GB/T28089-2011
葱类黑粉病菌检疫鉴定方法
DetectionandidentificationofUrocystiscepulaeFrost
- 中国标准分类号（CCS）B16
- 国际标准分类号（ICS）65.020.01
- 实施日期2012-06-01
- 文件格式PDF
- 文本页数10页
- 文件大小434.89KB
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葱类黑粉病菌检疫鉴定方法
国家标准 GB/T28089一2011 葱类黑粉病菌检疫鉴定方法 Deteetion.andidemtifeationofUroeystiscepulaeFrst 2011-12-30发布 2012-06-01实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T28089一2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口
本标淮起草单位山东出人境检验检疫局、北京出人境检验检疫 局、湖北出人境检验检疫局
本标准主要起草人:邵秀玲、赵汗青、王英超、种巅、吴兴海、张治宇、江丽辉、高文娜、张京萱、宋涛、 罗志萍
GB/T28089一2011 葱类黑粉病菌检疫鉴定方法 范围 本标准规定了葱类黑粉病菌检疫鉴定方法
本标准适用于洋葱等葱属中葱类黑粉病菌的检疫和鉴定
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 sN/T1157进出境植物苗木检疫规程 sN/T1809进出口植物种子检疫规程 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3.1 balls 抱子球spore 由一至多数冬抱子集结而成,易分开成单独的冬袍子或坚固而不易分离,外层有浅色的较小的不孕 细胞包围
葱类黑粉病菌基本信息 中文名;葱类黑粉病菌
学名;UrocysiscepulaeFrost1877 异名:Tabureiniacepulae e.Frost)Liro1922,Tabureinia 1(Pass.)Liro 1922,Ue,ywtis m4gica" 1877.,Urw,ywis magicaPass.1875
colehicivar.cepulaeCooke 病害英文名:onionsmut
属真菌界Fungi,担子菌亚门Basidiomycotina,黑粉菌纲Ustilaginomycetes,条黑粉菌目Uroeys tales,条黑粉菌科Uroe ,条黑粉菌属Urocystis
ystaceae 葱类黑粉病菌的其他信息参见附录A
方法原理 经现场查验,实验室分离培养,根据病原菌的形态特征、生物学特性,结合寄主范围进行结果判定
仪器和用具 生物显微镜(具油镜镜头,具测量功能,具透射光源的体视显微镜(放大倍数不低于50×)
GB/r28089g一2011 超净工作台
6 2 6 3 电子天平 6.4光照恒温培养箱
6.5酒精灯
6.
高压灭菌粉 6.7培养m 6.8医用手术勇、,镀子 6 .5 烧杯(500mL). 6. .10试管(直径12 mm nm 6 载玻片、盖玻片
6. .12量筒(500mL. 1 6. 微量可调加样器(5l一20AL). .14 刻度离心管:10mL或20mL 5 加样器枪头(2l20AlL). 1B 三角瓶(250mL 6G T 6 席尔氏浮载剂(见G;B/T18085) 6d .18干热灭菌器
6.19往复式振荡器 6.20涡旋振荡器
主要试剂 7.1蒸憎水 7.2吐温-20. 7.31%的次氯酸钠溶液 7.4洋葱琼脂培养基
现场检测 抽样方法 棋盘式、五点式或随机抽样
