GB/T15670.13-2017
农药登记毒理学试验方法第13部分：亚慢性毒性试验
Toxicologicaltestmethodsforpesticidesregistration—Part13:Subchronictoxicitystudy
- 中国标准分类号（CCS）B17
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2018-02-01
- 文件格式PDF
- 文本页数8页
- 文件大小678.47KB
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农药登记毒理学试验方法第13部分：亚慢性毒性试验
国家标准 GB/T15670.132017 部分代替GB/T15670一1995 农药登记毒理学试验方法 第 13部分亚慢性毒性试验 Iosicoogiealtestmethodsforpestiecidesregistrationr Part13Subehronictoxicitystudy 2017-07-12发布 2018-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.13一2017 -修改了染毒途径(见6.4,1995年版的11.6) -修改了观察指标(见6.6,1995年版的11.7)
本部分由农业部提出并归口
本部分起草单位;农业部农药检定所
本部分主要起草人;李宁张丽英、曲莞莞、陶传江 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T156701995
GB/T15670.13一2017 农药登记毒理学试验方法 第13部分亚慢性毒性试验 范围 GB/T15670的本部分规定了亚慢性毒性试验的基本原则、方法和要求
本部分适用于为农药登记而进行的亚慢性毒性试验
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB14925实验动物环境及设施 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 亚慢性毒性subchronictoxieity 实验动物在其部分生存期内每日反复接触受试物后引起的健康损害效应
3.2 未观察到有害作用剂量水平nwobseredaderseefleetlevel;NoAEL 在规定的试验条件下,用现有技术手段和检测指标,未能观察到与染毒有关的有害效应的受试物最 高剂量或浓度
3.3 观察到有害作用最低剂量水平lowestobservedadverseefrreetlevel;LoAEL 在规定的试验条件下,用现有技术手段和检测指标,观察到与染毒有关的有害效应的受试物最低剂 量或浓度
3.4 靶器官targetorganm 受试物引起机体出现显著毒性效应的器官
试验目的 通过亚慢性毒性试验,确定在较长时间内(包括断乳后生长期到生长进人成年期)反复接触受试物 引起的毒性效应,了解受试物的毒作用粑器官和可能的蓄积效应,求出受试物的未观察到有害作用剂量 水平、观察到有害作用最低剂量水平,为慢性毒性试验剂量选择和初步制定人群安全接触限量标准提供 科学依据
GB/T15670.13一2017 5 试验概述 受试物以不同剂量反复经口,经皮或经呼吸道给予实验动物,染毒90d或180d,观察动物的中毒 表现、定期称量体重和计算摄食量,并进行血液生化指标,血液学指标、组织病理学检查指标等的测定
6 试验方法 6.1受试物配制 6.1.1灌胃染毒时,根据受试物的特性选择合适的溶剂或载体,将受试物溶解或悬浮在合适的介质中
通常首选溶剂为水,不溶于水的受试物可使用食用油(如橄榄油、玉米油等),不溶于水或油的受试物可 使用羚甲基纤维素钠、淀粉等配成混悬液
将受试物掺人饲料或饮水给予时,要将受试物与水或饲料混 匀并保证该受试物配制的稳定性,应进行稳定性、含量和均一性的测定,浓度应在理论浓度的士15%以 内
受试物掺人饲料或水时,应不影响饲料营养质量和水的平衡,一般在饲料中的掺人量不超过饲料浓 度的5%
如果受试物加人饲料或水中会影响动物的适口性,则应灌胃给予受试物
6.1.2经皮和呼吸道吸人途径染毒,常以原药形式染毒或溶解在合适的介质中
6.2实验动物 啃齿类动物首选大鼠,经皮染毒动物还可选白色家兔和豚鼠,雌、雄两种性别,大鼠周龄一般应为 6周8周
