国家标准 GB/T40265一2021 酶免疫检测抗体检测通则 Generalrulesfordeterminationofenzymeimmun0assayantibodies 2021-05-21发布 2021-12-01实施国家市场监督管理总局发布国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40265一2021 前言本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口本文件起草单位:计量大学、北京工商大学、测试技术研究院生物研究所,华南农业大学本文件主要起草人:叶子弘、夏文强、马爱进、张雅芬、冯德建、雷洪涛、崔海峰、吴微、马丽侠
GB/40265一2021 酶免疫检测抗体检测通则范围本文件规定了酶免疫检测抗体检测的一般要求、检测过程和结果表述本文件适用于酶免疫检测用抗体的检测控制本文件不适用于具有标记物的酶免疫检测用抗体的检测控制规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T25915.1洁净室及相关受控环境第1部分;空气洁净度等级术语和定义下列术语和定义适用于本文件 3.1 抗体antibody 免疫球蛋白inmmunoglobulin 机体免疫系统在抗原刺激下,由B细胞增殖分化为浆细胞后产生的一类能与相应抗原特异性结合并介导产生体液免疫效应的球蛋白 3.2 抗原antigen 可以诱导生物体产生抗体的物质,能够被相应抗体识别并与之结合 3.3 种属来源host 用于免疫制备抗体的动物物种或抗体恒定区的氨基酸序列与待分析抗体最相近的动物物种 3,4 抗体类型amtbolyisoype 根据抗体的结构和免疫原性不同,对抗体的分类注:抗体重链可分为!、Y、a、、五类抗体轻链可分为K和入两类抗体重链的种类决定了抗体类型,哺乳动物体内的抗体包括lgM.,Jlg(G,gA.lgD和lgE五种类型,分别对应抗体重链从、y.a.a,e 3.5 效价titer 某种抗体识别特异性抗原所需的最低浓度注抗体效价通常使用检测结果呈阳性时抗体的最高稀释度表示
GB/T40265一2021 3.6 纯度purity 样品中目标抗体含量占总蛋白含量的百分率 3.7 亲和力afimity 抗体与抗原间的结合强度的综合评价指标注:包括单克隆抗体亲和力与多克隆抗体亲和力通常用解离常数K表示 K，数值越低表示抗体亲和力越好 3.8 交叉反应 reaction Cr`0SS 抗体与目标分析物的结构类似物也能产生反应的现象缩略语下列缩略语适用于本文件 DMsO;二甲基亚碱(Dimethylsulfoxidey HIRP,辣根过氧化物酶(Horseradishperoxidase) IgA;免疫球蛋白A(ImmunoglobulinA) D) HD免疫球蛋白Dlmmuoeglobwim gE:免疫球蛋白E(ImmunoglobulinE) lg(G免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG gM免疫球蛋白MImmunoglobulinM IgY:免疫球蛋白Y(ImmmunoglobulinY) TMB.3.'.5.-四甲基联苯胶(a.'.5.'Tramehtylhemadins 5 一般要求 5.1检测样品 5.1.1检测样品宜具备说明书或同功能资料 5.1.2应在洁净环境下,使用洁净、干燥器具取样样品应具有代表性蛋白抗原、抗体等不稳定的样品,宜在低于8C的低温下尽快完成取样,并于低温保存待用 5.2实验室 5.2.1生物安全部分应符合GB19489中的相应要求洁净区的悬浮粒子浓度应符合GB/T35915.I规定的1so6级的要求 5.2.2 5.2.3在处理废弃样品,试剂和容器之前,应保证试验操作人员和周围环境的安全为了降低污染物的毒性,防止有毒物质的泄漏,应根据废弃物的性质,对其进行无害化处理 5.3试剂材料 5.3.1除非另有说明.在检测中使用的试剂均为生化试剂或更高级别试剂,水为GB/6682规定的一级水
