化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的测定液相色谱/串联质谱法

化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的测定液相色谱/串联质谱法

国家标准 GB/T30089一2013 化妆品中氯磺丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉 的测定液相色谱/串联质谱法 Determinationofchorporpamide,carbutamideandtolbutamidein eosmetiesyLC-MS/MSmethod 2013-12-17发布 2014-03-01实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T30089一2013 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009和GB/T20001.4一2001给出的规则起草 本标准由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会(SAC/TC374)归口 本标淮起草单位,国家化妆品质量监督检验中心(北京)北京市海淀区产品质量监督检验所、中检 联盟(北京)质检技术研究院 本标淮主要起草人;郭启雷、杨红梅、史海良、赵丽、刘艳琴,田艳玲
GB/T30089一2013 化妆品中氯磺丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉 的测定液相色谱/串联质谱法 范围 本标准规定了化妆品中氯磺丙脉,氨磺丁脉、甲苯磺丁脉的液相色谱/串联质谱测定方法 本标准适用于水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类及唇膏类化妆品中氯磺丙脉,氨磺丁脉、甲苯磺丁脉的 测定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 原理 水剂类、膏霜类,凝胶类、粉类化妆品用甲醇提取;唇膏类化妆品经四氢吠喃分散,甲醇提取,固相萃 取小柱净化采用高效液相色谱/串联质谱仪测定,外标法定量 试剂与材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4乙精色谱纯 甲醉;色谱纯 42 4.3甲酸;色谱纯 4.4四氢映喃 45 氨水 4.8氯化钠. 47 0.1%甲酸水溶液;准确移取1mL甲酸(4.3)至1000nm容量瓶中,用水定容 4.82%甲酸甲醇溶液;准确移取10ml甲酸(4.3)至500mL容量瓶中,用甲醇(4.2)定容 4.95%氨水甲醇溶液;准确移取25mL氨水(4.5)至500mL容量瓶中,用甲醇(4.2)定容 4.10标准样品;氯磺丙脉,氨磺丁脉、甲苯磺丁脉标准样品,具体信息见表1 表1标准样品信息 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 氧磷丙脉 Chlorpropamide 94-20-2 CHCIN.OS 276.74 氨碱丁腺 CIH7N,OS Carbutamide 339-43-5 271.34 甲苯碱丁脉 Tolbutamide 64-77-7 CHNOS 270.35
GB/T30089一2013 4.11 标准溶液 4.11.1标准储备溶液准确称取0.1g氯碱丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉标准样品(4.10)精确至 0.0001g),分别用甲醉(4.2)配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，4C冰箱保存,有效期6个月 4.11.2混合标准储备溶液;分别准确量取1.00ml氯磺丙脉、氨瞒丁脉、甲苯醋丁脉标准储备溶液 4.11.1)至100mL容量瓶中,用甲醇(4.2)稀释定容,配制成0.01mg/mL的混合标准储备溶液.4C冰 箱保存,有效期1个月 4.11.3混合标准工作溶液:准确量取1.00mL混合标准储备溶液(4.11.2)至100ml容量瓶中,用甲醉 4.2)稀释定容,配制成100ng/ml.的混合标准工作溶液,4C冰箱保存,临用前配制 4.12PAX固相萃取小柱;CleanertPAX阴离子交换柱或性能相当者,60mg/3mL,预先用3ml甲醉 4.2),3mlL5%氨水甲醇溶液(4.9)活化 4.13微孔滤膜;0.22pm,有机相 5 仪器和设备 5.1高效液相色谱/串联质谱仪(LCMSs/MS);配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量分别为0.0001只和0.00001 g 5.3高速离心机离心力不低于600o g 5.4超声波清洗器 5.5涡旋混合器 5.6氮吹仪 分析步骤 6.1样品制备 6.1.1水剂类样品 称取样品10区(精确至0.o01e),加人甲醉(4.2)定容至5.0mL涡旋30s必要时6o0《离心 10min,经0.22am微孔滤膜(4.13)过滤,滤液用液相色谱/串联质谱仪测定 6.1.2膏霜类、凝胶类、粉类样品 称取样品0.5g(精确至0.001g),加人甲醇(4.2)定容至5.0mL,加人氯化钠(4.6)2g,剧烈振荡使 样品分散,涡旋1min,超声15min,6000只离心10min,取上清液经0.22m微孔滤膜(4.13)过滤,滤 液用液相色谱/串联质谱仪测定 6.1.3唇膏类样品 称取样品0.4g(精确至0.001g),加人2ml四氢吠喃(4.4),剧烈振荡使样品分散,涡旋1min,超 声10min,加人5%氨水甲醉溶液(4.9)定容至10.0ml,加人氯化钠(4.6)2g,超声1o min,6000g离 心10min,取5ml上清液流经已预先活化的PAX固相萃取小柱(4.12),待上清液自然流尽后,用3ml. 再加人3mL2%甲酸甲醇溶液(4.8)洗脱,待甲酸 甲醉(4.2)淋洗,用吸球吹出小柱巾残留液体,弃去 甲醇溶液自然流尽后,用吸球吹出小柱中残留液体,收集洗脱液,，缓慢氮气流下吹干,准确吸取！mL 甲 醇(4.2)溶解,经0.22Am微孔滤膜(4.13)过滤,滤液用液相色谱/串联质谱仪测定 6.2标准工作曲线的制备 取相应的空白样品,按照步骤6.1进行处理,用得到的空白样品提取液稀释混合标准工作溶液
