GB/T38479-2021
壳聚糖含量测定高效液相色谱法
Determinationofchitosancontent—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）A21
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2022-07-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
- 文件大小442.10KB
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壳聚糖含量测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T38479一2021 壳聚糖含量测定高效液相色谱法 一Highperformaneeliaquidehromatography Determinationofchit0Sancontent 2021-12-31发布 2022-07-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/38479一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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本文件由标准化研究院提出并归口 本文件起草单位;科学院烟台海岸带研究所、科学院海洋研究所,山东陆海蓝圣生物科技 股份有限公司、山东卫康生物医药科技有限公司、青岛科技大学、标准化研究院、科学院过程工 程研究所
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GB/38479一2021 壳聚糖含量测定高效液相色谱法 范围 本文件规定了用高效液相色谱法测定壳聚糖含量的方法
本文件适用于壳聚糖含量的测定
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3.1 壳聚糖chitosam 甲壳素脱去N-乙酰基55%以上的物质
原理 壳聚糖乙酰化制备成甲壳素后进行酸水解,高效液相色谱法检测水解液中氨基葡萄糖盐酸盐的浓 度,外标法定量计算得到样品中壳聚糖的含量
试剂或材料 5.1水 GB/T6682规定的一级水
5.2乙睛 色谱纯 5.3盐酸 质量分数36%38%.
5.4氨气 纯度>99.9%
5.5氨基葡萄糖盐酸盐 纯度>99%.
GB/T38479一2021 5.6乙睛-水溶液 量取800mL乙晴和200mL水,混合均匀 5.7氨基葡萄糖盐酸盐标准品溶液 称取氨基葡萄糖盐酸盐标准品1.0g加水溶解并定容至1o0ml容量瓶中，配制成质量浓度为 10 mg/mL的储备溶液
分别量取储备溶液适量,稀释定容至10ml容量瓶中,得到一系列质量浓度为 1.0mg/ml、l.5mg/ml2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0" /ml、3.5mg/ml的氨基萄糖盐酸盐标准 nmg/ 品溶液
仪器设备 6 6.1高效液相色谐仪;配有蒸发光散射检测器
6.2色谱柱氨基柱(250mm×4.6mm,5um) 6.3有机相微孔滤膜;0.454mm
6.4电子分析天平;感量为0.1nmg,0.01段
6.5电热恒温鼓风干燥箱
6.6粉碎机 6.70.3mm标准检验筛
6.8恒温磁力搅排器
6.9集热式磁力恒温搅拌器 6.10旋转蒸发仪
测定步骤 7.1样品预处理 称取壳聚糖样品1kg,用粉碎机粉碎,过0.3mm标准检验筛,“四分法”采样至50g,置于60C电 热恒温鼓风干燥箱中干燥至恒重
7.2样品中氨基葡萄糖的含量(w,)测定 称取壳聚糖样品1.0g,加10ml.水溶解,过滤,滤液中滴加0.1ml12mol/几盐酸,过0.45Mm有 机相微孔滤膜,进样检测
样品中的氨基葡萄糖含量按式(1)计算 pxVXM ×100 w1= m1×M， 式中 样品中的氨基葡萄糖含量,%; w 由标准曲线查得的氨基葡萄糖盐酸盐的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL); 溶液体积,单位为毫升mL); M -氨基葡萄糖的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol) -样品质量,单位为毫克(mg); m M -氨基葡萄糖盐酸盐的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/molD) 测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留3位有效数字
GB/38479一2021 7.3酸水解溶液制备 7.3.1 乙酰化处理 壳聚糖样品1.0g,加人100ml甲醉、1.5ml乙酸酣,室温搅拌反应24h,反应结束后,用旋转蒸发 仪减压浓缩回收甲醇,浓缩液干燥得壳聚糖乙酰化样品
7.3.2酸水解 称取上述(7.3.1)壳聚糖乙酰化样品50mg,加人3.0ml盐酸和0.5mL.水,置于集热式磁力恒温搅 拌器中梯度升温酸水解,55反应1.5h,75C反应1.5h100C反应4h
反应结束后,去除剩余盐酸 加水溶解,得酸水解溶液
7.4测定 7.4.1 色谱条件 色谱条件如下 检测器;蒸发光散射检测器(检测条件;雾化温度30C,蒸发温度60.C，氨气流速1.5L/min); aa b 色谱柱;氨基柱250mm×4.6nmm,54m); 流动相:乙睛-水(80:20,体积分数): c d)流速:l.0mL/min; 进样量;20L. e f 柱温:30C
色谱测定 7.4.2 分别取氨基葡萄糖盐酸盐标准品溶液、酸水解溶液适量,过0.45m有机相微孔滤膜,按照色谱分 析条件,进样测定
氨基葡萄糖盐酸盐标准品溶液的液相色谱图参见附录A
结果计算 壳聚糖含量按式(2)计算 xVxMa 2 ×100 m又M
式中: 壳聚糖含量,%; u -由标准曲线查得的氨基葡萄糖盐酸盐的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL); -酸水解溶液体积,单位为毫升(mL); M 甲壳素的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol); -壳聚糖乙酰化样品质量,单位为毫克(mg); mn M
氨基葡萄糖盐酸盐的摩尔质量,单位为克每摩尔g/mol); 样品中的氨基葡萄糖含量,%
Z 测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留3位有效数字
重复性 重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的1.5%
GB/T38479一2021 0检出限和定量限 本方法检出限为0.30mg/mL,定量限为0.45mg/mL
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壳聚糖含量测定高效液相色谱法GB/T38479-2021详解
壳聚糖作为一种天然多糖，具有广泛的应用前景。然而，在实际应用中，壳聚糖的质量控制成为了一个难点。因此，如何准确地测定壳聚糖的含量就成为了一个重要问题。
GB/T38479-2021《壳聚糖含量测定 高效液相色谱法》是国家标准化管理委员会发布的一项标准，将高效液相色谱技术应用于壳聚糖含量测定中，具有检测速度快、准确可靠等优点。
该标准规定了壳聚糖含量测定的样品准备、仪器设备、色谱条件、峰面积计算等方面的要求。其中，样品准备需注意去除杂质、选择合适的溶剂进行处理；仪器设备需要满足一定的分辨率和检测灵敏度；色谱条件包括流动相的配比、流速、柱温等，需要严格控制；峰面积计算则需要根据实际情况进行修正和换算。
在使用该标准进行壳聚糖含量测定时，需要注意以下几点：
- 样品准备：应尽量去除杂质，避免对检测结果产生影响。
- 仪器设备：应选用分辨率和检测灵敏度较高的高效液相色谱仪。
- 色谱条件：应根据实际情况进行调整，以达到最佳的分离效果。
- 峰面积计算：应注意修正和换算，确保结果的准确性。
总之，GB/T38479-2021《壳聚糖含量测定 高效液相色谱法》作为一项国家标准，为壳聚糖含量测定提供了规范和标准化的方法，有助于提高壳聚糖的质量控制水平，推动其在各个领域的应用。