GB/T40265一2021 5.3.2使用的玻璃器具应为一级硬玻璃或经过钝化处理 5.3.3使用的合成树脂器具应为聚丙烯或其他低吸附材料制作,不添加染料、填充物 5.3.4使用的酶标板底部应具有亲水表面 5.4检测指标 5.4.1酶免疫检测用单克隆抗体的检测指标应包括种属来源、抗体类型、纯度、浓度、效价、亲和力、交叉反应 5.4.2酶免疫检测用多克隆抗体的检测指标应包括种属来源、浓度、效价,亲和力,交叉反应检测过程 6 6.1 抗体种属来源宜使用间接酶联免疫吸附法,免疫扩散法、蛋白质免疫印迹法、化学发光免疫测定法或蛋白质质量肽谱法等方法检测抗体的种属来源若使用间接酶联免疫吸附法见附录A 6.2抗体类型宜使用间接酶联免疫吸附法、免疫扩散法,蛋白质免疫印迹法、化学发光免疫测定法或蛋白质质量肽谱法等方法检测抗体类型若使用间接酶联免疫吸附法见附录A 6.3抗体纯度宜使用液相色谱法,聚丙烯酰胺凝胶电泳法或毛细管电泳法等方法检测抗体的纯度若使用高效液相色谱法见附录B 6.4抗体浓度宜使用比色法、紫外分光光度法、液相色谱法,酶联免疫吸附法,蛋白质免疫印迹法或化学发光免疫测定法等方法检测抗体的浓度若使用高效液相色谱法见附录c 6.5抗体效价宜使用间接酶联免疫吸附法或试管凝集试验等方法检测抗体的效价若使用间接酶联免疫吸附法见附录D. 6.6抗体亲和力宜使用竞争酶联免疫吸附法、表面等离子体共振法,生物膜层干涉法或等温滴定量热法等方法检测抗体与目标分析物的亲和力若使用竟争酶联免疫吸附法见附录E 抗体交叉反应宜使用竟争酶联免疫吸附法、表面等离子体共振法,生物膜层干涉法或等温滴定量热法等方法检测抗体与目标分析物结构类似物的交叉反应若使用竟争酶联免疫吸附法见附录F
GB/T40265一2021 结果表述 7.1检测结果应包含样品的检测项目,试验样品信息,抽样信息及检测结论单克隆抗体的检测结论应包括种属来源,抗体类型、纯度、浓度、效价,亲和力交叉反应,并注明采 7.2 用的检测方法 7.3多克隆抗体的检测结论应包括种属来源、浓度、效价、亲和力,交叉反应,并注明采用的检测方法
GB/T40265一2021 附录 A 资料性抗体种属来源和抗体类型检测间接酶联免疫吸附法 A.1原理该方法使用可以识别不同种属来源和抗体类型的特异性抗体检测待测抗体的种类根据待检测抗体的种属来源和抗体类型选择合适的HRP标记的特异性抗体若干,用于鉴定的抗体宜至少包括;抗小鼠lgG抗体、抗小鼠lgM抗体、抗兔lgG抗体、抗大鼠IgG抗体、抗山羊lgG抗体、抗仓鼠lgG抗体、抗绵羊Ig(G抗体、抗鸡lgY抗体抗原包被浓度可根据实际情况适当修改在试验前,将除抗体、抗原母液以外的所有试剂恢复到室温抗体、抗原母液融化后立即置于冰上试剂应轻轻旋转或振荡混匀取出酶标板并拆除多余的酶标板条块后待用 A.2试剂与材料 A.2.1磷酸盐缓冲液(pH=7.27.4):在800ml水中加人1.15g磷酸氢二钠,0.20g磷酸二氢钾 0.20g氧化钾,8.00【氯化钠,溶解后,加水定容至1000ml A2.2碳酸盐缓冲液(pH=9.6)在800mL水中加人1.59g碳酸钠(无水).,2.93【碳酸氢钠,溶解后加水定容至1000mL A.2.3封闭缓冲液;部分抗体可能与封闭液中的成分结合,影响检测结果可根据实际情况选择以下封闭液配方: 配方1称取6.00g牛血清白蛋白,加磷酸盐缓冲液(pH- -7.27.4)定容至200mL,4C保存配方2;在160mL水中加人2.00些酪蛋白.l.10g氢氧化钠,37C磁力搅拌至完全溶解然后加人0.23g磷酸氢二钠、0.04g磷酸二氢钾、0.04g氧化钾,用盐酸调节pH值至7.27.4 加水定容至200ml.4C保存洗涤缓冲液.在1000mL磷酸盐缓冲液(pH- A.2.4 =7.27.4)中加人0.5ml吐温一20 A.2.5抗体稀释液;在100mL封闭缓冲液中加人0.05mL.