食用植物油中叔丁基对苯二酚（TBHQ）的测定

食用植物油中叔丁基对苯二酚（TBHQ）的测定

国家标准 GB/T21512一2008 食用植物油中叔丁基对苯二酚(TBHQ 的测定 Determinationoftert-butyIhydroquinome(IBHQ)inediblevegetableoil 2008-03-18发布 2008-08-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21512一2008 前 言 本标准参考美国官方分析化学师协会(AOAC)公定方法983.15(第十六版《油脂和奶油中盼类抗 氧化剂的测定液相色谱法》国家标准GB/T5009.302003《食品中叔丁基胫基茴香酰(BHA 与2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)的测定方法》、轻工行业标准QB2395一1998《食品添加剂特丁基对苯 二酚(TBHQ)》中的有关原理和技术内容,在试验的基础上,通过简化操作步骤,提高方法的可操作性和 准确性而研究制定 本标准由国家粮食局提出 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口 本标准起草单位;北京市粮油食品检验所 本标准主要起草人:阮玲、尚艳娥、冈琴、王郑平、夏天文
GB/T21512一2008 食用植物油中叔丁基对苯二酚TBHQ 的测定 范围 本标准规定了采用气相色谱、液相色谐测定叔丁基对苯二酚(TBHQ)的原理,试剂、仪器和设备、分 析步骤、结果计算及精密度 本标准适用于较低熔点的食用植物油中TBHQ含量的测定 本标准不适用于熔点高于35C以上的食用植物油中TBHQ含量的测定 本标准定量限:气相色谱法为0.001g/kg,液相色谱法为0.006g/kg 本标准中气相色谱法为仲裁方法 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T5524植物油脂检验托样、分样法 GB/T15687油脂试样制备 气相色谱法 3.1原理 食用植物油中的TBHQ经体积分数为80%乙醇提取、浓缩、定容后,用气相色谱仪测定,外标法 定量 3.2试剂 除非另有说明,本标准所使用的试剂为分析纯,水为蒸僧水或去离子水或相当纯度的水 3.2.195%乙醇 3.2.2无水乙醇 3.2.3二硫化碳 3.2.480%乙醉游液，量取8Oml.95%乙醉和15ml蒸憎水.将二液混合 3.2.5TBHQ标准储备溶液(000退/ml);准确称取TBHQ基准试剂(相对分子质量166.22,含量 g，放人小烧杯中,用1mL无水乙醉溶解TBHQ晶体后,加人5mL左右二碗化碳 98.0%)0.1000s 转移到100mL容量瓶中 再用1mL无水乙醉洗涤烧杯后,加人5mL左右二碗化碳,转移到容量瓶 中,用二硫化碳至少洗涤3次烧杯,定容至100ml,配成浓度为10004g/ml的TBHQ标准储备液,置 于棕色瓶中4C下保存,可保存6个月 3.3仪器和设备 3.3.1气相色谱仪:具有氢火焰离子化检测器(FID) 2 3.3. 混合器:旋涡式混合器 3.3.3 比色管;25ml 3.3.4瓷蒸发皿:60mL
GB/T21512一2008 3.3.5刻度试管:2mL或5mL 3.3.6微量注射器 3.4分析步骤 3.4.1样品的托样、分样和制备 按GB/T5524,G;B/T15687执行 3.4.2试样处理 准确称取试样2.00g于25mL.比色管中,加人6ml.80%乙醇溶液,置旋涡混合器上混合3s5s (或振摇15s),静置片刻,放人90C左右的水浴中加热促其分层,分层后立即将上层提取液用吸管转移 到燕发中(用吸管转移时切勿将油滴带人) 再用6mL80%乙醉溶液重复提取试样两次,提取液一 并加人蒸发皿中 将蒸发皿放在60C水浴上通风挥发或自然挥发至近干(切勿蒸干) 向蒸发皿中加 人二硫化碳,少量多次洗涤燕发皿中残留物,转移到刻度试管中,用二硫化碳定容至2.0mL,作为试样 测定液 .4.3色谱参考条件 色谱柱;玻璃柱,内径3mm,长3m,填装涂布2%oV-1固定液的80目100目Chromosorbw AwDMCS. 仪器条件;检测器和进样口温度250c,柱温180c 氮气压力250kPa,氢气压力65kPa,空气压 力55kPa 3 .4.4测定 3.4.4.1制作标准曲线 准确移取TBHQ标准储备溶液0.0ml2.5mL、,5.0m、7.5ml、10.0mL、12.5ml于50ml容 量瓶中,用二硫化碳定容,制备成浓度为04g/mL,504g/mL,1004g/mL、,1504g/mL、2004g/mL 250g/mL的标准溶液,用微量注射器由低到高依次准确吸取不同浓度的标准溶液2AL注人气相色谱 仪测定 以TBHQ峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线 33 4.4.2试样测定 用干净的微量注射器准确吸取2A测定液,注人气相色谱仪测定,取试样的TBHQ峰面积与标准 曲线比较定量 3.5结果计算 试样中的叔丁基对苯二酚(TBHQ)含量按式(1)进行计算 cXx100o Xi= OIw 式中: X 试样中的叔丁基对苯二酚TBHQ)含量,单位为克每千克(g/kg); 由标准曲线上查出的试样测定液中相当于TBHQ的浓度,单位为微克每毫升(g/ml); 试样提取液的体积,单位为毫升(mL) mn 试样的质量,单位为克(g). 