GB/T18246-2019
饲料中氨基酸的测定
Determinationofaminoacidsinfeeds
- 中国标准分类号（CCS）B46
- 国际标准分类号（ICS）65.120
- 实施日期2020-07-01
- 文件格式PDF
- 文本页数12页
- 文件大小1.78M
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饲料中氨基酸的测定
国家标准 GB/T18246一2019 代替GB/T18246-2000 饲料中氨基酸的测定 Determination0famin0acidsinfeeds 2019-12-10发布 2020-07-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/T18246一2019 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准代替GB/T18246一2000(饲料中氨基酸的测定》. 本标准与GB/T182462000相比,除了编辑性修改外,主要技术内容变化如下 修改了标准的适用范围,增加了精料补充料,明确了不同处理方法所测定的氨基酸种类,增加 了各种氨基酸的摩尔质量和定量限(见第1章和附录A,2000年版的第1章)
将标准方法分四章表述,分别为“常规酸水解法”“氧化酸水解法”“碱水解法”“酸提取法”(见第 3章,第4章、第5章、第6章 修改了常规酸水解法盐酸水解溶液配方(见3.2.3,2000年版的4.1.1.1l). -增加了氧化酸水解测定含硫氨基酸以外其他氨基酸的方法(见4.2)
修改了盐酸提取溶液配方(见6.2.3,2000年版的4.3.1)
-增加了酸提取法中配合饲料、浓缩饲料和精料补充料样品的净化步骤见6.5.1.2,2000年版的 7.1.3)
修改了试验数据处理中的计算公式[见式(),式(3),2000年版的式(1),式(2)]
修改了精密度的表述(见3.7,6.7,2000年版的第9章)
修改了附录A的内容,修改为各种氨基酸的摩尔质量和定量限(见附录A,2000年版的附录 A. 增加了氨基酸标准溶液色谱图(见附录B. 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(sAc/Tc76)提出并归口
本标准起草单位;农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 北京)]
本标准主要起草人;贾争,赵根龙,李兰、樊霞、肖志明、李阳、刘晓露
本标准的历次版本发布情况为 GB/T182462000o
GB/T18246一2019 饲料中氨基酸的测定 范围 本标准规定了饲料中总氨基酸(肽键结合和游离的)和游离氨基酸(天然和添加的)测定方法,包括 常规酸水解法、氧化酸水解法、碱水解法和酸提取法 常规酸水解法适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中含硫氨基 酸(胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸)和色氨酸以外的其他氨基酸(天门冬氨酸,苏氨酸,丝氨酸,谷氨酸,脯氨 酸,甘氨酸,丙氨酸、绑氨酸,异亮氨酸,亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸)含量的测定 氧化酸水解法适用于饲料原料、配合饲料,浓缩饲料和精料补充料中含硫氨基酸胱氨酸,半胱氨酸 和蛋氨酸)的测定
以偏重亚硫酸钠为氧化终止剂时,可测定除酪氨酸,色氨酸以外的其他蛋白水解氨 基酸;以氢澳酸为终止剂时,可测定除酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸和色氨酸以外的其他蛋白水解氨基酸
碱水解法适用于饲料原料,配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中色氨酸的测定
酸提取法适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中游离氨基酸的测定
各氨基酸的定量限见附录A中表A.1
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T15399饲料中含硫氨基酸的测定离子交换色谱法 GB/T15400饲料中色氨酸的测定 GB/T20195动物饲料试样的制备 JJG1064氨基酸分析仪 常规酸水解法 3.1原理 饲料中蛋白质在110C,6mol几盐酸溶液作用下水解成氨基酸,经离子交换色谱分离和前三酮柱 后衍生化,脯氨酸于440nm波长处测定,其他氨基酸于570nm波长处测定