吐温一20,4C保存 A.2.6TMB显色工作液:根据以下配方,按照1:1比例混合TMB显色液A与TMB显色液B即成现配现用 TMB储存液;在80mlMSO中加人1.00gTMB,溶解后,加DMsO定容至100ml,一20C避光保存 TMB显色液A;在400ml水中加人0.20g乙二胺四乙酸二钠,0.95只柠檬酸,50ml甘油 20mLTMB储存液,溶解后,加水定容至500mL.4C避光保存 TMB显色液B;在400ml水中加人13.60只三水合乙酸钠,1.60只柠檬酸,0.3nmL过氧化氢 (30%).溶解后.加水定容至500mL.4C避光保存 A.2.7反应终止液;在800ml水中加人83.33mL.浓盐酸,加水定容至1000mL A.2.8HRP标记的特异性抗体 A.2.9酶标板(宜使用表面亲水的高吸附酶标板) A.3操作步骤 A.3.1包被;将抗原稀释至合适的浓度，一般为104g/mL~20"g/mL,稀释液为碳酸盐缓冲液(pH= 9.6) 酶标板每孔加人100AL稀释后的抗原,用合适的塑料制品覆盖酶标板并在4C下孵育过夜 A.3.2清洗;弃去酶标板中的液体,在吸水纸上轻轻拍干然后每孔加人200L洗涤缓冲液,室温静
GB/T40265一202 置3min后弃去酶标板中的液体,并在吸水纸上轻轻拍干,重复3次一5次或使用微孔板自动洗板机进行清洗,每次使用300AL洗涤缓冲液,重复5次 A.3.3封闭:每孔加人200AL封闭缓冲液,在37C恒温培养箱中孵育901 min A.3.4清洗;重复步骤A.3.2. A.3.5待测抗体孵育;将待测抗体按1;1000比例稀释,稀释液为抗体稀释液每孔加人100Al稀释后的待测抗体样品在37C恒温培养箱中孵育60min A.3.6清洗:重复步骤A.3.2. A.3.7 特异性抗体孵育:根据说明书稀释各种HRP标记的识别不同种属来源和抗体类型的抗体,稀释液为抗体稀释液每孔加人100Al稀释后的抗体,每种二抗重复3次每次试验设置空白对照,空白对照为不含有抗体的抗体稀释液,重复3次在37笔恒温培养箱中孵育60 min A.3.8清洗;重复步骤A.3.2 A.3.9显色:每孔加人100pLTMB显色工作液在37C恒温培养箱中避光孵育30min 反应结束后每孔立即加人100AL反应终止液 A.3.10测量;反应终止后30min内,在酶标仪上测量并记录样品和空白对照的吸光度检测波长为 450nm，参比波长为620 nm A.4结果分析 A.4.1试验成立判定:当空白对照的吸光度小于或等于0.2,且最大测量结果的吸光度大于或等于0.8时试验成立反之,应重做试验 A.4.2结果分析按照式(A.1)计算针对不同种属来源和抗体类型的抗体的相对显色强度 ODx一ODc A.1 Sx= OD OD 式中针对某种种属来源和抗体类型的特异性抗体的相对显色强度; Sx -针对某种种属来源和抗体类型的特异性抗体的吸光度测量值; OD 阴性对照的吸光度测量值; ODc 所有渊量结果中的最大吸光陛 OD 当仅有一种特异性抗体的相对显色强度为l,且其他的相对显色强度均小于或等于0.4时,可以判定待测抗体的种属来源和抗体类型为相对显色强度为1的特异性抗体所识别的种属来源和抗体类型否则.无法判断待测抗体的种属来源和抗体类型,如有需要,可通过抗体氨基酸测序和序列分析对抗体的种属来源和抗体类型进行判断
GB/40265一2021 录附 B 资料性抗体纯度检测高效液相色谱法 B.1原理使用高效液相色谱法检测单克隆抗体的纯度时,可通过体积排阻或离子交换等不同原理对样品中的不同组分进行分离 B.2检测方法 B.2.1待测样品;使用流动相A适当稀释待测抗体 B.2.2液相色谱参考条件: 色谱柱.体积排阻色谱柱.300mmx4mm(内径).填料粒径5pm,孔径300A或性能相当者; aa 柱温:25C; b c 流动相A:300mmol/儿氯化钠,50mmol/儿磷酸钠盐,pH=6.8的水溶液 d 流速:0.2 m/min; 进样量;50L e fD 洗脱程序:100%流动相A等度洗脱 B.2.3紫外分光检测参考条件: 检测波长:2801 a nm b 检测频率:l0Hz B.3结果分析分析目标抗体峰及其他峰的峰面积,通过面积归一化法计算抗体的纯度
