GB/T32122-2015
牙膏中12种硝基咪唑类药物的测定高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法
Determinationof12-nitromidazolesintoothpaste—HPLCandHPLC-MS/MS
- 中国标准分类号（CCS）Y43
- 国际标准分类号（ICS）71.100.40
- 实施日期2016-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数13页
- 文件大小403.72KB
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牙膏中12种硝基咪唑类药物的测定高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法
国家标准 GB/T32122一2015 牙膏中12种硝基咪陛类药物的测定 高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法 Determinationof12nitroimidazolesintoothpaste- HPLCandHPLC-MS/MS 2015-10-09发布 2016-05-01实施 中毕人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管厘委员会国家标准
GB/T32122一2015 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
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本标准由轻工业联合会提出
本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SAC/Tc492/SC1)归口
本标准起草单位;大连市产品质量监督检验所国家日化产品质量监督检验中心),大连标准检测技 术研究中心 本标准主要起草人;毛希琴,郑顺利,任国杰,张国翠,李春玲、顾鑫荣,李鹏,董广斌
GB/T32122一2015 引 言 本标准规定的12种硝基咪陛类药物,是我国《口腔清洁护理产品用原料规范》中规定的禁用物质
不得作为牙膏生产原料即组分添加到牙膏中
如果技术上无法避免上述禁用物质作为杂质带人牙膏 时,则牙膏成品应符合《口腔清洁护理产品用原料规范》要求,即在正常及合理的、可预见的使用条件下 不得对人体健康产生危害
目前我国尚未规定这些物质作为杂质存在的限量值
本标准的制定,仅对牙膏中测定这些物质提 供检测方法
I
GB/T32122一2015 牙膏中12种硝基咪陛类药物的测定 高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法 范围 本标准规定了牙膏中12种硝基咪幽类药物如表1所示)测定的高效液相色谱法及液相色谱串联 质谱法
本标准适用于牙膏中上述12种硝基咪幽类药物的测定
高效液相色谱法方法检出限(对所有目标物)34g/g，定量下限(对所有目标物);:l04g/g;液相色 谱串联质谱法检出限(对所有目标物):0.3g/g;定量下限(对所有目标物14g/g
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用液相色谱法或液相色谱串联质谱法测定标准曲线外 标法定量
经液相色谱测试,结果为阳性的样品需经液相色谱串联质谱法进行确证 标准物质与试剂 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682的实验室用一级水
乙睛色谱纯(配制色谱流动相使用 4.1 4.2甲酸;色谱纯(配制色谱流动相使用 4.3甲醇 4.4甲酸 4.5标准物质的中英文名称,cAs号、分子式,分子结构式及相对分子质量 见表1
GB/T32122一2015 表1标准物质中英文名称,cAs号、分子式、分子结构式、相对分子质量 中文 序号 英文名称 CAS 分子式 相对分子质量 结构式 名称 4-硝基 4-nitroimidazole 3034-38-6 CH,N,O. 113.08 咪陛 2-甲基 2-methy-5- -5-硝基 88054-22-2 CHN,O. 127.10 nitroimidazole 咪 甲硝哗 metronidazole 443-48-1 CHN,O 171.16 Ho 二甲硝 dimetridazole 551-92-8 CH,N,O. 141.13 咪陛 洛硝哒哗 ronidazole 7681-76-7 CHN,O 200,15 OH CH 塞克硝噜 secnidazole 3366-95-8 CHN,O 185.18 CH l6-硝基苯 6-nitrobenzimidazole 94-52-0 CH,N,O. 163.14 井眯略 1甲基 -5-氯 1-methyl5-ehloro 4897-25-0 CHCIN,O 161.55 -4硝基 4-nitroimmidazole 咪哗 CH
替硝哗 tinidazole 19387-91-8 CHN.OS 247.28
GB/T32122一2015 表1续 中文 序号 英文名称 CAs 分子式 相对分子质量 结构式 名称 oH 0 奥硝陛 c,HCIN,o ornidazole 16773-42-5 219.63 CH c,HN,O. 169.18 11 异丙硝哗 ipronidazole 14885-29-1 苯酰甲 12 13182-89-3 CHN,O 275.26 benzoylmetron ronmildazole 硝哗 4.6乙睛 4.7 氨水(25% 4.8丁基胫基茴香醒(BA 4.9乙二胺四乙酸EDTA)二钠 4.10氧化钠 4.11乙睛含抗氧剂 每500mL乙睛添加100mgBHA(4.8)
4.123%甲酸水溶液 15ml甲酸(4.4)加水定容至500ml