3.2试剂或材料 除特殊说明外,本标准所用试剂均为分析纯
3.2.1水;应符合GB/T6682中一级水的规定
GB/T18246一2019 3.2.2盐酸;优级纯
3.2.3盐酸水解溶液(6mol/L);将500ml盐酸(3.2.2)与500mL水混合,加lg苯酚,混匀
3.2.4柠檬酸钠缓冲溶液[pH=2.2,c(Na*)=0.2mol/L];称取柠檬酸三钠19.6g于1000ml容量 瓶中,加水溶解后加人盐酸(3.2.2)16.5mL,硫二甘醇5.0mL,苯酚1g,用水定容并过滤
3.2.5氨基酸标准储备溶液;含17种常规蛋白水解液分析用氨基酸(天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸,谷 氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸,苯丙氨酸、赖氨酸、组 氨酸和精氨酸),各组分浓度均为2.50wmol/ml,应使用有证标准溶液 3.2.6氨基酸标准工作溶液;准确移取2m的氨基酸标准储备溶液(3.2.5)置于50mL容量瓶中,以 柠檬酸销缓冲溶液(3.2.4)定容各氨基酸组分浓度为100nmol/mL用安瓶分装密封每支约1mL,在 C8C下保存,有效期3个月 3.2.7不同pH值和离子强度的柠檬酸钠缓冲溶液与苗三酮溶液;按照仪器说明书配制或购买
3.2.8液氮
3.3仪器设备 3.3.1氨基酸自动分析仪:具备阳离子交换柱,苗三酮柱后衍生装置及570nm和440nm光度检测器 3.3.2天平;感量0.1mg和0.01mg
3.3.3真空泵 3.3.4喷灯
3.3.5恒温干燥箱;温度可达110C士2
3.3.6离心机转速不低于4000r r/min
3.3.7旋转蒸发器或浓缩器;可在室温至65C间调温,控温精度士1,真空度可低至3.3×10Pa 25mm nHg). 3.4样品 按GB/T20195进行样品制备,粉碎过0.25mm孔径筛,混合均匀,装人密闭容器中保存,备用
对于粗脂肪含量大于或等于5%的样品,需将脱脂后的样品风干、混匀,装人密闭容器中备用
对 于粗脂肪小于5%的样品,可直接称样
3.5试验步骤 3.5.1样品前处理 25 平行做两份试验
称取试样50mg~ 100mg(含蛋白质约7.5mg mg,精确至0.1mg)于 20mL安瓶或水解管中,准确加人10ml盐酸水解溶液(3.2.3),置液氮(3.2.8)中冷冻,使用真空泵抽真 空至7Pa(<5×10-”mmHg)后用喷灯封口或充氮气1min后旋紧管盖
将安瓶或水解管放在110O 士2C恒温干燥箱中,水解22h一24h
冷却,混匀,开管,过滤,用移液管精确吸取适量的滤液,置于旋 转蒸发器或浓缩器中,60C下抽真空蒸发至干,必要时,加少许水,重复蒸干1次2次
加人3ml 5mlL柠檬酸钠缓冲溶液(3.2.4)复溶,使试样溶液中氨基酸浓度达到50 nmol/ml~250nmol/mL,摇匀,过 滤或离心,上清液待上机测定
GB/T18246一2019 3.5.2测定 将氨基酸标准工作溶液(3.2.6)注人氨基酸自动分析仪,以不同pH和离子强度的柠糍酸钠缓冲溶 液与前三酮溶液(3.2.7)作为流动相和衍生剂,适当调整仪器操作程序及参数和洗脱用缓冲溶液试剂配 比,应符合JG1064氨基酸分析仪检定规程的要求,并保证苏氨酸-丝氨酸、甘氨酸-丙氨酸以及亮氨酸 异亮氨酸分离度分别不得小于85%、90%和80%,其标准溶液色谱图参见附录B的图B.1、图B.2
注 人制备好的试样溶液和相应的氨基酸标准工作溶液进行测定,每5个样品(即10个单样)为一组,组间 插人氨基酸标准工作溶液(3.2.6)进行校准
以保留时间定性,单点外标法定量
试样中氨基酸的峰面 积应在标准工作溶液相应峰面积的30%~200%,否则应用柠檬酸钠缓冲溶液(3.2.4)稀释后重测
3.6试验数据处理 试样中氨基酸含量以其质量分数w(%)计,未脱脂试样按式(1)计算,脱脂试样按式(2)计算 n×A×V×c×M×V
×100 7e= ××V×10" A "xAVxcxMx ×100×(1一F Z Am×V×I0" 式中 试样水解溶液稀释倍数; A 试样溶液中对应氨基酸的峰面积 试样水解溶液体积,单位为毫升(mL) 标准工作溶液中对应氨基酸的浓度,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL); 氨基酸的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol),各氨基酸摩尔质量见表A.1 M V， -氨基酸标准溶液进样体积,单位为微升(AL); A， 氨基酸标准溶液中对应氨基酸的峰面积 试样质量,单位为毫克(mg); mn 试样溶液进样体积,单位为微升(L); F 粗脂肪含量,%
