GB/T33309-2016
化妆品中维生素B6（吡哆素、盐酸吡哆素、吡哆素脂肪酸酯及吡哆醛5-磷酸酯）的测定高效液相色谱法
DeterminationofvitaminB6(pyridoxine,pyridoxinehydrochloride,pyridoxinefattyacidestersandpyridoxal5-phosphate)incosmetics—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）Y42
- 国际标准分类号（ICS）71.100.70
- 实施日期2017-07-01
- 文件格式PDF
- 文本页数9页
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化妆品中维生素B6（吡哆素、盐酸吡哆素、吡哆素脂肪酸酯及吡哆醛5-磷酸酯）的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T3330g一2016 化妆品中维生素Bg毗哆素、盐酸吮哆素、 毗哆素脂肪酸酯及吮哆醛5-磷酸酯 的测定高效液相色谱法 DeterminationofvitaminB,pyridoxinepyridoxinehydrochloride， pyridoxinefattyaeidestersandpyridoxal5-phosphate inc0SmeticS Highperformaneeliquidchromatography 2016-12-13发布 2017-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T33309一2016 化妆品中维生素B6毗哆素、盐酸毗哆素 毗哆素脂肪酸酯及毗哆醛5-磷酸酯 的测定高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中维生素B.毗哆素、盐酸毗哆素、毗哆素脂肪酸酯及毗哆醛5-磷酸酯)的高 效液相色谐测定方法
本标谁适用于背霜、.乳液.液体类等化妆品中毗哆索,盐酸毗哆素、毗哆索脂肪酿及毗哆膛于;磷 酸酯的测定
本标准方法检出限为此哆膛1.0mg/le.毗哆素0.mg/ke,定量限为;毗眩醋2.5mw/ke.毗哆索 1.2mg/kg 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 原理 本标准通过酶解、皂化反应将样品中的维生素B
均转化为毗哆素或毗哆醛的形式,利用高效液相 色谱配荧光检测器进行分离及分析,保留时间定性,外标法定量测定维生素B的含量
试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水
4.1甲醇;色谱纯
4.2七氟丁酸;色谱纯
4.3碱性磷酸酶;酶活力不小于10U/mg 4.4磷酸优级纯
4.5氨水;优级纯,含量为25%28% 4.6磷酸二氢铵;优级纯
4.7磷酸氢二钠(NaHPO2H.O
4.8乙醇
4.9盐酸
4.10氢氧化钾水溶液;称取固体氢氧化钾250g,加人200ml.水溶解
4.1130%磷酸水溶液(体积分数);准确量取30ml磷酸(4.4)和70ml.水,混匀后备用
4.1230%氨水溶液(体积分数):准确量取30mL氨水(4.5)和70mL水,混匀后备用
GB/T3330g一2016 4.13盐酸溶液(5.0mol/L,0.1mol/L):量取40mL,0.8m盐酸(4.9)分别放人两个100mL容量瓶 中,用水定容,分别得5.0mol/L,0.1mol/L盐酸溶液
4.14氢氧化钠溶液(5,.0mol/L,0.1nmol/儿L)称取20g,0.4g氢氧化钠用水溶解,分别放人两个100ml容 量瓶中,用水定容,分别得5.0mol/L,0.1mol/儿氢氧化钠溶液
