大豆皂苷

大豆皂苷

国家标准 GB/T22464一2008 大 豆 苷 皂 Sybeansapomin 2008-11-04发布 2009-01-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22464一2008 前 言 本标准的附录A为规范性附录 本标准由国家粮食局提出 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口 本标准负责起草单位:;南京财经大学 本标准参与起草单位:上海交通大学,武汉工业学院、黑龙江九三粮油工业集团公司、黑龙江双河松 嫩大豆生物工程有限公司 本标准主要起草人:袁建、鞠兴荣、汪海峰、赵大云、张世宏、卞清德、罗莉、王哲
GB/T22464一2008 大豆皂 苷 范围 本标准规定了大豆皂苷的术语和定义,质量要求和卫生要求、检验方法、检验规则、标签标识,以及 包装,运输、贮存要求 本标准适用于以大豆、大豆粕或大豆胚芽为原料提取的商品大豆皂苷 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定 GB/T4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定 GB/T4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验 GB/T4789.5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 GB/T4789.10食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T4789.15食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数 G;B/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则 GB/T5009.3食品中水分的测定 食品中灰分的测定 GB/T50094 GB/T5009.11食品中总呻及无机呻的测定 GB/T5009.12食品中铅的测定 GB/T5492 粮食,油料检验色泽、气味.口味整定达 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB7718预包装食品标签通则 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 大豆皂苷soyheansaponin 以大豆,大豆粕或大豆胚芽为原料生产的,由非极性的三帖苷元(aglycone或sapogenol)和低聚糖 链(glycones)组成的五环三帖类齐墩果烧型皂拭产品 质量要求和卫生要求 成分特征 大豆皂苷产品中主要成分为A类,B类,E类或DDMP类皂苷,其主成分的化学结构见图1
GB/T22464一2008 COOH CH.,oH Ho N OH oH OAc A类大豆皂苷结构 CHOH B类、E类和DDMP皂甘的结构 大豆皂苷结构图中Ri,R,R基团 代号 R R R 组名 CH.OH DGe Aa H Ab CH.OH CH.0COCH pDGle Ac CH.OH a-l-Rha CH.0COCH H DGle Ad CH.0COCH A组 Ae CH.OH H H Af CH.OH H CH.OCOCH H H Ag H H Ah CH.OC(OCH BaVy CH.OH pDGe BBI CH.OH c-1.Rha B组 Bc(I H -l.Rha OH H BBI CH.OH H H Be'N 图1大豆皂苷主成分的化学结构
