6固相萃取小柱(SPE):OasisHB1ml(30mg)或性能相当者 5.7固相萃取仪 5.8恒温振荡器 试样制备 6 选取有代表性饲料样品至少500g,四分法缩减至100g,磨碎,全部通过0.42mm孔径筛,混匀,装 人密闭容器中,避光低温保存,备用 分析步骤 7.1 试液的制备 7.1.1提取 称取5g试样(准确至0.1mg)于具塞锥形瓶中,加人50ml提取液(4.2),具塞置人摇床中,室温 下恒温振荡器振荡速度110r/min,避光振荡45min 提取液在3500r/min下离心l0min,上清液经 滤纸过滤,滤液作为SPE小柱净化使用 7.1.2净化 SPE小柱的活化临用前分别向SPE小柱中加人2mL甲醇(4.1)和2mL超纯水,对小柱进行活 化 将滤液(7.1.1)2ml加人活化好的sPE小柱,分别用2mL淋洗液1(4.4)、淋洗液2(4.5)和淋洗 液3(4.6)淋洗小柱,并将小柱吹干 最后用2mL洗脱液(生.7)洗脱 7.1.3上机 洗脱液过0.22m有机相滤膜,滤液上机测定 7.2色谱条件 mm,内径4.6mm 7.2.1色谱柱具有C填料的柱子(粒度为5m)柱长2501 7.2.2流动相及洗脱程序;如表1 表1梯度洗脱程序 时间/nmin 超纯水/% 甲醉/% 15 85 15 85 10 30 70 70 14 30 18 15 85 25 15 85 7.2.3流速:l.00ml/min 进样体积;10L一20L 7.2.5检测器;紫外检测器,检测波长260nm 8 定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数 向液相色谱柱中注人待测定呸乙醉标准工作液及试 样溶液(7.1.3),得到色谱峰面积响应值,用外标法定量
GB/T8381.7一2009 结果计算 试样中唾乙醇的质量分数w(mg/kg)按式(1)计算: Xcx P，× w .又m文V 式中 试样溶液峰面积值; 样品的总稀释体积,单位为毫升(mL): 标准溶液浓度,单位为微克每毫升("g/mL) 标准溶液进样体积,单位为微升(L): 标准溶液峰面积平均值; 试样质量,单位为克(g); V 试样溶液进样体积,单位为微升(L. 9.2平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字 10 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10% GB/T8381.7一2009《饲料中隆乙醇的测定高效液相色谱法》 国家标准第1号修改单 本修改单经国家标准化管理委员会于2019年6月4日批准,自2019年6月4日起实施 、将5.6中“固相萃取小柱(SPE):OasisHLB1mL(30mg)或性能相当者”修改为“固相萃取小 柱(SPE):OasisHLB3mL.(60mg)或性能相当者” 二、将7.1.2净化中SPE小柱的活化修改为“临用前分别向SPE小柱中加人3mL 甲醇(4.1)和 3mL超纯水 将滤液(7.1.1)2ml加人活化好的sPE小柱,分别用3mL淋洗液1(4.4)、淋洗液2" 4.5)和淋洗液3(4.6)淋洗小柱,并将小柱吹干 最后用2mL洗脱液(4.7)洗脱 ”