计算结果保留两位有效数字 3.6精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的10% 液相色谱法 4.1原理 食用植物油中的TBHQ经体积分数为95%乙醇提取、浓缩、定容后,用液相色谱仪测定,外标法 定量 2
GB/T21512一2008 4.2试剂 4.2.1甲醇;色谱纯 4.2.2乙睛;色谱纯 4.2.336%乙酸;分析纯 4.2.495%乙醉;分析纯 4.2.5异丙醇;分析纯,重燕僧 4.2.6异丙醇-乙晴混合液V异丙醇)V(乙睛)=1十1 4.2.7TBHQ标准储备溶液(10004g/mL):准确称取TBHQ基准试剂相对分子质量166.22,含量 >98.0%)0.0500g,放人小烧杯中,用异丙醇-乙晴混合液溶解,转人50mL容量瓶中,再用少量混合 液洗涤烧杯3次,转人容量瓶中,用异丙醉乙腊混合液定容至50ml.,配成浓度为1000p版/mL的 TBHQ标准储备液，置于棕色瓶中4C下保存,可保存6个月 4.2.8TBHQ标准稀释液(00g/ml);准确移取TBHQ标准储备液10.00ml 于100ml容量瓶 中，用异丙醇-乙睛混合液定容至100mL,置于棕色瓶中4C下保存 4.3仪器 4.3.1高效液相色谱仪:配有二极管阵列或紫外检测器 4.3.2蒸发器;真空旋转蒸发器 4.3.3混合器;脆涡式混合器 4.3. 具塞试管:10ml、25ml 4.3.5浓缩瓶 4.3.6微量注射器 4.4分析步骤 4.4.1样品的托样,分样和制备 按GB/T5524,GB/15687执行 4.4.2试样处理 准确称取试样2.00g于25mL比色管中,加人6ml95%乙醇溶液,置旋涡混合器上混合3s一5s 或振摇15s),静置片刻,放人90C左右水浴中加热促其分层,分层后立即将上层提取液用吸管转移到 浓缩瓶中(用吸管转移时切勿将油滴带人) 再用6mL95%乙醇溶液重复提取试样两次,合并提取液 于浓缩瓶内,该液可放在冰箱中储存约16h 乙醉提取液在40C下,10min内,用真空旋转蒸发器浓缩至约1ml,将浓缩液转移至10ml试管 中,用异丙醇-乙睛混合液至少洗涤3次浓缩瓶,定容至10mL,经0.45am滤膜过滤于小瓶中,作为试 样测定液 4.4.3色谱参考条件 色谱柱:C柱,250mm×4.6mm(内径). 流动相:(A)甲醇-乙晴混合液[V甲醇)十乙晴)=1十1];(B)5%乙酸水溶液(100ml水加 5ml36%乙酸 柱箱温度:40C 波长:280nm 流速:2mL/min. 洗脱梯度:0min8min流动相(A)从30%线性增至100%,8min~14min流动相(A)100% 14min17min 流动相(A)从100%降至30%
GB/T21512一2008 4.4.4测定 制作标准曲线 4,4.4.1 准确移取TBHQ标准使用液0.0ml,0.5ml、1.0ml、1.5ml2.0ml5.0ml、l0.0mL,于 10.0m容量瓶中,用异丙醇-乙睛混合液定容至10mL,制备成浓度为04g/mL、54g/mL,104g/mL 4E/mlL、,504E/mL.I00g/ml的标准溶液,用微量注射器由低到高依次准确吸取不同浓度的标准 20 溶液20L注人液相色谐仪测定 以TBHQ峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线 4.4.4.2试样测定 用干净的微量注射器准确吸取20l测定液,注人液相色谱仪测定,取试样的TBHQ峰面积与标 准曲线比较定量 4 结果计算 5 试样中的TBHQ含量按式(2)进行计算 c×V×1000 X = m又I000又I000 式中: X 试样中的TBHQ含量,单位为克每千克(g/kg); -由标准曲线上查出的试样测定液中相当于TBHQ的浓度,单位为微克每毫升(ug/mL); -试样提取液的体积,单位为毫升(ml) 试样的质量,单位为克(g). n 计算结果保留两位有效数字 4.6精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的10% 色谱图 4.7 V(×100) 10.0s 7.5 5.o 2.5 0.0 min 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 BHT; BHA; TBHQ. 图1气相色谱图
GB/T21512?2008 mAU4 e 60 s 0 40" 30 0 105 TBHHQ; -BHA: 3 -BHHT ?2???