GB/T40265一2021 附录 C 资料性) 抗体浓度检测高效液相色谱法 C.1原理利用蛋白A(ProteinA,蛋白G(ProteinG)等蛋白可以特异性识别并结合抗体Fc区域的特点,通过亲和层析检测样品中抗体的浓度 c.2检测方法 C.2.1待测样品;使用流动相A适当稀释待测抗体 c.2.2标准样品;使用流动相A将免疫球蛋白标准物质逐级稀释,得到抗体质量浓度为20mg/1 mg/L100mg/L,200mg/L,500mg/L、1000mg/L的系列标准工作液,质量浓度由低到高进行检 0 测,以峰面积对质量浓度作图,做出标准曲线回归方程 C.2.3液相色谱参考条件色谱柱:蛋白A(Pr A)亲和层析色谱柱,35mm×4mm(内径),填料粒径12m或性能 a rotein 相当者; b 柱温:25C; 流动相A:150mmol/L氯化钠,50mmol/L磷酸钠盐,pH=7.5的水溶液; c d 流动相B:150mmol/L氯化钠,50 mmol/儿磷酸钠盐,pH=2.5的水溶液; 流速:1.0mL/min e fD 进样量;504L; 梯度洗脱程序见表C.1 g 表C.1梯度洗脱程序(亲和层析时间流动相流动相 % min 3.0 100 0.0 100 0.8 100 l.0 100 100 3,0 C.2.4紫外分光检测参考条件检测波长:280nm; a 检测频率;l0Hz b c.3结果分析使用外标法计算测试液及待测样品中抗体的浓度样品溶液中抗体的响应值应在标准曲线的线性范围内,若超过线性范围则应稀释后再进行检测
GB/40265一2021 附录 D 资料性) 抗体效价检测间接酶联免疫吸附法 D.1原理使用间接酶联免疫吸附法检测抗体效价抗体梯度稀释的比例宜为1:2,抗体最终稀释度可根据实际情况进行调整抗原包被浓度可根据实际情况适当修改在试验前,将除抗体、抗原母液以外的所有试剂恢复到室温抗体、抗原母液融化后立即置于冰上试剂应轻轻旋转或振荡混匀取出酶标板并拆除多余的酶标板条块后待用 D.2试剂与材料所需试剂与材料见A.2 D.3操作步骤 D,3.1包被;将抗原稀释至合适的浓度，一般为10从g/ml一204g/ 山" ,稀释液为碳酸盐缓冲液(pH- 9.6) 酶标板每孔加人100L稀释后的抗原,用合适的塑料制品覆盖酶标板并在4C下孵育过夜 D.3.2清洗;弃去酶标板中的液体,在吸水纸上轻轻拍干然后每孔加人200L.洗涤缓冲液,室温静置3min后弃去酶标板中的液体,并在吸水纸上轻轻拍干,重复3次一5次或使用微孔板自动洗板机进行清洗,每次使用300AL洗涤缓冲液,重复5次 D.3.3封闭:每孔加人200AL封闭缓冲液,在37C恒温培养箱中孵育90min. D.3.4清洗;重复步骤D.3.2 D.3.5 -抗孵育:准备一系列倍比稀释的待测抗体,初始的稀释浓度一般为1:1000,稀释液为抗体稀释液每孔加人100L稀释后的待测抗体样品,每个浓度重复3次每次试验设置空白对照,空白对照为不含有抗体的抗体稀释液,重复6次在37C恒温培养箱中孵育60 min D.3.6清洗:重复步骤D.3.2 D.3.7二抗孵育:根据二抗说明书稀释HRP标记的二抗,稀释液为抗体稀释液每孔加人100AL稀释后的二抗在37C恒温培养箱中孵育60 min D.3.8清洗重复步骤D.3.2 D.3.9显色:每孔加人100ALTMB显色工作液在37C恒温培养箱中避光孵育30min 反应结束后每孔立即加人100AL反应终止液测量.反应终止后30min内在酶标仪上测量并记录各个孔的吸光度检测波长为450nm,多 D.3.10 比波长为620nm D.4结果分析试验成立判定当空白对照的吸光度小于或等于02时试验成立反之,应重做试验 D.4.1 D.4.2试验结果分析;当空白对照的吸光度小于或等于0.05时,按照0.05进行效价分析;当空白对照的吸光度大于0.05,并且小于或等于0.2时,按照实际测量结果进行效价分析 D.4.3当样品的吸光度大于或等于空白对照的吸光度的2倍时认定为阳性结果为阳性的待测抗体的最高稀释度为待测抗体的效价
