核糖核酸酶活力检测方法

核糖核酸酶活力检测方法

国家标准 GB/T34222一2017 核糖核酸酶活力检测方法 Determinationoftheaetivityofribonuclease 2017-09-07发布 2018-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/34222一2017 核糖核酸酶活力检测方法 范围 本标准规定了核糖核酸酶活力检测原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析 本标准适用于生化试剂核糖核酸酶活力检测 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 核糖核酸雨ribonuclease;RNase 水解核糖核酸(RNA)中磷酸二酯键,生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶 3.2 核糖核酸酶活力单位ribonueleaseaetivityunit 以浓度为0.15mg/mL的1.5mL酵母NA为底物,在50C且pH5.0的条件下,1min内使反应 液在260nm处吸光度增加0.001所需要的酶量 注:一个酶活力单位以U表示 原理 核糖核酸酶催化核糖核酸分解,降解产物在260nm波长下具有特征吸收峰,通过外标法计算核糖 核酸酶的酶活力 仪器设备及器具 5.1恒温水浴槽;精度为0.1 5.2紫外-可见分光光度计;精度为0.001 5.3pH计;精度为0.01 5.41em石英比色 5.5电子天平;精度为0.0001g,0.01g或0.1g 试剂 本方法所用试剂均为分析纯,除特殊说明外,实验用水均为GB/T6882规定的二级水
GB/T34222一2017 6.10.1mol/L乙酸钠/乙酸(CH,cooNu/CH,cooH,NaAe/HAe)缓冲液,pH5.0 称取8.2gNaAc,精确至0.01g,溶于水中,缓慢加人HAc调pH至5.0,混匀后定容至1000mL 6.2酵母核糖核酸 来源于圆酵母,含量>98% 分析步骤 7.1环境要求 所有试验操作应在洁净的无外源RNA酶环境中进行 7.2试验液的制备 7.2.1酵母RNA溶液 称取醉母RNA0.o15g精确至0.0001g,溶于水中,使其溶液浓度为o.15mg/mL. 7.2.2固体样品待测酶液制备 根据标称,称取固体待测样品适量,溶于水中,调节核糖核酸酶活力在10U/mg~200U/mg 7.2.3液体样品待测酶液制备 根据标称,用水调节待测液体样品的核糖核酸酶活力在10U/ml200U/ml 7.3酶促反应 同一样本取4只离心管,设置空白对照管1只,检测管3只,其中空白管中依次加人酵母RNA浴 液1.5ml,水0.5ml 与Na.Ac/HAc缓冲液1.0mL;检测管中依次加人酵母核糖核酸(RNA)溶液 1.5ml、待测酶液0.5mL以及NaAe/HAc缓冲液1.0mL 每个待测酶液设定三个重复即3个检测 管,50C士1C恒温水浴反应时间为15min 7.4分光光度分析 空白对照管标记为0号管,检测管分别标记为1号管一3号管,加样方法如表1所示,反应后在 260nm处测对照管和检测管溶液的吸光度,并记录结果 表1待测样液加样方法 0 试剂 号管 号管 2号管 3号管 酵母核糖核酸溶液/ml 1.5 1.5 1.5 1.5 水/ml 0.5 0.0 0,0 0,0 NaAe/HAc缓冲液/ml 1.0 1.0 1,0 0.5 0.5 0,5 待测酶液/ml 0.0
GB/34222一2017 结果分析 8.1酶活力计算 按照式(1)计算 A X1000×稀释倍数 15 式中: -核糖核酸酶活力(U/mL或U/mg); AA 检测管与空白对照管在260nm处测定得到的吸收值差; 1000. -吸光度原值与活力规定中规定吸光度0.001的换算系数 15 -反应时间与活力单位定义中的换算系数 以平行样的平均值为最终的酶活力测定值,计算结果保留整数位 8.2定量限 本方法的定量限为10U/ml或10U/mg 8.3重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

核糖核酸酶活力检测方法GB/T34222-2017

核糖核酸酶是一类催化RNA水解反应的酶类，广泛应用于生物技术领域。为了更好地评估核糖核酸酶的活力，国家标准化管理委员会发布了GB/T34222-2017标准，该标准提供了一种全面评估核糖核酸酶活力的方法。

GB/T34222-2017标准中包含了一系列检测项，包括基础酶活测定、影响因素测定、稳定性测定以及其他辅助检测项。其中，基础酶活测定是核心检测项，通过比较不同样品的酶促反应速率，可以快速准确地评估样品的核糖核酸酶活力。

为了提高检测精度，GB/T34222-2017标准还采用了多种技术手段。例如，通过引入内参基因等辅助物质，可以消除不同样品之间的差异性；通过加入抑制剂等化学物质，可以有效地降低误差并提高鉴定结果的准确性。

总体而言，GB/T34222-2017标准提供了一种全面、准确、可靠的核糖核酸酶活力检测方法，为生物技术领域的相关研究提供了基础支持。

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