蜂蜜中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

蜂蜜中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T23410一2009 蜂蜜中硝基咪陛类药物及其 代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofresiduesofnitroimidazolesand metabolitesinhoney their LC-MS/MSmethod 2009-03-28发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23410一2009 前 言 本标准的附录A,附录B附录C和附录D为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位:江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:赵增运、沈崇钰、丁涛、林宏、杨雯堑、陈小卫、蒋原、陶宏锦
GB/T23410一2009 蜂蜜中硝基咪陛类药物及其 代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中甲硝陛(简称MNZ,下同)及其代谢物1-(2-胫乙基)-2-胫甲基-5-硝基咪陛(简 称MNZOH,下同),二甲硝咪陛简称DMZ,下同)及其代谢物2-胫甲基-1-甲基-5-硝基咪陛简称 HMMNI,下同,异丙硝幽简称IPZ,下同及其代谢物2-(2-羚异丙基)-1-甲基-5-硝基眯陛简称 IPzOH),洛硝哒陛简称RNZ,下同)残留量的液相色谱-串联质谐的测定方法 上述硝基咪幽类药物 中英文名称、结构式,CAs号和相对分子质量参见附录A 本标准适用于蜂蜜中硝基咪幽类药物及其代谢物残留量的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD 方法提要 试样加人相应内标后用乙酸乙酯提取硝基咪陛类药物及其代谢物,蒸干提取溶液,利用液相色谱 串联质谱仪测定,梯度洗脱,内标法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 甲醇:HPLC级 4.2乙酸乙酯 4.3乙酸铵;HPLC级 4.4同位素内标,DMZ-D、,IPZOH-D,IHMMN-D.,纯度>98% 45MIZ.MINzoH,DMZ.HMMINI,IPzIPzoH和RZ标准品，纯度>98% 4.6MNZ.MNZOH,DMZz、HMMNIIPZ,IPzOH和RNZ标准储备溶液;1mg/mlL 准确称取适量 mL 的MNZMNzOH、,DMZHMMNI,IPz.IPZOH和RNZ标准品(4.5),用甲醇(4.1)配成1.0mg/ 的标准储备液,储备液贮存在4C冰箱中,可保存6个月 DMZ-D、,IP么OH-D和HMMN内标储备溶液;1004g/ml 称取适量的DMZ-D、,IPZOH-D和 HMIMN-D内标物(4.4),用甲醇(4.l)配成100g/mL储备液,储备液贮存在4C冰箱中 4.8DMZ-D,IPZOH-D和HIMMNI-D内标工作溶液:lg/ml 取适量内标储备液用甲醉(4.1)稀 释成1g/ml.工作溶液,内标工作溶液在4C保存 4.9MNZMNZOH,DMZ,HMMN,IPZ,IPZOH和RNZ标准工作溶液;用甲醇(4.1)分别配成浓度 范围为lng/ml~100ng/mL标准工作溶液,其中内标溶液浓度为50ng/ml,现配 4.10甲醇-水(28,体积比):量取20mL甲醇(4.1)于80mL水中,混合均匀
GB/T23410一2009 仪器 液相色谱-质谱/质谱仪(串联四极杆);配有电喷雾离子源 5.1 5.2分析天平;感量0.01只和0.1mg各一台 旋转蒸发仪或相当者 . 3 5.4涡旋混匀器 5.5真空系;真空度不低于80kPa 5.6离心机:转速不低于2500r/in. 5.7移液器:5mL.200L 5.8滤膜;有机相,0.45Am. 试样的制备与保存 6 试样的制备 将实验室样品搅拌均匀,分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样品袋中,密封,并做上标记 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留含量变化 试样的保存 将试样于冷藏状态下保存(4C) 测定步骤 7.1提取 准确称取10g(精确到0.01g)试样,置于50ml.具塞离心管中,准确加人50AL3种内标混合溶液 4.8),3ml5ml水,于涡旋混匀器上快速混合至蜂蜜完全溶解 加人10ml乙酸乙酯(4.2),混合 30s,2500r/min离心3min,取上层乙酸乙酯到50mL玻璃试管中,再加人10mL乙酸乙酯(4.2),重 复上述提取步骤,合并提取液,40C水浴旋转蒸发干 用甲醇-水(4.10)1.0ml定容,过滤到进样瓶 中,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.2测定 7.2.1 参考液相色谱条件 a 色谱柱封端C" ,3!" am,150mm×2.0mm(内径)或相当者 b)流动相甲醉醇十5mmol/1乙酸铵溶液; c)流速;0.20ml/min; D 梯度洗脱程序:参见附录B; 柱温:室温; e fD 进样量;25l. 7.2.2串联质谱条件 参见附录C 液相色谱-串联质谱测定 7.3.1定性测定 进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图 中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比,最大允许相对偏差不超 过表1中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >l0%一20% <10% 允许的相对偏差 士20% 士25% 士30% 士50%
