GB/T15670.25-2017
农药登记毒理学试验方法第25部分：急性迟发性神经毒性试验
Toxicologicaltestmethodsforpesticidesregistration—Part25:Acutedelayedneurotoxicitytest
- 中国标准分类号（CCS）B17
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2018-02-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
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农药登记毒理学试验方法第25部分：急性迟发性神经毒性试验
国家标准 GB/T15670.25一2017 部分代替GB/T15670-1995 农药登记毒理学试验方法 第 25部分:急性迟发性神经毒性试验 Iosieologiealtestmethodsforpestiecidesregistration Part25:Acutedelayedneurotoxicitytest 2017-07-12发布 2018-02-01实施 中华人民共利国国家质量监督检验检疙总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.25一2017 本部分由农业部提出并归口
本部分起草单位;农业部农药检定所
本部分主要起草人:王捷、陶传江、廖雪、宋宏宇,张丽英
本部分所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T156701995
GB/T15670.25一2017 农药登记毒理学试验方法 第25部分:急性迟发性神经毒性试验 范围 GB/T15670的本部分规定了急性迟发性神经毒性试验的基本原则、方法和要求
本部分适用于为农药登记而进行的急性迟发性神经毒性试验
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GB14925实验动物环境及设施 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
急性迟发性神经毒性acutedelayedneurotoxicity -次大量接触受试物后,早期出现神经病靶酯酶(NTE)活力抑制,此后的1周~2周内,动物逐渐 出现以肢体无力和上位运动神经元痉挛性瘫痪为主要表现的神经综合症,神经病理检查表现为脊髓和 周围神经远端轴索神经病
3.2 有机磷化合物organophosphorussubstance 含碳-磷键的化合物或含有机基团的磷酸衍生物,主要包括不带电的磷酸酯、硫代有机磷酸酯、有机 磷酸肝、有机磷酸、氨基磷酸酯、硫代磷酸酯及氨基硫代磷酸酯等,它们中的有些成员能引起迟发性神经 毒性
3.3 神经病靶酯酶neuropathytargelesterase;NTE 神经毒性酯酶neurotoxicesterase 种能催化戊酸苯酯水解的膜结合蛋白
试验目的 评价和了解受试物(如有机磷化合物)引起急性迟发性神经毒性的潜在能力
试验概述 将受试物一次以尽可能大的剂量给母鸡经口染毒
为保证有足够的动物存活满足神经生化和组织 病理学检查要求,可给胆碱能作用的防护剂
观察染毒的母鸡是否有行为异常,共济运动失调及瘫痪
GB/T15670.25一2017 连续21d
在染毒后24h和48h,每组随机选取动物进行生化检查,特别是测定神经病靶酯酶(NTE)
在染毒后21d,处死剩余的其他母鸡,取神经组织进行组织病理学检查
6 试验方法 6.1受试物配制 如受试物经口染毒,需要配制成为溶液,应采用水溶液、,混悬液或油溶液
应了解溶剂的毒性,并且 所选溶剂不与受试物产生化学反应,不影响受试物的吸收
6.2实验动物 6.2.1动物选择;选用8个14个月健康初成年母鸡,无步态异常,体重1.5kg2.0kg
受试物组和 溶剂对照组每组至少12只,阳性对照组至少6只
6.2.2动物饲养条件;在常规条件下饲养母鸡,单笼饲养
鸡笼应足够大,以使动物能够自由活动,并 易于观察动物步态
试验开始前,动物应在试验环境中检疫,适应至少5d
正常饲喂,不限制饮水
实 验动物饲养环境应符合GB14925的有关规定
6.3剂量及分组 -般应设受试物染毒组、阳性对照组和溶剂对照组
受试物染毒组的剂量通过预试验来确定
预试验时,使用适当数量母鸡和剂量水平确定正式试验 剂量达到的最大值
预试验应引起一定的致死率
可以使用多种试验方法来估计受试物的最大非致死 剂量
母鸡或其他动物的毒理学信息历史数据有助于剂量选择
在正式试验中应选择尽可能高的剂量水平,允许个别动物出现死亡,但应有足够数量的动物存活用 于生化(6只)和在21d时进行组织病理学检测(6只)
可使用已知的不干扰迟发性神经毒性反应的硫 酸阿托品或其他预防性药物来保护动物免于急性胆碱能效应导致的死亡 阳性对照组应保证至少有6只母鸡(3只用于生化检验,3只用于病理解剖并做组织病理学检查)给 予迟发性神经毒性阳性物三邻甲苯磷酸酯(trir0-eresyphosphate,ToCP) 对于溶剂对照组,如溶剂毒性已知,可仅设溶剂对照组;溶剂毒性未知,还应增设空白对照组
限量试验,如果受试物染毒剂量在2000mg/kg体重,未引起可观察到的毒性作用,或根据结构相 关化合物的分析获得的数据估计不会产生毒性,则没有必要进行更高剂量的试验