以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果,保留两位小数
3.7精密度 在重复性条件下,获得的两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值,当含量不大于0.5%时,不 超过这两个测定值算术平均值的5%;含量大于0.5%时,不超过4%
氧化酸水解法 4.1含硫氨基酸的测定 按GB/T15399的规定执行
4.2其他氨基酸的测定 4.2.1原理 以偏重亚硫酸钠为氧化终止剂时,可测定除酪氨酸,色氨酸以外的其他蛋白水解氨基酸;以氢澳酸
GB/T18246一2019 为终止剂时,可测定除酪氨酸,苯丙氨酸、组氨酸和色氨酸以外的、包括含硫氨基酸在内的其他氨基酸的 含量
4.2.2样品前处理 样品前处理按GB/T15399的规定执行
4.2.3测定 将含有磺基丙氨酸、蛋氨酸碱与氨基酸标准溶液注人氨基酸自动分析仪,以不同pH和离子强度的 柠檬酸钠缓冲溶液与苗三酮溶液(3.2.7)作为流动相和衍生剂,调整仪器操作程序及参数、洗脱用缓冲 溶液试剂配比,应符合JG1064氨基酸分析仪检定规程的要求并保证苏氨酸-丝氨酸、甘氨酸-丙氨酸、 亮氨酸-异亮氨酸和蛋氨酸碱-天门冬氨酸的分离度分别不得小于85%、90%,80%和85%,其标准溶液 色谱图见附录B的图B.3
测定中每5个样品即10个单样)为一组,组间插人磺基丙氨酸、蛋氨酸碱 与氨基酸标准溶液进行校准
以保留时间定性,单点外标法定量
试样中氨基酸的峰面积应在标准工 作溶液相应峰面积的30%一200%,否则应用柠檬酸钠缓冲溶液(3.2.4)稀释后重测 4.2.4试验数据处理 试样中胱氨酸(含半胱氨酸)和蛋氨酸含量的计算同GB/T15399. 其他氨基酸的计算,同式(1)、式(2)
4.2.5精密度 同3.7
5 碱水解法 按GB/T15400的规定执行
酸提取法 6 6.1 原理 饲料中游离氨基酸以稀盐酸提取，经离子交换色谱分离,苗三酮柱后衍生测定
6.2试剂或材料 除特殊说明外,本标难所用试剂均为分析纯. 6.2.1水;应符合GB/T6682中一级水的规定
6.2.2氢氧化钠:优级纯
6.2.3盐酸提取溶液(o.1mol/L);取8.3ml盐酸(3.2.2)于1000mL容量瓶中,加20mL硫二甘醇 用水定容,摇匀
6.2.45-碱基水杨酸溶液;称取6g5-磺基水杨酸,加水溶解并定容至100mL
6.2.5氢氧化钠溶液(1nmol/L);称取4只氢氧化钠,溶解于100mL水中
molL]同3.2.4
6.2.6柠檬酸钠缓冲溶液[pH=2.2,c(Nat)=0.2 6.2.7氨基酸标准储备溶液;同3.2.5
GB/T18246一2019 6.2.8氨基酸标准工作溶液;同3.2.6. 6.2.9不同pH和离子强度的柠檬酸钠缓冲溶液与前三酮溶液;同3.2.7
6.3仪器设备 6.3.1氨基酸自动分析仪:同3.3.1
6.3.2天平同3.3.2
6.3.3离心机;同3.3.6. 6.3.4超声波振荡器
6.4样品 按GB/T20195进行样品制备,粉碎过0.25mm孔径筛,混合均匀,装人密闭容器中保存,备用 6.5试验步骤 6.5.1样品前处理 6.5.1.1添加剂预混合饲料 平行做两份试验
称取1g一2旦试样(精确到0.2mg),加人盐酸提取溶液(6.2.3)30mL.用超声 波振荡器超声提取15min,静置片刻,将上清液过滤至100ml容量瓶中,再用15ml20ml水重复 提取两次,将上清液过滤到上述容量瓶中,用水冲洗提取瓶和滤纸上的残渣,并定容
若试样提取过程 中过滤太慢,也可离心10min(4000r/min)合并上清液并加水定容
摇匀,滤液供上机测定
6.5.1.2配合饲料、浓缩饲料和精料补充料 平行做两份试验
称取试样2g一5g(精确到0.5mg100mL离心管中,加人盐酸提取溶液 6.2.3)50mL,用超声波振荡器超声提取30min,4000r/min离心10nmin,上清液移至100mL容量瓶 中,残渣用45ml盐酸提取溶液(6,2.3)重复提取一次,离心后合并上清液,加水定容;准确移取10ml 滤液于50mL烧杯中,加5mL5-磺基水杨酸溶液(6.2.4),搅拌5min,过滤或离心,除去沉淀,用氢氧化 钠溶液(6.2.5)调节滤液或上清液pH至2.2,用柠檬酸钠缓冲溶液(6.2.6)定容至100nmL,供上机测定