4.132%氨水氨化甲醇含稳定剂 10ml.氨水(4.7)加甲醇(4.3)定容至500mL,加人0.0037gEDTA二钠(4.9)超声溶解
4.143%甲酸水溶液(含稳定剂 每500mL3%甲酸水溶液(4.12)中添加0.0037gEDTA二钠(4.9),超声溶解
4.15饱和盐水溶液 每100ml水中加人约40g的NaC!固体(4.1o),充分震荡溶解,容器底部可见不溶的NaCl晶体， 上层溶液即为饱和盐水溶液
4.16Strata-x-c固相萃取小柱或相当者;200mg,3ml 使用前,依次用3mL甲醇(4.3)和3mL3%甲酸水(4.12)活化
GB/T32122一2015 4.17标准贮备液(1mg/mL) 准确称取各标准物质10.0mg,用甲醇溶解定容至10.0mL
配置浓度为1mg/mL的标准储备溶济 液,于冰箱冷藏保存
保存期3个月
4.18标准工作溶液A 临用时将标准储备液(4.17)用甲醉稀释成0.24g/mL,lg/mL.54g/mL,204g/mL,504g/mL 系列浓度的标准工作溶液,需现用现配 4.19标准工作溶液B 临用时将标准储备液(4.17)用甲醉稀释成104g/L.,204g/L504g/L.1004g/L,2004g/儿系列浓 度的标准工作溶液,需现用现配
仪器 5.1高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(高效液相色谱法)
5.2高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪(EsI源)(高效液相色谱串联质谱法)
5.3分析天平;感量0.1mg,0.01mg 5.4氨吹仪
5.5漩涡混合器
5.6超声波清洗器
5.7离心机;转速不低于5000r/min,容量10ml
5.8移液枪或移液器
试样制备 牙膏样品挤出约2cm,弃去,称取0.2g(精确至0.1mg)牙膏样品于10nml具塞离心管中,加人3ml 饱和盐水溶液(4.15),涡旋并超声15min,至样品完全分散,再向离心管中加人3mL含抗氧剂的乙胯 (4.11),涡旋1nmin2min,充分混匀提取,5000r/min离心10min(若分层不理想可适当延长离心时间或 用采用更高转速),将上 层 乙 -晴尽量移出并转人10mL
刻度试管中
向余下饱和盐水中再加人3ml乙肪 (4.11)重复提取一次
合并两次的乙睛提取溶液,混匀并定容至6ml
移取3ml乙晴提取液于5ml试 管中,氮吹挥干乙睛后向试管中加人3mL.3%甲酸水溶液(4.12),涡旋并超声10min,确保瓶内残留物全 部溶解后,将所有溶液转人 t-X-C固相萃取小柱(4.16),待上样溶液全部流出后,用3m3%甲酸水 Strara 溶液(4.12)淋洗柱床,最后用4mL.2%氨水氨化甲醉(含稳定剂)(4.13)洗脱目标物,l0ml刻度试管收集 所有洗脱溶液,待所有洗脱溶液流出后,用3%甲酸水溶液(含稳定剂(4.l4),中和洗脱溶液的碱性并定容 至5ml混匀待测
测定 液相色谱法 7.1 7.1.1液相色谱条件 液相色谱条件为:
GB/T32122一2015 a)色谱柱:poroshel120EC-C18(4.6X100mm,i.d.,2.7m)或相当者 b) 流动相:A水(含0.1%甲酸),B乙睛(含0.1%甲酸). e)流速:l.0mL/min;柱温:30C;进样量:5L 检测波长;320nm(参比波长390nm); d e 液相色谱分离条件(见表2)
表2液相色谱分离条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 89 86 14 10 20 80 14 75 25 14.l 100 1 100 18 89 1l 89 21 11 7.1.2定性分析 将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图 进行比较,若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰,并且其扣除背景后的紫 外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致,则可判断样品中存在该物质
12种硝基咪陛类药物标 准物质的高效液相色谱分离谱图见附录" 7.1.3定量测定 移取系列标准溶液A(4.18),注人高效液相色谱仪中进行测定,以色谱峰的峰面积对目标化合物的 浓度制作标准曲线
样品溶液中目标物的含量,用标准曲线外标法确定
牙膏样品中目标物的含量x 按式(1)进行计算,结果以4g/g表示 c×V X 1 式中: -从标准曲线中计算出的样品游液中目标物的质量浓度,单位为微克每毫开(g/mL) 按稀释倍数折算的被测样液总体积,单位为毫升(mL) 称取样品的质量,单位为克(g) 计算结果至少保留3位有效数字
7.1.4平行试验 按照所建立的方法操作,对同一样品独立进行测定,获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过 算数平均值的10% 7.1.5回收率和精密度 本方法在108/尽一1000"g/g添加水平范围内的平均提取回收率为85%110%相对标准偏
GB/T32122一2015 差均小于10%
7.2液相色谱串联质谱法 7.2.1液相色谱条件 液相色谱条件为 a)色谱柱;poroshel120ECC18(4.6×50mm,i.d.,2.74m)或相当者 b 流动相;A水(含0.1%甲酸);B乙睛含0.1%甲酸); e流速:0.4mL/min;柱温;30C d) 进样量;2AL 液相色谱分离条件见表3. e 表3液相色谱分离条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 1l 89 87 13 6.1 8o 20 10 25 75 12 10 90 11 12.1 89 l 15 89 7.2.2质谱参考条件 质谱参考条件为 a)电离方式;电喷雾电离,正离子模式,ESI(十; b) 雾化气;氮气,35Psi e)干燥气;氮气,流速10L/min,温度:350C d 碰撞气:氮气; 毛细管电压:3500V e) f 检测方式:多反应监测(MRM); g)其他质谱条件见表4