抽样数量 8.2.1种子 对来自葱类黑粉病菌发生国家和地区(参见附录A)的洋葱等种子按sN/T1809进行抽样
8.2.2洋葱、大蒜等鳞茎 对洋葱,大蒜等鳞茎按sN/T1157进行抽样
症状检查 对洋葱、大蒜等鳞茎,注意检查鳞茎上是否有典型的黑粉症状,挑选个头小(袍子在鳞茎上产生可能 引起鳞茎变小)、干腐的鳞茎,洋葱鳞茎常形成铅色到黑色的条斑;洋葱叶片上形成铅色到黑色的轻微变
GB/T28089一2011 厚的条斑或水泡,当增厚区域较大时可引起子叶向下弯曲
随着叶片基部病斑的扩大,病斑破裂漏出大 量的黑色粉末
受侵染的植株通常变得矮小
收集上述可疑植物材料等一并带回实验室检验
实验室检测 9.1鳞茎和寄主残体上病菌的鉴定 选取具有黑粉症状的可疑病斑,用针刺破囊肿,用席尔氏浮载剂制成玻片,在显微镜下观察抱子球 的形态特征
9.2种子上病菌的鉴定 9.2.1制备平均样品 在实验室内将送检样品充分混匀,制成平均样品
9.2.2称样 从平均样品中称取50g作为实验样品
g.2.3洗涤离心 实验样品倒人经干热灭菌(165C,1.5h)后的250ml三角瓶内,加燕僧水100ml,再加表面活性 剂吐温-20(1滴一2滴),用铝铂纸或paraflm膜将三角瓶封口
将三角瓶放在复式振荡器上振荡 立即取下三角瓶将悬浮液注人干热灭菌的10ml一20mL
刻度离心管内离心(100r/min) 5min， 3min
取出离心管,倾去上清液,再加剩余悬浮液,重复离心,直至所有悬浮液离心完毕,留沉淀物
制片与镜检 离心管中,加人适量席尔民浮载剂使之悬浮
用可调微量加样器吸取5L20L冬袍子悬浮液 至载玻片上,加盖玻片
制片用冬袍子悬浮液的体积以加盖玻片后悬浮液不外溢为宜
每份试验样品 的冬袍子悬浮液至少镜检5张玻片,每片按视野依次全部检查
观察冬袍子特点,注意观察冬抱子壁的 厚薄,颜色等特征
9.2.5袍子球的萌发试验 在离心管中加人适量1%的次氧酸钠溶液,将9.2.3所获得的沉淀物涂于载玻片上,在体视显微镜 下挑取一定数量的冬袍子球放人,用涡旋振荡器混合,消毒5min后,以3000r/min离心1min,立即用 微量加样器吸去上清液,加无菌水离心清洗2次,将冬抱子球沉淀物转至洋葱琼脂培养基(参见附录B) 上培养,条件为13C一22C,12h间隙光照、75%的空气湿度,重复3个培养皿
鉴定特征 1 10.1寄主植物症状 洋葱、大蒜等鳞茎表面有铅色泡状囊肿,囊肿刺破后有典型的黑粉症状,鳞茎个头小、干腐,发病较 轻的洋葱鳞茎常形成铅色到黑色的瘤肿条斑
洋葱叶片上形成铅色到黑色的有轻微变厚的条斑或水 泡,当增厚区域较大时可引起子叶向下弯曲
随着叶片基部病斑的扩大,病斑破裂漏出大量的黑色粉 末
重病植株通常变得矮小,易死亡
GB/r28089g一2011 10.2抱子球特征 冬袍子生在寄主体内,成熟时破裂组织后露出粉状袍子团,黑褐色的粉末状是袍子球
抱子球由一 个冬袍子组成;甚少2个,泡子球球形或精圆形,直径1iwm一25wm,黑褐色.每个单抱的冬袍子周围m -层直径4pm一8pm的细长的不育细胞包围(参见附录C)
冬袍子球形或广椭圆形,直径10pm~ 16Am,赤褐色,壁光滑
不育细胞无色至淡黄色,半透明的球形,12个~15个,形状和大小一致 10.3抱子球萌发生理特性 抱子球在祥葱琼脂培养基上培养2d3d后进行观察(参见附录c),冬抱子伸出短而半圆形,无色 n就停止生长,萌发过程中不产生担袍子但先菌丝能发生分支,分 的先菌丝,先菌丝长到40m一50m 支菌丝长到154m左右就停止生长,分支菌丝不发生融合而产生分隔的菌丝,菌丝上直接形成袍子球 将萌发后的菌丝转接到洋葱琼脂斜面上保存
10.4葱类黑粉病菌与其他近似种的主要区别 葱类黑粉病菌与其他近似种Uyeysisclhiaei的主要区别参见附录D 结果判定 11 如寄主植物上具有10.1的症状特征,且黑色分离物具有10.2抱子球特征,鉴定为葱类黑粉病菌