GB/T22464一2008 R R 组名 代号 R .OH Bd CH6 D:(Gile O E组 B CH.OH c-I.-Rha CH.oH PDGe ag CH.OH cr-1-Rha OH DDMP H a-l.Rha a CH. Yg CH.OH H H H 7g 1(续 图 4.2质量指标 大豆皂苷质量指标见表1 表1大豆皂苷质量指标 质量指标 目 项 色泽,外观 黄色至棕黄色粉末 气味、口味 气味、口味正常,无异味 杂质 无肉眼可见杂质 水分/% 5.0 灰分(以干基计/% 3.0 大豆皂昔含量(以干基计/% 40 plH值(1%水溶液 6.5士1.0 4.3卫生指标 4.3.1大豆皂昔卫生指标见表2 表2大豆皂苷卫生指标 y 生指标 顶 目 1000 菌落总数/CFU/g) 大肠菌群/(MPN/100g) 3o 霉菌和酵母菌总数/(CFU/g 100 致病菌指肠道致病菌和致病性球菌 不得检出 总呻(以As计/mg/kg 0.5 铅(P'b)/mg/kg 1.0 4.3.2植物检疫按照国家有关标准和规定执行 检验方法 5.1托样、分样;按GB/T5009.1执行 色泽、气味、口味检验按GB/T5492执行 5.2 杂质测定:取一定量的试样平摊后,在自然光线下,肉眼观察有无与产品颜色差异的斑点或其他 物质 4 5. 水分测定:按G;B/T5009.3执行
GB/T22464一2008 5.5灰分含量测定;按GB/T5009.4执行 5.6大豆皂苷含量测定;按附录A执行 5.7菌落总数测定;按GB/T4789.2执行 5.8大肠菌群测定;按GB/T4789.3执行 5.9致病菌检验;按GB/T4789.4.GB/T4789.5.GB/T4789.10执行 .10霉菌和酵母数检验:按GB/T4789.15执行 5.11总碑含量测定;按GB:/T5009.1执行 s 12铅含量测定:按GB/T5009.12执行 5.13pH值测定;称取1.00g样品,加人到99.0ml水中,搅拌均匀,制成1.0%的样品溶液 用pH 计测定样液pH值 检验规则 6 检验批 同一批原料,同一班次生产的产品为一批 6.2 出厂检验 按本标准4.2的规定对每批产品检验 6.3型式检验 6.3.1遇有下列情况之一时,应进行型式检验 常年连续生产的每年至少进行一次; -当原料、设备、工艺有较大变化可能影响产品质量时 质量监督部门提出要求时 6.3.2型式检验按本标准4.2、4.3规定执行 6.4判定规则 6.4.1检验结果全部符合本标准要求时,判定该批产品为合格品 6 .4.2卫生指标中有一项检验结果不符合本标准要求时,判定该批产品为不合格产品 6. 4.3除卫生指标外,其他项目检验结果不符合本标准要求时,可在原批次产品中双倍抽样复检一次. 若仍有指标不合格,则判该批产品为不合格产品 标签标识 7.1应符合GB7718的规定及要求 7.2凡标识“大豆皂苷”的产品均应符合本标准 7.3采用转基因大豆为原料生产的产品,应按国家有关规定进行标识 7.4应注明产品原料的生产国名 包装、运输及贮存 包装材料或容器应符合相应食品卫生要求,包装应完整、无破损、无污染 8 2 应使用符合卫生要求的工具,、容器运送,运输中应注意防止日晒,雨淋,污染和标签脱落 3 应贮存于清洁、干燥、阴凉处 不得与有毒、有害物品混存 88
GB/T22464一2008 附 录A 规范性附录 大豆皂苷含量测定 A.1高效液相色谱法 A.1.1范围 本方法规定了采用高效液相色谱测定大豆皂苷中皂苷含量的方法 本方法皂苷各单体的检出限为0.lg/kg A.1.2原理 试样用80%乙醇溶解后，经0.45Am滤膜过滤,采用反相键合相色谱测定,根据色谱峰保留时间进 行定性,根据峰面积或峰高定量,计算大豆皂苷各单体的含量之和为大豆皂苷含量 A.1.3试剂 除非另有说明仅使用确认为优级纯的试剂 水符合GB/T6682规定的 A.1.3.1 -级 A.1.3.2甲醇 A.1.3.380%乙醉溶液量取800mL无水乙醉加水稀释至1000mL A.1.3.4大豆皂苷标准溶液;称取A类,B类,E类及DDMP类大豆皂苷单体标准品含量>98%)各 10.0mg置于100ml容量瓶中,用80%乙醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀 每毫升溶液分别含每种大 豆皂苷单体标准品0.10m mg A.1.4仪器与设备 除常规实验室仪器设备外,还包括以下仪器设备: A.1.4.1高效液相色谱仪:具紫外检测器 A.1.4.2高效液相色谱分析参考条件 色谱柱.NovapakCa柱3.9mmx300mm,或相同性质的填充柱 -流动相甲醇水溶液,V甲醇)V(水)=80+20. 流速l.0mL/ -/min 检测器;紫外检测器,205nm波长,0.2AUFS 色谱柱温度:30C -进样量.10,L. A.1.5操作步骤 A.1.5.1试样制备 称取试样约0.1g,精确至0.001g,加80%乙醇溶液溶解并稀释定容至100mL,混匀,通过 0.45um微孔滤膜过滤,滤液备作高效液相色谐(HPLC)分析用 A.1.5.2测定 在相同的色谱分析条件下,分别取10L大豆皂苷溶液和试样溶液注人高效液相色谱分析,根据保 留时间定性,外标峰面积定量 A.1.6结果计算 大豆皂苷的含量按式(A.1)计算 习(A)×V×10o ×100 A.1 V又m又I000又100w