非啃齿类动物首选狗,常用的品系为beagle狗,应选用雌、雄两种性别,动物的月龄一般为 4月一6月
每个动物起始体重的差异应不超过同性别动物平均体重的士20%
每组大鼠应至少选用 20只动物,每组狗至少选用8只动物,雌雄各半,必要时应增加动物数,以便试验结束时保留一些动物 做恢复期的观察
动物购买后于试验前适应环境5d7d,适应期应进行检疫观察
实验动物房应符合GB14925的有关规定
试验期间自由饮水和摄食,大鼠按性别分笼饲养,可单 饲或群饲,群饲时每笼的动物数应以不影响动物自由活动或观察动物的表现为宜
6.3剂量设计与分组 6.3.1剂量分组 至少应设三个剂量组和一个对照组
原则上高剂量组的动物应当出现明显中毒表现但不引起动物 死亡,低剂量组应不引起毒性作用并应高于人的实际接触水平,中剂量可产生轻度的毒性,以求出未观 察到有害作用剂量水平和观察到有害作用最低剂量水平
对照组为溶剂对照组或介质对照组,除不给 予受试物外,其余处理均与剂量组相同
当掺人饲料染毒时,如果食物摄人量和利用率降低,则需考虑 设配对饲养对照组
6.3.2附加组 如果需要,可增设附加试验组和附加对照组,啮齿类动物数每组至少10只(雌雕雄各半),非啮齿类动 物动物数每组为8只动物雌雄各半),附加试验组给予高剂量染毒,附加对照组为溶剂对照组或介质对 照组
在染毒结束后继续观察至少28d,进行相关指标测定,以观察受试物毒性的可逆性、持续性和迟 发效应 6.3.3限量试验 如果预期在1000mg/kg体重、1mg/L或可发生的气溶胶最高浓度)剂量不可能产生任何毒性影
GB/T15670.13一2017 响,或根据结构可预测到其不会产生潜在的毒性时,可不必设定三个剂量
6.4染毒途径 6.4.1经口染毒 可将受试物混人饲料或饮水,或采用灌胃法染毒
非啮齿类动物狗还可以胶囊给予
每周染毒 7d
采用灌胃法,每日灌胃一次,时间地点应相同,并定期按体重调整灌胃量(动物快速生长期,应每周 称两次体重进行调整,之后可每周按体重进行灌胃量调整),以维持染毒剂量不变
灌胃量一般不超过 0mL/kg体重,如为水溶液时,最大灌胃量可达20mL/kg体重
各组灌胃体积一致
6.4.2经皮染毒 每天染毒一次,染毒6h,也可每周染毒5d
染毒后用适宜的清洁剂清洗
首次染毒开始前24h 将动物躯干背部染毒区的被毛去除,去毛时应小心不可损伤动物皮肤,以免引起皮肤通透性的改变
此 后视动物被毛生长情况,大约每周要对染毒部位去毛,各组的去毛时间和去毛面积应一致
受试物应尽 可能博而均匀地涂敷于整个染毒区域,染毒部位的面积约相当于动物体表面积的10%,应通过对动物 体重的测定确定染毒部位的面积,若受试物毒性较大,可相对减小染毒区域的面积
应使用玻璃纸和无 刺敞的胶带将受试物固定,以保证受试物与皮肤有良好的接触和助止受试物脱落 6.4.3吸入染毒 采用动式染毒系统进行亚慢性吸人毒性试验
每日吸人染毒6h,每周7d
考虑到实际工作情况,也可每周染毒5d
染毒时间从染毒柜达到预 定浓度开始计算
柜内空气中受试物浓度要求恒定
染毒柜换气次数应达到12次/h~15次/h,柜内氧含量>19%,柜内受试物浓度均匀,对照组与染 毒组动物用柜的设计完全一致,染毒柜应保持一定的负压,以防受试物意外漏出
染毒柜物理参数应连续监测,保证管道通畅以及各个染毒柜条件相同: 空气流量;需连续监测 a 柜内受试物浓度;尽量保持恒定,定时测定; b 柜内温湿度;温度(22士3)C,湿度30%一70%(水性受试物染毒时除外),应连续监测" c 粒径大小:粒子应是可吸人大小,空气动力学直径MMAD(空气动力学直径重量中值)在14mm~ d 4m范围内
应在动物呼吸带采样检测粒径
在气溶胶发生装置调试时要反复检测,稳定后 可定期检测
6.5染毒周期 染毒时间为90d或180d,附加组动物恢复期观察至少28d
6.6试验观察和检查 6.6.1 -般临床观察 试验期间至少每天观察一次动物的一般临床表现,并记录动物出现中毒的体征、程度和持续时间及 死亡情况
观察至少包括以下内容;皮肤,被毛、眼、黏膜,呼吸系统、循环系统、神经系统、肢体活动、行 为方式等的改变
对死亡动物应及时解剖,对濒死动物应及时处理
6.6.2体重和摄食及饮水量记录 每周记录体重,摄食量
受试物经饮水给予时,应记录每周饮水量