GB/T40265一2021 附录 E 资料性) 抗体亲和力检测竟争酶联免疫吸附法 E.1 原理使用竞争酶联免疫吸附法检测抗体亲和力时,首先让溶液中的抗原与溶液中的抗体充分结合并达到解离平衡,然后将溶液转移至底部包被有相同抗原的酶标板中酶标板底部的抗原与溶液中游离的抗体结合,从而分析溶液中游离抗体的含量,计算抗体与抗原间的解离常数分析过程中,酶标板底部抗原与溶液中游离抗体的结合将影响溶液中原有的抗原-抗体解离平衡，干扰检测结果因此酶标板上包被的抗原量应尽可能低,但同时不影响观测竞争酶联免疫吸附法检测抗体亲和力通常分为两步,第一步明确酶标板上包被抗原的合适的量,第二步对亲和力进行分析 E.2 试剂与材料所需试剂与材料见A.2 E.3操作步骤 E.3.1选择合适的抗原包被浓度及抗体稀释倍数 E.3.1.1包被;将抗原稀释至14g/mL,稀释液为碳酸盐缓冲液(pH=9.6) 酶标板每孔加100AL稀释后的抗原,用合适的塑料制品覆盖酶标板并在4下孵育过夜 E.3.1.2清洗:弃去酶标板中的液体,在吸水纸上轻轻拍干然后每孔加人200AL洗涤缓冲液,室温静置3min后弃去酶标板中的液体,并在吸水纸上轻轻拍干,重复3次5次或使用微孔板自动洗板机进行清洗,每次使用300l洗涤缓冲液,重复5次 7C但温培养箱中孵育90n mmin B.3.1.3封闭;每孔加人200Al封闭级冲液,在37 E.3.1.4清洗:重复步骤E.3.1.2 清洗结束后将部分酶标板条块拆下并安装在第2个架子上,每孔加人200L洗涤缓冲液后,C储存备用其余的酶标板条块用于E.3.1.5 E.3.1.5第1块酶标板加样:准备一系列倍比稀释的待测抗体,稀释液为磷酸盐缓冲液(pH=7.2 7.4),初始的稀释度一般为1:1000 每孔加人100AL稀释后的待测抗体样品,每个浓度重复3次每次试验设置空白对照,空白对照为不含有抗体的磷酸盐缓冲液(pH=7.27.4),重复3次在37C 恒温培养箱中孵育30min 第2块酶标板加样,将第1块酶标板中的液体小心吸出,每个浓度的3次重复混合为1管(《略 E.3.1.6 少于300L) 取出E.3.1.4中备用的酶标板条块,将从第1块酶标板吸出的液体加人第2块酶标板中,每孔加人100L样品,每个浓度重复2次在37C恒温培养箱中孵育30nmin. E.3.1.7第1块酶标板清洗:按照E.3.1.2清洗第1块酶标板 E.3.1.8第1块酶标板二抗孵育;根据说明书稀释HRP标记的相应二抗,稀释液为抗体稀释液每孔加人100Al稀释后的二抗在37C恒温培养箱中孵育60" mln E.3.1.9酶标板清洗;按照E.3.1.2清洗第1,2块酶标板 E.3.1.10第2块酶标板二抗孵育;根据说明书稀释HRP标记的相应二抗,稀释液为抗体稀释液每孔加人100L稀释后的二抗在37C恒温培养箱中孵育60min. 10
GB/T40265一2021 E.3.1.11第1块酶标板显色与测量:每孔加人100LTMB显色工作液在37恒温培养箱中避光孵育30min 反应结束后立即每孔加人100AL反应终止液反应结束后30min内,在酶标仪上测量并记录样品和空白对照的吸光度检测波长为450nm,参比波长为620nm E.3.1.12第2块酶标板清洗;按照E.3.1.2清洗第2块酶标板 E.3.1.13第2块酶标板显色与测量;同E3.1.11 E.3.1.14浓度评价:取两块酶标板中处于线性范围内的测量结果,通过线性回归分析抗体稀释度与显色强度的关系如果两块酶标板的线性回归的斜率相差10%以内,说明该包被浓度和试验条件适合进行抗体亲和力检测.