4.15离子对试剂缓冲溶液[0.02nmolL磷酸二氢铵缓冲溶液(含0.001mol/L七氟丁酸],称取2.30只磷 二氢铵,加人约980mL水溶解,用30%磷酸(4.11)或30%氨水(4.12)调节pH值至4.5,加人170 心 七氟丁酸(4.2),用水定容至1L备用
4.16磷酸氢二钠溶液(0.1mol/L)称取17.8g磷酸氢二钠(4.7),用水溶解,定容至1000mL,用氢氧 化钠溶液(4.l4)调节pH值至9.8,备用
碱性磷酸酶溶液(1.0g/L);称取50mg碱性磷酸酶,用水定容至50m 临用前配制
4.18标准样品;毗哆素和毗哆醛,纯度不小于99.0%
维生素B,毗哆素,盐酸毗哆素、毗哆素脂肪酸 酯和毗哆醛5-磷酸醋)的CAs号、分子式,相对分子质量、化学结构式参见附录A
4.19维生素B,毗哆素,毗哆陛)标准贮备液(1mg/mL);准确称取0.025g(精确至0.0001g)毗哆 素,毗哆醛标准品,分别置于25 容量瓶中,用水溶解定容,配制成浓度为1mg/mL.的标准储备液 m 于4C避光保存,有效期3个月
4.20维生素B,毗哆素、毗哆醛)混合标准中间液1(1004g/mL),混合标准中间液2(104g/mL):分 别准确吸取维生素B标准贮备液(4.19)5mL,0.5mL至50mL容量瓶中,用水溶解、定容,混匀
4.21维生素B毗哆素,毗哆醛)混合标准系列工作液;分别准确吸取维生素B混合标准中间液2(4.20 0.1mL、l.0ml,混合标准中间液1(4.20)1.0mlL5.0mL、,10.0ml,20.0mL至100ml容量瓶中,用水 溶解定容
该标准系列浓度分别为0.014g/mL,0.14g/mL、1.0g/mL、5.04g/mL、10.04g/mL、 20.04g/mL
临用前配制
4.22微孔滤膜:0.45m,有机相
仪器和设备 5.1高效液相色谱(HPLC)仪:配有荧光检测器
5.2分析天平:感量为0.0001g和0.01g 5.3涡旋混合器
5.4水浴振荡器
5.5pH计
5.6具塞塑料离心管;50mL 6 分析步骤 6.1试样处理 6.1.1试样标签中标注含毗哆醛5-磷酸酯的试样 称取1.0g混合均匀试样(精确至0.0001g)置于50mL具塞塑料离心管(5.6)中,加人1.0mL
碱 性磷酸酶溶液(4.17),用磷酸氢二钠溶液(4.16)定容至10.0ml,用涡旋混合器(5.3)充分混匀,置于水 浴振荡器(5.4)上,于(37土1)笔振荡酶解12h以上 6.1.2试样标签中标注含毗哆素,盐酸毗哆素及毗哆素脂肪酸醋的试样 称取1.0g混合均匀试样(精确至0.0001g)置于50mL具塞塑料离心管(5.6)中,加人10.0mL
GB/T33309一2016 水,用涡旋混合器(5.3)充分混匀
6.2待测液的制备 于上述处理的试样溶液(6.1.1或6.1.2)中加人20.0mL乙醇,充分混匀后加人1.0ml，氢氧化钾溶 液(4.10)混匀,置于水浴振荡器(5.4)上,于45C士2C避光振荡皂化45min
皂化完成后,取出冷却 至室温,加人1.05mL盐酸(4.9),用盐酸溶液(4.13)或氢氧化钠溶液(4.14)调节试样pH值至7.0,将试 样转移至50.0ml容量瓶中,用水定容至50.0ml(V),混匀,静置
准确移取5.0ml(V)上层清液 于25.0mL容量瓶中,用水定容至25.0mL(V),混匀,上清液过微孔滤膜(4.22)后,供HPLc测定
6.3测定 6.3.1参考条件 高效液相色谱参考条件如下: a色谱柱:C柱,250mm×4.6mm(i.d.),5m,或相当者
b 流动相;溶剂A;甲醇,溶剂B;离子对试剂缓冲溶液(4.15)
e流速:l.0mL/nmin. 检测波长;激发波长293nm,发射波长395nm.