GB/T23410一2009 7.3.2定量测定 标准工作溶液(4.9)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样,以标准与内标物峰面积比值为纵 坐标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制6点标准工作曲线(lng/ml100ng/ml),用标准工作曲 线对样品进行定量,样品溶液中标准的响应值均在仪器测定的线性范围内 其中DNMZ-D作为MNZ DMZ和MNzOH内标使用;HMMN-D作为HMMN和RNZ内标使用;IPZOH-D作为IPZ和 IPZOH内标使用 在上述色谱条件下,其相应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D. 7.4平行试验 按以上(7.17.3)步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取试样外,均按上述(7.17.3)步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算 c ×m 式中: 样品中硝基咪陛及其代谢物的浓度,单位为微克每千克(4g/kg) 样品中硝基咪陛及其代谢物的峰面积与相应内标峰面积比值; 硝基咪陛及其代谢物标准的质量,单位为纳克(ng) 标准品中硝基咪陛及其代谢物的峰面积与相应内标峰面积比值; 样品质量,单位为克(g). 注，计算结果需扣除空白值 检测低限、回收率范围和精密度 本标准中MNZ,DMZ,RNZ和PZ测定低限为1.0g/kg,HMMNIPZOH和MNZOH测定低 限为2.0g/kg 蜂蜜中硝基咪陛及其代谢物添加浓度及回收率范围(内标校正)的试验数据(n=10): 添加水平为1.04g/kg,MNZ,DMZ、RNZ和IPZ回收率范围在98%107%; 添加水平为2.0pg/kg,MNZ,IDMZ.RNZ,IPzZ.NMNZOH,HMMN和PZOH回收率范围在96%107% 添加水平为5.0pg/kg,MNZ.IDMZRNZIPZ.MNZOH.HMMIN和IPZOH回收率范围在97%107%; 添加水平为10.04g/kg,MNZOH、HMMNI和IPZOH回收率范围在99%100% 在1.04g/kg,2.04g/kg、5g/k和10.0g/k添加水平上相对标准偏差(RSD)为4.2%~8.1%
GB/T23410一2009 附 录A 资料性附录 硝基咪陛类药物及其代谢物中文名称,英文名称、 化学结构式CAs号和相对分子质量 表A.1硝基咪陛类药物及其代谢物中文名称,英文名称 化学结构式.CAs号和相对分子质量 序号 中文名称/英文名称/简称 化学结构式 相对分子质量 CAS号 甲硝哗 Metronidazole eH 171 443-48-1 MNZ2 C;H,OH OH 甲硝哗代谢物 ON Metronidazole(OH 187 4812-40-2 OH MNZOH 二甲硝基咪哗 Dimetridazole CH 14 551-92-8 DMZ CH 二甲硝基咪哗-代谢物 CH.,oH 158 936-05-0 Hydroxydimetridazole HHMMNI CH. 洛硝哒幽 Ronidazole 200 7681-76-7 CHC0ONH RNZ CH. CH CH 异丙硝哗 Ipronidazole 69 14885-29-1 O..N CH IPZ)
GB/T23410一2009 表A.1续) 化学结构式 相对分子质量 序号 中文名称/英文名称/简称 CAS号 异丙硝幽代谢物 Ipronidazole-(OH 85 35175-14-5 (IPZOH HO H,C
GB/T23410一2009 B 附 录 资料性附录 流动相梯度洗脱程序 表B.1流动相梯度洗脱程序 时间/minm 甲醇/% 5mmol/L乙酸溶液/% 8C 0.00 20 80 l.00 20 90 2.00 10 5.50 90 10 6.00 20 80 8.00 80 20
GB/T23410一2009 附 录 c 资料性附录 质谱/质谱条件及选择离子参数设定表 离子源;电喷雾离子化电离源(ESI).正离子监测 扫描方式;选择离子检测SRM): 雾化气、鞘气为高纯氮气,碰撞气为高纯氯气; 喷雾电压;4200V 加热毛细管温度;350C 表C.1选择离子参数设定表 母离子 定性离子 定量离子 测定物质 碰撞电压/V m/2) mm/z) m/z 82 22 MNZ 172 128 128 14 123 14 MNZOH 188 123 126 16 81 24 DM2 142 96 96 18 5 227 HIMMN 158 140 140 12 55 RNZ 201 140 12 140 109 19 IPZ 170 124 124 16 122 17 IPZOH 186 168 168 11 DNzD 99 99 16 145 HMMN-D 12 161 143 143 POH-D 189 171 171 13
GB/T23410一2009 附录 D 资料性附录 硝基咪陛及其代谢物和内标离子流色谱图 5.01 4.74 00s I0o1 0 0s DMZ142>96 MNz172>128 5.00 4.22 DMZ-D145>99 MzOH188>123 0s 0 d I0O 4.65 5.50 80 RNZ201>140 PZ170>124 1.55 5.26 HMNI158>140 PzoH186>168 0f 加 味 dd 4.60 5.26 80 80 01 6O HIMMNI-D161>143 IPzOHD189>171 40 40 20 20 /minm /min 图D.1硝基咪陛类药物及其代谢物和内标离子流色谱图