处于线性范围内的抗体最高浓度适合用于抗体亲和力检测如果第2块酶标板的显色强度大幅度降低,说明抗原包被浓度过高,应将抗原包被浓腹降低至1/5 1/10后重新进行以上试验,直至获得合适的包被浓度 E.3.2亲和力检测 E.3.2.1抗原包被;将抗原稀释至E.3.1中判断合适的浓度,稀释液为碳酸盐缓冲液(pH=9.6) 每孔加人100L稀释后的抗原,用合适的塑料制品覆盖酶标板并在4C下孵育过夜 E.3.2.2清洗;弃去酶标板中的液体,在吸水纸上轻轻拍干然后每孔加人2004L洗涤缓冲液,室温静置3min后弃去酶标板中的液体,并在吸水纸上轻轻拍干,重复3次5次或使用微孔板自动洗板机进行清洗,每次使用300L洗涤缓冲液,重复5次 E.3.2.3封闭:每孔加人200"l封闭缓冲液,在37C恒温培养箱中孵育90min E.3.2.4清洗:重复步骤E.3.2.2,4保存备用 E.3.2.5样品准备;将待测抗体样品稀释至E.3.1中判断处于线性范围的最高抗体浓度的2倍,稀释液为磷酸盐缓冲液(pl 6 三7.2 7.4) 准备一系列倍比稀释的抗原,稀释液为磷酸盐缓冲液(pH=7.2~ 7.4),抗原的初始浓度一般为14nmol/L E.3.2.6抗原-抗体结合;分别将200L稀释后的待测抗体样品与200Al不同浓度的抗原在新的离心管中混合每次试验设置空白对照,空白对照为在200L稀释后的待测抗体样品与200L磷酸盐级冲液(pH=7.2~7.4)的混合液 37恒温培养箱中孵育901 mln E.3.2.7 加样;将E.3.2.6中反应结束的混合液转移至E.3.2.4保存的酶标板中,每孔1004AL,重复 3次在37C恒温培养箱中孵育30 min E.3.2.8清洗;重复步骤E.3.2.2 二抗孵育;根据二抗说明书稀释HIRP标记的相应二抗,稀释液为抗体稀释液每孔加人100l E.3.2.9 稀释后的二抗在37C恒温培养箱中孵育60min E.3.2.10清洗;重复步骤E.3.2.2 E.3.2.11显色:每孔加人100LTMB显色工作液在37C恒温培养箱中避光孵育30n 反应结 min 束后每孔立即加人100L反应终止液 .3.2.12测量:反应终止后30min内,在酶标仪上测量并记录样品和空白对照的吸光度检测波长为 50, nm,参比波长为620nm. E.4结果分析 E.4.1试验成立判定;当最高抗原浓度的样品的吸光度小于或等于0.2,空白对照的吸光度处于显色反应的线性范围内且两者的差值大于或等于0.5时,试验成立反之应重做试验使用软件对吸光度与抗原浓度进行曲线拟合,并按照式(E.1)计算抗体的亲和力常数 E.4.2 O K，=f( E.1 1
GB/T40265一2021 式中 K 抗体亲和常数,单位为摩尔每升(mol/1L); 吸光度与抗原浓度的关系函数 f(r 空白对照对应的吸光度; ODnk 最高抗原浓度对应的吸光度 ODm 12
GB/T40265一2021 附录 F 资料性抗体交叉反应检测竟争酶联免疫吸附法 F.1原理交叉反应是指抗体对目标分析物的结构类似物也能发生反应的现象可使用竞争酶联免疫吸附法或其他方法分别分析抗体与目标分析物,抗体与目标分析物结构类似物之间的亲和力,然后计算抗体与目标分析物结构类似物之间的交叉反应率 F.2试剂与材料所需试剂与材料见A.2 F.3操作步骤竞争酶联免疫吸附法检测抗体与目标分析物结构类似物之间的亲和力检测的操作步骤见E.3. F.4结果分析抗体与目标分析物、抗体与目标分析物结构类似物间的亲和力计算见E.4 根据式(F1)计算抗体与目标分析物的结构类似物的交叉反应率 K CR一 ×100% (F.1 式中 CR -抗体与目标分析物的结构类似物的交叉反应率; K 抗体与目标分析物的解离常数,单位为摩尔每升(mol/L); K， -抗体与目标分析物的结构类似物的解离常数,单位为摩尔每升mol/L. 13

