原料乳中三聚氰胺快速检测　液相色谱法

原料乳中三聚氰胺快速检测　液相色谱法

国家标准 GB/T22400一2008 原料乳中三聚胺快速检测 液相色谱法 Rapiddeterminationofmelamineinrawmilk一 Hlighperformanceliquidchromatographymethod 2008-10-15发布 2008-10-15实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22400一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由计量科学研究院提出 本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会归口 本标准主要起草单位:计量科学研究院 本标准参加起草单位;陕西出人境检验检疫局、人民解放军总医院、北京市产 品质量监督检验所、国家地质实验测试中心、北京理工大学、北京出人境检验检疫局、 北京大学、北京市营养源研究所、军事医学科学院、北京科技大学、清华大学 本标准主要起草人李红梅、张庆合、汤桦、何雅娟,全灿,李秀琴、黄挺、苏福海、戴新华、马康、 李晓敏、宋德伟、徐蓓
GB/T22400一2008 原料乳中三聚氮胺快速检测 液相色谱法 范围 本标准规定了液相色谱法快速检测原料乳中三聚氮胺的方法 本标准适用于原料乳也适用于不含添加物的液态乳制品 本标准定量检测范围为0.30mg/kg~100.0mg/kg,方法检测限为0.05mg/kg 注:当原料乳中三聚胺的含量大于100.0mg/k时,具体操作方法见6.2.2.3.2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,ISO5725-l:l994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-2;1994,IDT GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISO3696:l987,MOD) 原理 用乙膀作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氛胺提取剂,强阳离子交换色谱挂分岗,高效液相色 谱-紫外检测器或二极管阵列检测器检测,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T6682规定的一级水 4.1乙睛(CH,CN):色谱纯 4.2磷酸(H,PO). 4.3磷酸二氢钾(KHPO). 三聚氮胺标准物质(C,H,N,);纯度大于或等于99% 4.5三聚氮胺标准贮备溶液(1.00×10mg/L);称取100mg(准确至0.1mg)三聚氮胺标准物质,用 水完全溶解后,100ml容量瓶中定容至刻度,混匀，4C条件下避光保存,有效期为1个月 4.6标准工作溶液;使用时配制 标准溶液A(2.00X10”mg/L);准确移取20,0ml三聚胺标准贮备溶液(4.5),置于100ml 容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀 4.6.2标准溶液B(0.50nmg/L):准确移取0.25nmL标准溶液A(4.6.1),置于100mL容量瓶中,用水 稀释至刻度,混匀 按表1分别移取不同体积的标准溶液A(4.6.1)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀 按表2分 4.6.3 别移取不同体积的标准溶液B(4.6.2)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀
GB/T22400一2008 表1标准工作溶液配制(高浓度 标准溶液A体积/ml 0.10 0.25 1.00 1.25 5.00 12.5 定容体积/ml 100 100 100 50.0 50,0 50.0 0.50 标准工作溶液浓度/(mg/n 0.20 2.00 5.00 20.0 50.0 表2标准工作溶液配制低浓度 标准溶液B体积/ml. 4.00 1.00 2.00 20.0 40.0 1o0 100 定容体积/ml. 100 100 100 /L 0,005 0,01 0.02 0.1o 0,20 标准工作溶液浓度/mg/ 群股盐缓肿液o.m/L)称取n8以准确至0.的腐服三叙梆(么3D,加水00mL完全浴 解后,用磷酸(4.2)调节pH至3.0,用水稀释至1L,用滤膜(4.9)过滤后备用 4.8 -次性注射器;2ml 4.9滤膜:水相,0.451 m 4.10针式过滤器;有机相，0.45Am. 4.11具塞刻度试管;50nml 仪器 5.1液相色谱仪配有紫外检测器或二极管阵列检测器 5.2分析天平:感量0.0001g和0.01g 5.3pH计:测量精度士0.02. 5.4溶剂过滤器 测定步骤 6.1试样的制备 称取混合均匀的15g(准确至0.01g)原料乳样品,置于50m具塞刻度试管(4.11)中,加人 30ml乙睛(4.1)剧烈振荡6min,加水定容至满刻度,充分混匀后静置3nmin,用一次性注射器(4.8) 吸取上清液用针式过滤器(4.10)过滤后,作为高效液相色谱分析用试样 6.2高效液相色谱测定 6.2.1色谱条件 6.2.1.1色谱柱;强阳离子交换色谱柱,sCx,250mm×4.6mnm(内径),5am,或性能相当者 注:宜在色谱柱前加保护柱(或预柱),以延长色谱柱使用寿命 6.2.1.2流动相磷酸盐缓冲溶液(4.7)-乙睛(70十30,体积比)混匀 6.2.1.3流速:1.5mL/min 6.2.1.4柱温:室温 6.2.1.5检测波长:240nm 6.2.1.6进样量;20 6.2.2液相色谱分析测定 6.2.2.1仪器的准备 开机,用流动相平衡色谱柱,待基线稳定后开始进样 6.2.2.2定性分析 依据保留时间一致性进行定性识别的方法 根据三聚氮胺标准物质的保留时间,确定样品中三聚 氰胺的色谱峰(参见附录A) 必要时应采用其他方法进一步定性确证