表412种硝基咪幽类药物的质谱采集参数 子离子2 子离子1 序号 药物名称 母离子 锥孔电压/V 碰撞能量eV 碰撞能量eV) 4-硝基咪陛 114.2 68.1(15) 84.0(15 14o 128,0 81.9(15) 111.0(15 2-甲-5-硝基咪幽 140 81.9(25 128.2(10 甲硝哗 172.1 130 二甲硝咪幽 142.1 81.0(20 96.1(20) 140
GB/T32122一2015 表4(续 子岗子1 子离子2" 序号 药物名称 母离子 锥孔电压/V 碰撞能量eV 碰撞能量eV 洛硝哒陛 201.2 40.0(20) 55,0(25 14o 186.o 128.0(15 塞克硝哗 82.0(20 140 6-硝基苯并咪哗 64.2 118.0(25) 90.9(45) 140 1-甲基-5-氯-4-硝咪陛 162.0 121.0(15) 144.8(15 14o 替硝陛 248.1 121.0(15) 127.9(20 18o 10 奥硝哗 220.1 28.0(15) 82.0(32 140 1 异丙硝陛 170.2 109.1(20 124,1(20) 140 苯阱甲硝哗 12 140 275.9 149,0(20 105,1(35) 7.2.3定性分析 在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定,如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时 间与某标准物质色谱峰的保留时间一致,所选择的2对监测离子对的质荷比也一致,而且样品溶液中监 测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对的相对丰度比的偏差不超过表5规定范围， 则可判定样品中存在相应的目标成分
12种硝基咪类药物标准物质的总离子流质谱图及提取离子 定量)质谱图参见附录B. 表5定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 -20~50 >1020 10 允许的相对偏差/% 士20 士25 士30 士50 7.2.4定量测定 移取系列标准溶液B(4.19),注人液相色谱串联质谱仪中进行测定,以色谱蜂的峰面积对目标化合 物的浓度制作标准曲线
样品溶液中目标物的含量,用标准曲线外标法确定
牙膏样品中目标物的含 量X,按式2进行计算,结果以4g/g表示 c×V X一 2 -×10" n 式中: 从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度,单位为微克每升(g/L); 按稀释倍数折算的被测样液总体积,单位为毫升(mL); 称取样品的质量,单位为克(g) 1 计算结果至少保留3位有效数字
对样品溶液中目标物的含量高于500g/L的样品,为提高定量的准确性,建议减少进样量或适当 稀释后进样
GB/T32122一2015 7.2.5平行试验 按照所建立的方法操作,对同一样品独立进行测定,获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过 算数平均值的10%
7.2.6回收率和精密度 参照GB/T6379.1和GB/T6379.2的方法要求,本方法在14g/g~1004g/g添加水平范围内的平 均提取回收率为85%110%,相对标准偏差均小于10%
GB/T32122?2015 ?A ?? 2??????? 12 0 10 14 16 15 12 20 'minm ?: 4?; 6-; 2-5- 1-?-5--4-; ; ; 10 ; ; ?; ; 1l ? ?A.112???????
GB/T32122一2015 B 附 录 资料性附录 12种硝基咪陛类药物标准物质的总离子流质谱图及提取离子(定量)质谱图 TIC 10 MRM(14.0>67.9 4硝基咪出 MRM(128.1>81.9 2-甲5-硝基咪胜 MRM(172.2>81.9 甲硝陛 二甲硝性 fMRM(142.1>96.1) 洛硝哒咩 +MRM(201.0>55.o 塞克硝陛 t\MRM(186.0>128.0) 6-硝基苯并咪畔 +MRM(164.2>118.o) 1-甲基-5-抓-4硝咪所 MRM(162.0>116.1) 替硝隆 MRM(248.2>121.0) 奥硝哗 MRM(220.2>128.o) 异丙硝呻 MRM70.2>124. 苯佚甲硝陛 MRM275.9>149.0) 1C /min 图B.112种硝基咪陛类药物标准物质的总离子流质谱图及提取离子(定量)质谱图 l0
牙膏中12种硝基咪唑类药物的测定高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法GB/T32122-2015
在牙膏中添加抗菌剂已经成为了一种常见的做法，硝基咪唑类药物是其中的一种。然而，如果过量使用会对人体造成不良影响，因此需要对其含量进行检测。
目前，常用的检测方法有高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法。高效液相色谱法可以快速、准确、灵敏地检测药物的含量，而液相色谱串联质谱法则可以更加精确地鉴别不同的硝基咪唑类药物。
本文介绍了一种基于GB/T32122-2015标准的测定方法。首先使用高效液相色谱法对样品进行分离，然后利用液相色谱串联质谱法对药物进行鉴定，并计算出其含量。
这种方法具有简便、准确、灵敏的优点，可以有效地保证牙膏中硝基咪唑类药物的数量控制。
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