牛奶和奶粉中左旋咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法

牛奶和奶粉中左旋咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22994一2008 牛奶和奶粉中左旋咪陛残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofleamisoleresiduesinmilkamdmilkpowder LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22994一2008 前 言 本标准附录A,附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局、青海出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:薄海波、雏丽丽、贾光群、曹彦忠、赵青庞国芳
GB/T22994一2008 牛奶和奶粉中左旋咪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛奶和奶粉中左旋咪陛残留量液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于液态奶包括原料奶,纯牛奶、脱脂牛奶)和奶粉(包括纯奶粉,脱脂奶粉和婴幼儿配方 奶粉)中左旋咪陛(levamisole)残留量的测定 本标准牛奶中左旋咪陛检出限为0.44g/kg;奶粉中左旋咪陛检出限为3.24g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第1部分;总则与定义(GB/T6379.1 2004,ISo5725-1l:;1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.22004,IsO5725-2:1994,IDT GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-2008,IS03696;1987,MoD) 原理 在碱性环境下用乙酸乙酯提取试样中的左旋咪幽残留,用稀盐酸将提取液中左旋咪陛转化为盐酸 左旋咪哗并反提到盐酸层,强阳离子交换固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯 水;GB/T6682，一级 4.2乙酸乙酯:色谱纯 43乙睛;色谱纯 4.4甲醇色谱纯 4.5氢氧化纳 4.6浓盐酸 4.7氨水 4.8氯化钠 49无水硫酸钠用前在650C灼烧4h,置于干燥器中冷却后备用 4.10甲酸;优级纯 4.110.1%甲酸溶液;取1mL甲酸,用水定容至1000mL 当天配制 4.120.2mol/儿盐酸溶液;取18ml盐酸(4.6),用水定容至1000" ml 4.13l0mol/儿氢氧化钠溶液;称取40g氢氧化钠(4.5),用水溶解并定容至100ml 4.14氨水-甲醇溶液(1十3):量取50mL氨水(4.7)与150mL甲醇(4.4)混合,摇匀
GB/T22994一2008 evamisole 15盐酸左旋咪陛标准品(lev 4 hydroclloride,cAs.,16595:80-5)纯度>98% .16标准储备溶液;准确称取适量的标准品,用甲醉(4.4)溶解、转移至50mL棕色容量瓶中并定容 至刻度 该溶液浓度为1mg/ml 储备液贮存在一18C冰柜中,有效期为半年 4.17标准中间溶液;吸取1.00ml标准储备溶液(4.16),移人100ml棕色容量瓶,用水定容,该溶液 浓度为10ug/ml 0C一4C冰箱保存 标准工作溶液;根据需要吸取适量标准中间游液(4.1),用流动相稀释至所需浓度,使用前配制 4.18 4.19强阳离子交换固相萃取柱或相当者;3ml,500mg 使用前依次用甲醇3ml,水3ml.和0.2nmol/ml. 盐酸1ml活化,保持柱体湿润 4.20滤膜:0.2Am. 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱联用仪;配有电喷雾离子源(EsI. 5.2固相萃取净化装置 5.3分析天平;感量0.1 mg,0.01g 5.4旋涡混匀器 55超声彼清洗器 5.6离心机;带有50ml螺口聚丙婚离心管 5.7移液器，lmL.2ml. 5.8氮气吹干仪 5. g 样品瓶:2ml 试样制备与保存 试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分混匀,均分成两份,分别装人洁净容器内 密封后作 为试样,标明标记 在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 6.2试样的保存 将试样于4C保存 测定步骤 7.1提取 7.1.1牛奶样品 称取10尽混匀的试样(精确至Q.0lg)于50ml聚丙烯离心管中,加人10molml氢氧化纳0.1ml 氯化钠(4.8)约5只和乙酸乙酯(4.2)20nml,涡旋混匀1min,振荡10min,以4000r/min离心10min. 取上层乙酸乙酯10mL于另一个50ml聚丙烯离心管中,加0.2mol/L盐酸20mL,振荡10min,以 2000r/min离心5min 取下层盐酸溶液10mL,待净化 7.1.2奶粉样品 称取12.5只奶粉于烧杯中,加适量35C一50C水将其溶解,待冷却至室温后,用水定容至100ml. 充分混匀 量取10mL溶液于50ml聚丙烯离心管中,按7.1.1步骤提取 7.2净化 将7.1所得的提取液10mL加载到sCx小柱,依次用水3mL,0.2mol/儿盐酸1mL和甲醉3mL 淋洗用氨水-甲醉溶液(4.14)4.0ml洗脱 用氮气吹干仪将洗脱液吹干,用流动相定容至1ml,过 0.2Am滤膜 供液相色谱-串联质谱测定