GB/T22400一2008 6.2.2.3定量分析 校准方法为外标法 6.2.2.3.1校准曲线制作 根据检测需要,使用标准工作溶液4.6.3)分别进样,以标准工作溶液浓度为横坐标,以峰面积为 纵坐标,绘制校准曲线 6.2.2.3.2试样测定 使用试样(6.1)分别进样,获得目标峰面积 根据校准曲线计算被测试样中三聚氮胺的含量 (mg/kg) 试样中待测三聚汛胺的响应值均应在方法线性范围内 注，当试样中三聚氮胺的响应值超出方法的线性范围的上限时,可减少称样量再进行提取与测定 6.2.3结果计算 6.2.3.1计算公式 结果按式(1)计算 X= >"I 式中: 原料乳中三聚氧胺的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 从校准曲线得到的三聚氮胺溶液的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V 试样定容体积,单位为毫升(mL); -样品称量质量,单位为克(g). N 6.2.3.2计算结果有效数字 通常情况下计算结果保留三位有效数字;结果在0.1mg/kg1.0mg/kg时,保留两位有效数字 结果小于0.1mg/kg时,保留一位有效数字 6.3平行试验 按以上步骤,对同一样品进行平行试验测定 6.4空白试验 除不称取样品外,均按上述步骤同时完成空白试验 6.5方法检测限 本方法的检测限为0.05mg/kg 回收率 在添加浓度0.30mg/kg一100.0mg/kg范围内回收率在93.0%~103%之间,相对标准偏差小于 10% 精密度 本标准精密度数据按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定,其重复性和再现性值以95%的 置信度计算 重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测量结果的绝对差值不超过重复性限r,样品中三聚胺含量范 围及重复性方程见表3 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性的条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,样品中三聚氮胺的含 量范围及再现性方程见表3.
GB/T22400一2008 表3三聚胺含量范围及重复性和再现性方程 成分 含量范围/mg/kg 重复性限(r 再现性限(R 三聚氮收 0,3~100.0 lgr=一1.260十0.9286lgm lgR=一0.7044十0,7744lgm 注，m表示两次测定结果的算术平均值,单位为mg/kg 7.3重复性与再现性参考值 表4列出了m在不同范围时的下与R值,供参考 表4m在不同范围时的，与R值 m/mg/kg 0.30~0.40 0,400,5o 0,501.00 1.002.00 2.00~2.50 2.50~10,0 0.02 0.02 0.03 0.05 0.10 0.13 0.08 0.10 0,12 0.20 0.34 0.40 10.020.0 20.040.0 40.060.0 60.080.0 80.0100.0 m/mg/kg 0.47 0.89 2.46 3,22 1.69 1.17 4.71 5,88 2.01 3.44 试验报告 试验报告应包括以下内容: a)鉴别样品、实验室和分析日期等资料 遵守本标准规定的程度; D e分析结果及其表示; d)测定中观察到的异常现象; 对分析结果可能有影响而本标准未包括的操作或者任选的操作 e 质量保证 9.1操作人员应具备从事相应实验技术的能力,并符合国家相关规定 9.2仪器及相关计量器具应通过检定或校准,并在有效使用期内 9.3宜采用有证标准物质,若采用自配标样,应使用有证标准物质对自配标样进行验证 4 9. 原料乳样采集和保存应严格执行本标准和国家相关规定,实施全过程质量保证 10 注意事项 10.1如果保留时间或柱压发生明显的变化,应检测离子交换色谱柱的柱效以保证检测结果的可靠性 10.2使用不同的离子交换色谐柱,其保留时间有较大的差异,应对色谱条件进行优化 10.3强阳离子交换色谱的流动相为酸性体系,每天结束实验时应以中性流动相冲洗仪器系统进行维 护保养
GB/T22400一2008 附 录A 资料性附录 三聚氮胺参考色谱图 mAU 12 三三聚佩胶 10 min 图A.1 三聚暂胺标准样品色谱图(浓度5.00mg/kg) mAU 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 三聚银胶 n 图A.2原料乳中添加三聚氮胺的色谱图(浓度4.00mg/Ag