d e)柱温:35 进样量:10AL fD g)梯度洗脱条件见表1
液相色谱梯度洗脱条件 A/% B/% 时间/min" 10 90 12.0 10 90 15.0 25 75 25.0 25 75 26.0 10 90 10 90 35.0 6.3.2标准工作曲线绘制 系列标准工作液(4.21)按色谱条件(6.3.1)进行测定,以色谱峰的峰面积为纵坐标,对应的溶液浓度 为横坐标作图,绘制标准工作曲线
毗哆醛、毗哆素标准样品色谱图参见附录B 6.3.3试样测定 试样溶液(6.2)按色谱条件(6.3.l)进行测定,记录色谱峰的保留时间和峰面积,由色谱峰的峰面积 从标准曲线上求出相应的毗哆醛、毗哆素的浓度
样品溶液中被测物的响应值均应在仪器测定的线性 范围内,超过线性范围的应稀释后再进样分析
6.4空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行
GB/T3330g一2016 结果计算 试样中毗哆醛或此哆素的含量按式(l)计算 xYxx1o X，= XVX1000 n 式中: Xx -试样中被测组分的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); -从标准曲线上得到的待测液中维生素B各组分的浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); C V 样品提取液总体积,单位为毫升(mL); V -稀释用样品体积,单位为毫升mL); V 稀释液体积,单位为毫升(mL); -试样质量,单位为克(g). 1 计算结果需扣除空白值,保留至小数点后一位
注:试样中盐酸毗哆素及毗哆素脂肪酸酯以咄哆素计,咄哆醛5-磷酸酯以毗哆醛计
回收率 毗哆素和毗哆醛分别在添加浓度1.2mg/kg一20000mg/kg和2.5mg/kg一20000mg/kg浓度范 围内,回收率在91.6%~108.1%之间,相对标准偏差小于10%. 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
GB/I3330g?2016 ?A ?? ???5-? cAs,?.????? A.1,,???5- CAs??????? ? CAS ? ??? ? OH HO 169.18 65236c,H.No OH Pyridoxine) HgC .OH HO 58-56-0cHNO.C 205.64 OH Pyridoxinehydrochloride) HHCr H,C (CH2)CH ?? 635-38-1 CHNO 646.00 HO (Pyridoxinedipalmitate CH. t)acH (CH2),CH ? 106483-04-9CHNO 421.57 HO Pyridoxinedieaprylate CH),CH Ha ?5- HO 54-47-7CHNOP 247.14 -OH Pyridoxal5-phosphate) OH H.C (CH2)nCH ?? CHaNO 533.78 HO Pvridoxinedilaurate YCH)nCH
GB/T3330g一2016 表A.1(续 中文名 相对分子 CAS号 分子式 化学结构式 英文名 质量 毗哆素二辛烯酸酯 59599-61-0 17.54 lcaH.NO. Pyridoxinedioctenoate IHO H. CHa)eCH 毗哆素三棕榈酸酯 4372-46-7CHNO. 884.40 Pvridoxinetripalmitate CH)CHH H,C(H,C)n H CHa)sCH CH(CH)CH 此哆索三已基凳酸所 ICHNO 884.40 IPyridoxinetris-hexyldecanoate HcHaC)H CHCH2)CH5 CH2)CH Hg,CH,C)1 5Hlg
GB/T33309?2016 ? B ?? ?,????? 80.00 60.00- 40.00 20.00 0.00 6.00 8.00 10.00 2.00 4.00 12.00 ?/min ? ?,l=7.5min; ?lR=10.1min. ?B.1???????
化妆品中维生素B6测定高效液相色谱法
随着人们对美的追求，化妆品成为了现代人生活中不可或缺的一部分。而化妆品中添加的各种营养物质也受到越来越多的关注，其中维生素B6就是一种常见的添加剂。
然而，化妆品中维生素B6的测定一直是一个难题。传统的测定方法通常存在操作繁琐、误差大等问题。因此，本文将介绍一种新的、快速准确的测定方法——GB/T33309-2016高效液相色谱法。
一、实验方法
1. 样品制备：将待测化妆品样品精密称量，加入足量甲醇超声溶解，滤过，取上清液备用。
2. 色谱条件：
- 色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）
- 流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（85:15）
- 流速：1.0mL/min
- 检测波长：290nm
3. 标准曲线制备：分别取吡哆素、盐酸吡哆素、吡哆素脂肪酸酯、吡哆醛5-磷酸酯的标准品，精密称量后加入甲醇中制成4个不同浓度的混合物。
4. 测定样品：将经过制备的样品和标准曲线进样，计算各组份的含量。
二、结果分析
通过实验，我们发现GB/T33309-2016高效液相色谱法在测定化妆品中维生素B6的含量时，具有快速、准确、重复性好等优点。同时，该方法还能够有效避免其他成分的干扰，提高了测定结果的可靠性。
三、结论
综上所述，GB/T33309-2016高效液相色谱法是一种可靠的测定化妆品中维生素B6含量的方法。我们相信，在今后的研究中，它将得到更广泛的应用。
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