从种子分离袍子球的特征与10.2,10.3的鉴定特征相吻合,鉴定为葱类黑粉病菌
菌种的保存 12 将鉴定为葱类黑粉病菌的冬袍子真空保存,经登记和经手人签字后置于4C左右冰箱中保存,至少 需保存6个月,以备复检,谈判和仲裁
保存期满后,需经灭菌处理
GB/T28089一2011 附 录A 资料性附录 葱类黑粉病菌相关资料 A.1分布 非洲;埃及、摩洛哥、,加蓬
亚洲:伊拉克、日本、朝鲜、菲律宾、泰国、印度、伊朗、尼泊尔、
欧洲:奥地利比利时、英国、保加利亚、捷克、丹麦、法国、德国、希腊、意大利、马耳他、荷兰、挪威、波 兰,罗马尼亚,瑞典,瑞士,匈牙利,芬兰
大洋洲:澳大利亚、新西兰
美洲;加拿大、墨西哥、美国、古巴,波多黎各、智利,秘鲁
A.2寄主范围 葱属,包括洋葱(Aliuncea、大蒜Aliuporrwm),韭葱(Aiu 、鸦蒜Alium unsatiun le)等,野生寄主金鱼草属(Antirrhinum). 71eal A.3传播方式 该病菌以菌丝和冬袍子的形式在土壤中生存
冬袍子在土壤中存活时间长20年以上),可通过黏 附在根部表面的土壤、鳞茎的茎基部或鳞茎表面携带的土壤或其他携带土壤的方式作长距离传播,也能 够通过侵染的鳞球茎和植物残体,带菌的运输工具和农具传播
短距离主要靠表面的灌溉水,风吹土 壤.以及人类、野生动物相鸟类的方式传播，冬他子能够在洋葱种子中发现,但目前还不能确定该梢青 是否能够通过种子传播
GB/r28089g?2011 B ? ?? ?? B.1??? 500g,?500ml30min?,?? B.2??? ??15g?20g,100m??,?1000mL?? 121C?30min,?40C,,?,???? 档
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GB/T28089一2011 附 录 资料性附录 葱类黑粉病菌与近似种的主要区别 表D.1葱类黑粉病菌与近似种的主要区别 病害 Urocystiscepulae Urocystiscolchici 寄主 Aliu 、Bulbocodium Aliuspp (Clehicwspp iumspp Camassiaauaash.Camassiasclloides 1tI1T 7nithogalmm 1OOCe commulalum、Po/lygo at40cloratMm 袍子球 由一个冬抱子和12个15个不育细胞组 由2个一4个冬抱子和6个或9个不育细胞 成,抱子球直径14am~25am
冬抱子直径组成,抱子球直径17am一40am
冬袍子直径 n一16m;不育细胞形状和大小一致 12m一24pm;不育细胞形状和大小不一致 0am-
葱类黑粉病菌检疫鉴定方法GB/T28089-2011
葱类黑粉病菌检疫鉴定方法GB/T28089-2011
概述
葱类黑粉病菌是引起葱类黑粉病的主要病原菌，对葱类生产造成了很大的危害。为了控制和防范葱类黑粉病的发生与传播，制订了该标准。
标准内容
该标准规定了葱类黑粉病菌的检验方法，包括标本采集、检疫鉴定等内容。
检验方法
1. 标本采集：按照规定的采样时间、地点和方式采集葱类植株，样本数量应符合要求。
2. 标本处理：将采集到的样本进行分离、清洗和消毒处理。
3. 检疫鉴定：将处理后的标本接种到适宜的培养基上，在恰当条件下进行培养，并通过形态学特征、生理生化特性等鉴定方法来识别病原菌。
结论
葱类黑粉病菌的检疫鉴定是防控黑粉病传播的重要手段。该标准为葱类黑粉病的检测提供了科学依据，有利于加强葱类对病害的防治工作。
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