酶免疫检测抗体检测通则GB/T40265-2021解读

随着新冠疫情的持续蔓延，抗体检测成为了疫情防控中不可或缺的一环。而在抗体检测中，酶免疫检测作为常用的检测方法之一，其准确性和稳定性备受关注。

为了规范酶免疫检测抗体检测的质量管理，GB/T40265-2021《酶免疫检测抗体检测通则》正式发布，并于2021年4月1日起实施。

一、标准概述

GB/T40265-2021适用于各类酶免疫检测抗体检测领域，包括但不限于新冠病毒抗体检测、人类免疫缺陷病毒抗体检测、肝炎病毒抗体检测等。

该标准涵盖了酶免疫检测抗体检测的各个环节，包括检测方法、样本采集和处理、试剂和仪器设备、检测结果及质量控制等方面。并对于每一部分给出了具体的技术要求和指导原则。

二、技术要求

为了保证酶免疫检测抗体检测的准确性和可靠性，GB/T40265-2021提出了以下技术要求：

检测方法：应选择合适的酶联免疫吸附实验(ELIAS)或荧光素酶免疫吸附实验(FIA)等酶免疫检测方法，并应根据不同检测对象进行优化。
样本采集和处理：应遵循规范的采集和处理流程，保证样本的稳定性和完整性。
试剂和仪器设备：应选择符合国家及行业标准的试剂和仪器设备，确保其质量和稳定性。
检测结果及质量控制：应根据标准要求进行结果解读和质量控制，包括阳性、阴性和无效等结果判定。

三、指导原则

除了技术要求外，GB/T40265-2021还对酶免疫检测抗体检测的各个环节给出了详细的指导原则，以帮助实施单位更好地开展检测工作。

其中，针对样本采集和处理，标准提出了具体的操作流程和注意事项；针对试剂和仪器设备，标准明确了应购买正规渠道的产品，并在使用前进行验证和维护；针对检测结果和质量控制，标准给出了相应的方案和建议。

四、总结

GB/T40265-2021《酶免疫检测抗体检测通则》的发布，为酶免疫检测抗体检测领域的质量管理提供了更为明确和规范的指导。实施该标准有助于提高抗体检测的准确性和可靠性，进一步保障公众健康安全。

专业人士应当重视该标准的实施和执行，严格按照标准要求进行酶免疫检测抗体检测工作，并加强质量控制和质量保证，以提高检测效率和精度。

在今后的抗体检测中，我们期待更多的行业标准能够得到制定和实施，为公众健康安全保驾护航。