GB/T30089一2013 4.11.3),配制所需浓度系列的标准溶液,按浓度从低到高依次经液相色谱/串联质谱仪测定,以定量离 子的峰面积为纵坐标,以标准溶液浓度为横坐标,得标准工作曲线 氯磺丙脉,氨碱丁脉、甲苯磺丁脉的LC-Ms/MS多反应监测质量色谱图参见图A.1 6.3 测定 6.3.1液相色谱参考条件 mm×2.1mm(i.d.),3.5 色谱柱:C色谱柱,150 a 4m,或性能相当者; b流动相:流动相及梯度洗脱程序见表2; c 流浊:0.3ml/min; D 柱温:40C; 进样量:5Al 表2液相色谱梯度洗脱程序 时间 A相:乙晴/% B相:0.1%甲酸水溶液/% min 20 80 40 60 12 40 60 12.1 20 80 6.3.2质谱参考条件 离子源;电喷雾离子源(ESI); a b)扫描方式:正离子扫描; 监测方式:多反应监测(MRM); c D 干燥气:氮气,温度350C,流速10L/min; 雾化器;氮气,压力40pi e 毛细管电压;4000V 保留时间,定性离子对,定量离子对,醉裂电压及碰撞能量见表3 g 表3氯磺丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉的质谱参数 保留时间 碎裂电压 碰撞能量 化合物 定性离子对(m/定量离子对(m/) min 30 272.2/92.1 272.2/74.2" 氨瞒丁脉 6.8 80 10 272.2/74.2 15 277.1/175.0 氯硕丙脉 10.0 277.1/111.0 S0 35 277.1/1l1.0 271.1/155.0 15 90 甲苯碱丁脉 1l 271.1/91.1 271.1/91.1 35 1psi=0.006895MPa
GB/T30089一2013 6.3.3定性确证 每种被测组分选择1个母离子,2个子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时间与标 准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准 溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表4规定的范围,可判定为样品中含有对应 的待测物 表4定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 50 20一50 10一20 <10 相对离子丰度/% 允许的最大偏差/% 士20 士25 士30 士50 6.3.4定量分析 本方法采用外标标准工作曲线法定量测定 标准工作曲线线性回归方程由6.2得到,以样品的峰 面积与标准工作曲线比较定量 待测物的响应值均应在线性范围内 6.4空白实验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行 6.5平行试验 按以上步骤,对同一样品进行平行试验测定 结果计算 样品中氯磺丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉的含量由色谱数据处理软件获得或按式(1)计算 ×V×k×1000 X X=一 ×1000 式中; 样晶中领碱丙脉.氨碱丁腺.甲举破丁腺的含量,单位为微克每千克(we/ke) 样品中氯磺丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉峰面积对应的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 样品定容体积,单位为毫升(mL); -样品的质量,单位为克(g); nn -乘积因子,对于水剂类化妆品、膏霜、凝胶、粉类化妆品,k=l;对于唇膏类化妆品,k=2. 注计算结果需扣除空白值 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后一位 检出限与定量限 水剂类化妆品,唇脊类化妆品中躯横丙腺,复横丁脉,甲笨膜丁暴的检出限为30e/ke.定量限为 10.04g/kg;膏霜类、凝胶类、粉类化妆品中氯瞒丙脉、氨磺丁脉、甲苯磺丁脉的检出限为6.04g/kg,定 量限为20.04g/kg 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%
GB/T30089?2013 ?A ?? ??????Lc-\Ms/NS???? ???????LC-MS/MS?????A.1 10TCMRM>20b-.d 12 2|3 +MRM272.20O1->74.20020so20pb-1.d ? X10' 6.801 23 12 +MRM272.01->.996I20-I.a x10 6.796 23 34 1+MRM277.1D1->Tm.O0000p-1.a ? 9.93134 2l3 x10MR277.1001->175.00000s020p-I.d 834 239.928 2 X10+MRM271.10001->91.09961s020ppb-1.d ??? 3411.133 +MRM271.10001->155.00000s020Oppb-l.d X10 12 2i3 3411.137 CountsVs.AcquisitionTime(min) ?A.1???????LC-MIs/NMS????