GB/T22464一2008 式中: 产品中大豆皂苷的含量以质量分数计),%; A -进样体积中大豆皂苷单体组分i的质量,单位为毫克(mg); -样品稀释总体积,单位为微升(L); 进样体积,单位为微升L); 样品质量,单位为克(g); n -样品水分(以质量分数计),% 7 计算结果保留三位有效数字 A.1.7重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5% A.2分光光度法 A.2.1范围 本方法规定了采用分光光度法测定大豆皂苷中皂苷含量的方法 本方法大豆皂苷的检出限为0.lg/kg A.2.2原理 样品用50%甲醉水溶液溶解后,在酸性条件下水解,以乙酸乙酯萃取出苷元与香草醛、高氯酸反 应显色,在560nm波长下测定吸光度,与标准曲线比较定量 A.2.3试剂 A.2.3. 高氯酸 A.2.3.295%乙醇 乙酸乙酯 .2.3.3 W 50%甲醇溶液;量取100ml 甲醇加人100ml水中,摇匀 2mol/LHcl溶液;量取16.5mLHCI加水稀释至100mL 2.3.65%香草醛冰乙酸溶液;称取5.00香草醛溶于100ml冰乙酸中,摇匀 2.3.7大豆皂苷标准溶液;称取大豆皂苷单体标准品或混合标准品(含量>98%)10.0nmg用少量 50%甲醇溶液溶解后,加人2mol/LHCl60ml100C水解5h,用70ml乙酸乙酯分数次萃取,提取 液用旋转蒸发器蒸干后,用95%乙醉溶解并转移至100ml容量瓶中,以95%乙醇定容至刻度,摇匀 每毫升溶液含大豆皂苷0.10mg A.2.4仪器 除常规实验室仪器设备外,还包括以下仪器设备 分光光度计:具1cm比色皿 A.2.5操作步骤 A.2.5.1试样制备 称取试样约0.1g精确至0.001g,溶于50mL50%甲醉溶液中,用50%的甲醉溶液定容子 100 ml，取10mL加人2mol/LHCl60ml，100C水解5h,用70mL乙酸乙酯分数次萃取,提取液 用旋转蒸发器蒸干后,用95%乙醉溶解并转移至容量瓶中,以95%乙醉定容至100mL作为待测样液 .2.5.2标准曲线的绘制 A 取大豆皂苷标准溶液(A.2.3.7)0mL.,0.lmL,0.2ml,Q.3mL,0.4mL0.5mlL.,0.6" ml、 mg.O.05mg.0.06mg.0.07mg)于 0.02t 2mg.0.03mg、0 0.04 0.7ml.(相当于大豆皂苷0mg.0.01mg.0 10ml具塞试管中,水浴挥干,加5%的香草醛冰乙酸溶液0.2mL,加人高氯酸0.8ml,摇匀,60C水 浴加热15min,取出后立即用流水冷却,加人4ml冰乙酸稀释摇匀后,在560nm处以0管调零,测定 吸光度,每个浓度平行测定两次,计算平均吸光度值,以吸光度值为横坐标,大豆皂苷质量mg)为纵坐
GB/T22464一2008 标,绘制标准曲线 A.2.5.3测定 吸收待测样液(A.2.5.l)0.4ml于10ml具塞试管中,水浴挥干,加5%的香草醛冰乙酸溶液 0.2mL，加人高氯酸0.8mL，摇匀,60C水浴加热15min,取出后立即用流水冷却,加人4nl冰乙酸 稀释摇匀后,在560nm处以0管调零,测定吸光度,与标准曲线比较定量 A.2.6结果计算 大豆皂苷的含量按式(A.2)计算 AXVXVX100 ×100 A.2 X= V又V又m又1O0又00一U 式中: 产品中大豆皂苷含量(以质量分数计),%; -样液中大豆皂苷的质量,单位为毫克(mg) 样品稀释总体积,单位为毫升(mL) 水解时取样液体积.单位为毫升(mL) 水解液定容体积,单位为毫升(mL) -测定用水解液定容体积,单位为毫升(mL); 样品质量,单位为克(g); 7 样品水分(以质量分数计),% 心 计算结果保留三位有效数字 A.2.7重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%