当人体暴露水平较 高表明需要进行更高剂量试验时,不能采用限量试验
6.4染毒方式 通常采用经口途径一次染毒,包括灌胃、胶囊吞咽或咽峡部滴注等方法染毒,隔夜禁食
灌胃体积 可根据各组不同剂量按5mL/kg体重给予
为对抗急性胆碱能效应所致的动物死亡,给予受试物前 10min15min ,可以肌肉注射已知不干扰迟发性神经毒性反应的硫酸阿托品作保护处理,硫酸阿托品 剂量为10mg/kg体重
6.5观察期限及指标 6.5.1临床观察与检查 染毒后立即开始观察,并于染毒后每半小时观察一次,2d后每天观察一次,直至21d试验结束 将母鸡出现的全部中毒反应、时间,类型、轻重程度以及发现行为异常的时间详尽记录
将母鸡置于笼 外观察,强迫母鸡做活动以便有利于观察到最轻微的毒效应
取出濒死的母鸡处死并进行大体解剖
GB/T15670.25一2017 共济失调按以下表现进行观察记录;未见异常;腿软,站立姿势和步态稍异常;步态严重异常,行走 时不断跌倒;能勉强站立但多依蹋站立;不能站立,通过扇动翅膀移动身体
6.5.2体重记录 在染毒前,对全部母鸡称体重一次,以后每周称体重一次
6.5.3生化检查 染毒24h、48h后,从染毒组、溶剂对照组随机各取6只母鸡(每次3只)处死,阳性对照组(同时设 定的)在染毒24h后取3只母鸡处死,取脑和腰髓,测定其神经病靶酯酶(NTE)活力
观察胆碱能体征 出现的时间,评价中毒表现
如果从临床中毒体征观察中提示毒物在体内的代谢非常缓慢,那么最好从 染毒后24h与72h(最晚时间)这两个时间点各取一次,每次3只母鸡,取组织样品进行生化检查
必要时,测定这些组织样品中的乙酰胆碱酯酶(AChE)活力
在体内乙酰胆碱酯酶可以发生自发 性恢复,因而会导致低估乙酰胆碱酯酶抑制剂(受试物)的活力
6.5.4组织病理学检查 染毒后21d,将存活动物进行脑和脊随的大体解剖观察,并进行神经组织的组织病理学检查
其中 包括;延脑、脑桥、小脑及大脑皮质,脊髓颈段、胸段中部,腰骶结合部,坐骨神经、胫骨神经及其侧支
对 髓鞘和轴索作特殊染色
6.6结果统计与评价 6.6.1评价内容包括临床神经毒性表现、生化检验和组织病理学检查结果及可观察到的其他毒性效 应
对发生率、严重程度及相关性作出评价
6.6.2将受试物组与阳性对照组、溶剂对照组做比较,进行统计分析,以确认是否有迟发性神经毒 作用
6.6.3阳性对照组应出现共济失调障碍,组织病理学证实有脱髓鞘改变,溶剂对照组无上述改变
6.6.4评价要列出以下结果的表格或信息:一般毒性反应、神经毒性反应,死亡率、体重变化、生化检验 结果、组织病理学检查结果及照片
试验报告 试验报告至少应包括以下内容 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号 a b 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期和封样情况 试验开始和结束日期,试验项目负责人,试验单位技术负责人、签发日期; c d试验摘要; 受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号(CAs号)(如已知)、代码如有、纯度(或含量 剂型生产日期批号)、理化性质、配制所用溶剂和方法 实验动物种属品系、级别、数量、体重、性别来源(供应商名称、实验动物质量合格证号,实验 动物生产许可证号),检疫、适应情况,实验动物饲养环境,包括温度、相对湿度、饲料、单笼饲养 或群饲实验动物设施使用许可证号;
GB/T15670.25一2017 g剂量和组别,包括选择剂量的原则或依据、剂量和组别,动物分组方式和每组动物数 试验条件和方法,包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案试验周期、观察指标等; h 试验结果;以文字描述和表格逐项进行汇总,包括临床中毒表现、体重、各项指标的变化,大体 解剖和组织病理学改变等,指出结果的统计处理方法; 试验结论明确受试物是否具有迟发性神经毒性作用 j k原始记录保存情况的说明
农药登记毒理学试验方法第25部分：急性迟发性神经毒性试验GB/T15670.25-2017
农药登记是保障农产品质量安全的重要环节，而毒理学试验则是农药登记的必需步骤。其中，急性迟发性神经毒性试验是评价农药对人体健康影响的关键环节之一。
GB/T15670.25-2017急性迟发性神经毒性试验标准规定了试验方法、试验结果判定标准等内容，是进行农药登记毒理学试验时必须遵守的标准之一。
该标准要求，在试验过程中应充分考虑试验动物的品系、年龄、性别、数量等因素，并按照要求制备试验物质和生产试验动物。试验过程中应遵循道德规范，保证试验动物的健康和福利。
试验结果的判定标准非常严格，GB/T15670.25-2017标准对于试验后出现的不同症状、表现等都做了详细的描述，并根据不同症状、表现的出现时间、持续时间、严重程度等指标进行分级。试验结果的分级将直接影响农药的注册情况。
总之，急性迟发性神经毒性试验是评价农药安全性的重要环节，GB/T15670.25-2017是进行该项试验时必须遵守的标准，通过严格遵守标准，确保农药的安全性和质量，为国家的食品安全保障作出贡献。
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