6.5.2测定 同3.5.2
6.6试验数据处理 试样中氨基酸含量以其质量分数w(%)计,按式(3)计算 nxAVxexxY ×100 7e一 A×m1×V×10" 式中: 试样提取溶液稀释倍数; A 试样溶液中对应氨基酸的峰面积 试样提取溶液体积,单位为毫升(mL) 标准工作溶液中对应氨基酸的浓度单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL) M 氨基酸的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol),各氨基酸摩尔质量见附录中表A.l;
GB/T18246一2019 氨基酸标准溶液进样体积,单位为微升(L); 氨基酸标准溶液中对应氨基酸的峰面积 A 试样质量,单位为克(g) m 试样溶液进样体积,单位为微升(AL); 以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果,保留两位小数
6.7精密度 同3.7
GB/T18246?2019 ? A 淶??) ?? ???A.1 A.1??? ?/g/nmol /% ? 1331 0,04 ? 119.1 0.03 ? 105,1 0,03 ? 147.1 0,03 15.1 0.06 75. 0.02 ? 89.l 0.02 ? 240.3 0.01 就 l17.2 0,03 149.2 0,.01 131.2 0,04 31 0.04 181.2 0.05 ? 165,2 0,04 146.2 0.04 鰱 155.2 0.04 0.02(??? ? 204.2 0.04(??) 174.2" 0.05
GB/T18246?2019 B ? ??) ??? ????(570nm)????(440nm)??? ??????B.l?B.2?B.3 ??570mm 150. 00 g 50 9 30 15 20 25 ?/min ? ?(Asp); ?(Thr); ?(Ser); ?(Glu) ?(Gly): (Ala); ?(Cys); (Val) (Met); Ile (Leu); 12 ?(Tyr) 13 -(Phe); (Lys) 14 5 鰱(His); 16 (Arg) ?B.1??(100nmol/mL,570nm)??
GB/T18246一2019 可见光被长40 mm 50 美 B 一m n" J 15 时间/min 说明 -天门冬氨酸(Asp); -苏氨酸(Thr); 丝氨酸(Ser):; 谷氨酸(Glu); -脯氨酸(Pr ro
图B.2氨基酸标准溶液(100nmo/mL,440nm)色谱图
GB/T18246?2019 ??440mm 150 J 100 ??570mm ? ? 50 9 15 20 25 30 ?min ?: (CySOH); MetSON); ?(Asp) ?(Th hr); ?(Ser); ?(Glu); -(Pro ?(Gly); (Aa) ?(Cys) l0 就(Val 12 -(Met); 13 le (Le eu); 15 ?(Tyr); 16 -(Phe); (Lys). 17 鰱(Hlis); 18- 19 -??(Anw). ?B3??????? 10
饲料中氨基酸的测定GB/T18246-2019
饲料中的氨基酸是动物生长和发育所必需的营养元素，饲料中氨基酸的含量对于动物的健康成长具有重要影响。因此，精确地测定饲料中氨基酸的含量对于饲料制造商和畜牧业生产者来说至关重要。
GB/T18246-2019是中国国家标准化管理委员会发布的一项关于饲料中氨基酸的测定方法的标准，该标准在国内外广泛应用。
对于饲料中氨基酸的测定，GB/T18246-2019标准提出了以下步骤：
- 样品预处理：将饲料样品磨碎并过筛，然后加入盐酸进行水解，过滤后再进行蒸发干燥。
- 氨基酸的衍生化：将经过预处理的样品加入甲醇和三氯化硼，进行氨基酸的衍生化。
- 色谱分离：使用高效液相色谱或气相色谱对衍生化后的氨基酸进行分离，并通过检测峰面积或峰高来计算氨基酸的含量。
GB/T18246-2019标准在测定饲料中氨基酸的含量时具有操作简便、准确性高等优点，在饲料行业得到了广泛应用。
总之，精确地测定饲料中氨基酸的含量对于动物的健康成长至关重要，而GB/T18246-2019标准提供了一种可靠的测定方法，为饲料制造商和畜牧业生产者提供了必要的技术支持。
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