食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验酶联免疫法

食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验酶联免疫法

国家标准 GB/T22429一2008 食品中沙门氏菌、 肠出血性大肠埃希氏菌O157及 单核细胞增生李斯特氏菌的 快速筛选检验酶联免疫法 RapidsereeningforSalmonella. Escheriehiacolio157amdL.isteriamonoeytogenesinfoudls- Enzyme-linkedimmun0assaymmethod 2008-10-19发布 2009-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22429一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口 本标准起草单位;杭州市质量技术监督检测院、上海出人境检验检疫局、上海食品 药品检验所 本标准主要起草人:肖海龙、顾鸣、芮褪、韩伟、徐伟东、鲍英、王颖
GB/T22429一2008 食品中沙门氏菌、 肠出血性大肠埃希氏菌O157及 单核细胞增生李斯特氏菌的 快速筛选检验酶联免疫法 范围 本标准规定了食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特氏菌的酶联 免疫法的检验步猴和判断原则. 本标准适用于各种食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌o157及单核细胞增生李斯特氏菌的 定性检验 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验 GB/T4789.6食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验 GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法,培养基和试剂 (GB/T4789.30食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 方法提要 样品作增菌处理,增菌液经加热处理后移人包被特异性抗体(一抗)的固相容器内,使目标菌与一抗 结合,洗去未结合的其他成分;加人特异性酶标抗体(二抗),再次洗去未结合的其他成分;加人特定底物 与之反应,生成荧光化合物或有色化合物,通过检测荧光强度或吸光度,与参照值比较,得出检验结果 设备和材料 4.1酶联免疫分析仪(VIDAs仪或类似产品'). 4.2冰箱:2C8C 4.3恒温培养箱30C土1C,30C士1C,42C士1C 均质器 4.5电子天平，量程0g一500g.感量0.1只 旋涡混合器 恒温水浴锅 灭菌设备 4 .8 培养基,试剂和试剂盒 5 缓冲蛋白陈水(BP):按GB/T4789.28一2003中4.12的规定配制 1 VIDAS仪是由法国梅里埃公司提供的产品的商品名 给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对 该产品的认可 如果其他产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品
GB/T22429一2008 氯化镁孔雀绿增菌液(MM):按GB/T4789.28一2003中4.13的规定配制 5 2 5 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB):按GB/T4789.28一2003中4.l4的规定配制 5.4亚砸酸盐胱氨酸增菌液(sSC):按GB/T4789.28一2003中4.16的规定配制 5.5改良肠道菌新生霉素增菌液(mEC十n);制法参见第A.1章 5.6 FraserI I增菌液;制法参见A.2.2.5 5.7 FraserI增菌液:制法参见A.2.2.6 5.8盐酸叩陡黄裕液;制法参见A.2.2.1 5.9茶唁酮酸钠盐溶液:制法参见A.2.2.2 . .10沙门氏菌酶联免疫试剂盒 肠出血性大肠埃希氏菌O157酶联免疫试剂盒 单核细胞增生李斯特氏菌酶联免疫试剂盒 检验 沙门氏菌的检验 前增菌和增菌;按GBy/T4789.4中的规定处理 6.1.2增菌后处理,移取lmL增菌液到灭菌小试管中,于沸水中加热15min 剩余的增菌液于4c 保存,以便用于阳性确认 C一30C的环境中放置30min 取沙门氏菌的脖联免疫试剂盒于15c 6.1.3 取适量加热处理后的增菌液到试剂盒测试孔中,通过自动或手动操作,经过酶联免疫反应过程 6 后,检测反应强度(荧光强度或吸光度),与参照值比较,得出检验结果 注详细操作需根据所用仪器及试剂盒的说明进行 肠出血性大肠埃希氏菌o157的检验 6 增菌;无菌操作取25g(ml)样品到均质袋中,并向其中加人225ml mEC十n,充分均质,于 6. 增菌后处理;按6.1.2给出的步骤处理 6 取肠出血性大肠埃希氏菌O157的酶联免疫试剂盒,于15C30C的环境中放置30 min 6 检验步骤按6.1.4给出的步骤处理 单核细胞增生李斯特氏菌的检验 前增菌:无菌操作取25g(mL)样品到均质袋中,并向其中加人225mLFraserI增菌液,充分均 质,于30 培养24h士1h 增菌;移取1mlFraserI增菌液(6.3.1)到9mLFraser增菌液中,于30c士1C培养 h 增菌后处理;按6.1.2给出的步骤处理 6.3.4取单核细胞增生李斯特氏菌的酶联免疫试剂盒,于15c~30C的环境中放置30min. 检验步骤按6.1.4给出的步骤处理 6.3.5 试剂盒控制 7.1选用新批号试剂盒时,应验证试剂盒的质量指标;使用时应严格按照试剂盒的要求设立试验对照 7.2选用试剂盒检验不同目标菌期间,应不定期选用相应的可溯源标准菌株进行过程控制 结果报告 检验结果为阴性时,报告为未检出 检验结果为阳性时,应按GB/T4789 4.GB/T4789.6 GB/T4789.30或其他标准进行确证
GB/T22429?2008 ?A ?? A.1ù?mC?n) A.1.1? ? 20.0g ? 3 1. 12g 5. 0g ? 4. .0g ? 1.5g ? 5.0g 1000ml ? A.1.2? ??УpH6.9?1,?121C?15min,??, ??ù?,???20mg/L Fraser? A.2.1? ?? 5.0g ?? 5.0g 5.0 ? g ? 5.0g 20.0g 2.0g 1.35 g ? 1.0g 3.0g ?? 1000ml A.2.2? ?50C??г?,?pH7.0~7.4,?,121C15min A.2.2.1?? ?? 25mg ? 0mL ?,??,??档 A.2.2.2?? 20 ?? mg 10mL 0.05mol/L? ?,?? A .2.2.30.05mol/L? 0.1 g
GB/T22429?2008 50 ? ml ?,?? A.2.2.4? 0.5g 10mL ?? ?,?? A.2.2.5FraserI? 1000mLFraser?(A.2.2)м 5mL ? 5 mL ?? 10mL ? A.2.2.6FraserI? 1000mlFraser?(A.2.2)м 10mL ?? 10ml ??? ??10ml?