GB/T22994一2008 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 a)色谱柱;BEHCw,1.7m,50mm×2.1mm(内径)或相当者; b) 流动相:乙睛-0.1%甲酸溶液(3+17); e)流速0.25mL/min 柱温:35C; d e)进样量:5.0L 7.3.2质谱参考条件 质谱参考条件如下 a)电离模式;EsI十; b) 检测方式;多反应监测(MRM). 毛细管电压;2.5kV:; 离子源温度;l10C; D 去溶剂气温度380C; 去溶剂气(氮气)流量:600L/h 锥孔气(氮气)流量(N);40L/h; g h)碰撞气(缸气)流量:0.1L/h; 定性离子对定量离子对和碰撞能量等参数见表1 表1定量离子对、定性离子对和碰撞能量等参数 定性离子对定量离子对碰撞能量 驻留时间 维孔电压 化合物中文名称 化合物英文名称 /: m/: mS 205/92 38 300 40 左旋咪哗 levamisole 205/92 205/179 20 300 40 测定 定性测定 样品溶液按照液相色谱-串联质谱分析条件进行测定时,如果检出的色谱峰保留时间与标准溶液中 左旋咪幽的保留时间偏差在士2.5%之内,在扣除背景后的样品质谱图中,所选择的两对定性对均出现、 而且离子对丰度比与浓度接近的标准溶液谱图中离子相对丰度比偏差不超过规定的范围(见表2),则 可以判断样品中存在左旋咪幽 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 20K50 K<1o 相对离子丰度K 士2o 士25 士30 士50 允许最大偏差 定量测定 用混合标准工作溶液(4.18)进样,以工作溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线 待测样液等体积进样测定 用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中左旋咪陛的响应值应在检测 的线性范围内 在上述液相色谐-串联质谱分析条件下,左旋咪陛的参考保留时间约为1.2" 左旋 m1n 咪陛标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中图A.l 左旋咪陛的添加浓度和回收率实验数 据参见附录B中的表B.1 7.5平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验测定
GB/T22994一2008 7.6空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行测定 结果计算 左旋咪陛残留量的测定按式(1)计算 000 c×Y X= 丽入I0w 式中: 试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(4g/kg); -从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL) -样品溶液定容体积,单位为毫升(mL) 样品溶液所代表试样的质量,单位为克(g) N 计算结果应扣除空白值 精密度 9.1一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值 是以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,试样中左旋咪呸添 加浓度范围及重复性方程见表3 表3左旋咪陛含量范围及重复性和再现性方程 单位为微克每千克 添加浓度范围 重复性限" 再现性限R 化合物名称 0.420 左旋咪哗 lgr=1.1339lgm-0.5680 lgR=1.5791lgm-0.8882 3.2~16o 注:m为两次测定结果的平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中左旋咪幽添 加浓度范围及再现性方程见表3
GB/T22994一2008 附 录A 资料性附录 标准物质多反应监测(MRN)色谱图 左旋眯哗标准物质多反应监测(MRM)色谱图.见图A.1 .10 100% 响 1.00 /mim 图A.1左旋咪陛标准物质多反应监测(MIRM)色谱图
GB/T22994一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 左旋咪幽的添加浓度和平均回收率试验数据,见表B.1 表B.1左旋咪陛的添加浓度和平均回收率试验数据 样品基质 添加浓度/ug/kg 平均回收率/% 2.0 78.2 10 80.5 牛奶 20 86.0 1o0 89.1 87.3 5.0 10 83.5 奶粉 20 88.5 100 93.4