GB/T15670.13一2017 6.6.3眼科检查 必要时,在染毒前和染毒试验结束时,至少对高剂量组和对照组动物,使用检眼镜进行内眼检查
若发现动物有眼科变化,应对所有动物进行检查
6.6.4血液学检查 90d亚慢性毒性试验在试验末期进行血液学指标测定,必要时在试验中期也进行测定,180d亚慢 性毒性试验应在试验中期和末期进行血液学指标测定
测定指标包括血红蛋白浓度、红细胞数、,血球压 积,白细胞总数及分类、血小板数、凝血功能(凝血酶原时间和激活部分凝血活酶时间)等
如果对血液 系统有影响,应增加网织红细胞、骨髓涂片细胞学检查
6.6.5血液生化检查 90d亚慢性毒性试验在试验末期进行血液生化指标测定,必要时在试验中期也进行测定,180d亚 慢性毒性试验应在试验中期和未期进行血液生化指标渊定,实验动物应空股采血
测定指标至少应创 括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AsT)、碱性磷酸酶(ALP),尿素氮(BUN),肌酥 Cr),血糖(GLU),白蛋白(AIB),总蛋白(TP)、总胆固醉(TCH)、钾,钠,必要时测定丫-谷氨酰转肽酶 GGT)、鸟氨酸脱梭酶(ODC)、甘油三酯、胆酸、胆碱酯酶、激素,钙和磷等指标
6.6.6尿液检查 如果需要,90d亚慢性毒性试验在试验末期应进行尿液指标测定,必要时在试验中期也进行测定 180d亚慢性毒性试验应在试验中期和末期进行尿液指标测定,包括外观、比重、酸碱度、尿蛋白、葡萄 糖和血细胞等
6.6.7病理检查 6.6.7.1大体解剖检查 试验结束时应对所有动物进行大体检查,包括体表、颅腔、胸腔、腹腔及其脏器
剖取脑、脑垂体心 脏/主动脉、甲状腺和甲状旁腺、食道、肺/气管、胸腺、胃、十二指肠、小肠、大肠、肝、肾、脾、胰、肾上腺、卵 巢、睾丸、附睾、有代表性的淋巴结、脊髓(颈、胸和腰段)、子宫,前列腺、膀胱、坐骨神经、胸骨进行固定
必要时(如果大体观察有病变)剖取乳腺、肌肉、股骨、泪腺、唾液腺、皮肤和眼球进行固定
并称取脑、心 脏、胸腺、肾上腺、肝、肾、脾,睾丸、卵巢的重量,计算脏器系数
6.6.7.2组织病理学检查 组织病理学检查的原则为 高剂量组和对照组大体解剖检查所有固定保留的器官和组织进行组织病理学检查; a) b 发现高剂量组病变后再对中、低剂量组相应器官和组织进行组织病理学检查 应对大体解剖检查肉眼可见的其他病变器官和组织进行组织病理学检查 d 染毒处理组有异常改变的,应对附加组动物相应的器官及组织进行组织病理学检查 e 试验过程中死亡或濒死动物,应对全部保留的组织和器官进行组织病理学检查
吸人途径染毒,整个呼吸系统包括鼻、咽、喉均应检查
6.6.8其他指标检查 必要时,根据受试物的性质及所观察的毒性反应,增加免疫系统、神经系统和神经行为等敏感检测
GB/T15670.13一2017 指标
试验结果和评价 应将所有的结果以表格形式列出,包括试验开始前动物数、动物体重、摄食量,血液学指标、血液生 化指标、脏器重量和脏器系数、病理检查结果等
对每项指标用合适的统计方法进行统计学检验
应将临床表现、生长发育情况、血液学指标,血液生化指标脏器重量和脏器系数、病理检查结果结 合统计结果进行综合分析,评价受试物是否引起毒性反应、程度、作用的靶器官以及是否存在剂量-反应 关系等
在综合分析的基础上,对受试物的毒性效应和毒作用靶器官作出结论,获得未观察到有害作用 剂量水平和观察到有害作用最低剂量水平
试验报告 试验报告至少应包括以下内容 试验名称,试验单位名称和联系方式,报告编号 a 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期和封样情况 b 试验开始和结束日期试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期; c d 试验摘要; 受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号(CAs号)(如已知)代码(如有),纯度(或含量》 剂型,生产日期(批号),理化性质、配制所用溶剂和方法 实验动物种属、品系、级别、数量、体重、性别来源(供应商名称、实验动物质量合格证号、实验 动物生产许可证号),检疫,适应情况,实验动物饲养环境包括温度、相对湿度、饲料、单笼饲养 或群饲,实验动物设施使用许可证号 剂量和组别包括选择剂量的原则或依据、剂量和组别、动物分组方式和每组每种性别动物数 8 h)试验条件和方法;包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期,观察指标等; 试验结果:以文字描述和表格逐项进行汇总,包括临床中毒表现,体重,摄食量,各项指标的变 化,大体解剖和组织病理学改变等,并写明结果的统计处理方法; 试验结论:根据试验结果,对受试物的毒性效应和毒作用靶器官作出结论,求出未观察到有害 作用剂量水平和观察到有害作用最低剂量水平 原始记录保存情况的说明
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农药登记毒理学试验方法第13部分：亚慢性毒性试验GB/T15670.13-2017
农药登记毒理学试验方法第13部分: 亚慢性毒性试验GB/T15670.13-2017是我国农药登记必须遵守的标准之一，它规定了亚慢性毒性实验的试验方法及评价指标，为农药的注册和使用提供科学依据。本文将就该标准进行详细介绍。
亚慢性毒性试验的定义
亚慢性毒性试验是指在较长时间内（通常为90天），每日给药，观察实验动物的毒性反应的试验。该试验可以评价农药对机体的慢性毒性作用，包括长期暴露的潜在危险性、生物累积和亚慢性效应等。
试验动物的选择
标准中规定了实验所需的试验动物种类和数量，同时还对它们的品系、体重、年龄等作出详细要求。其中，大鼠是常用的试验动物之一，其能够反映人体生理、代谢特点，且具有较高的灵敏性和可重复性。
试验的设计
亚慢性毒性试验需要进行多个剂量水平的实验，通常包括阴性对照组、阳性对照组和不同剂量组。实验的剂量应根据既定的安全数据和理论值确定，同时应考虑到药物相互作用、药代动力学等因素。
试验指标
根据标准GB/T15670.13-2017，亚慢性毒性试验的指标主要包括以下内容：
- 一般体征和行为观察
- 食欲、水分摄入量、体重变化
- 血液生化指标、尿液分析
- 器官重量、组织学检查
- 病理学检查
通过以上指标的观察和检测，可以全面评估农药在动物体内的毒性反应，从而判断其安全性。
实验数据分析
亚慢性毒性试验完成后，需要对实验数据进行统计和分析。根据GB/T15670.13-2017标准中规定的方法，一般采用双因素方差分析或多因素方差分析等方法进行数据处理，以确定试验结果的可靠性和显著性。
结论
农药登记毒理学试验方法第13部分: 亚慢性毒性试验GB/T15670.13-2017是评估农药安全性的重要方法之一，对于确保农产品质量、保护消费者健康具有重要意义。实验设计和数据分析均要按照该标准进行，以获得可靠和科学的结果。通过不断完善和更新试验方法及指标，可以更好地保障人类健康与环境安全。
农药登记毒理学试验方法第13部分：亚慢性毒性试验的相关资料
- 农药登记毒理学试验方法第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验GB/T15670.9-2017
- 农药登记毒理学试验方法第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验GB/T15670.8-2017
- 农药登记毒理学试验方法第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验GB/T15670.7-2017解析
- 农药登记毒理学试验方法第6部分：急性吸入毒性试验GB/T15670.6-2017
- 农药登记毒理学试验方法第5部分：急性经皮毒性试验GB/T15670.5-2017
- 大型急性毒性实验方法GB/T16125-2012
- 医疗器械生物学评价第20部分：医疗器械免疫毒理学试验原则和方法GB/T16886.20-2015
- 农药登记毒理学试验方法第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验GB/T15670.9-2017
- 农药登记毒理学试验方法第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验GB/T15670.8-2017
- 农药登记毒理学试验方法第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验GB/T15670.7-2017解析
