GB/T15400-2018
饲料中色氨酸的测定
Determinationoftryptophaninfeeds
- 中国标准分类号（CCS）B46
- 国际标准分类号（ICS）65.120
- 实施日期2019-04-01
- 文件格式PDF
- 文本页数9页
- 文件大小567.13KB
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饲料中色氨酸的测定
国家标准 GB/T15400一2018 代替GB/T154001994 饲料中色氨酸的测定 Determinationoftryptophaninfeeds 2018-09-17发布 2019-04-01实施 国家市场监督管理总局 发布 币国国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15400一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准代替GB/T154001994《饲料中色氨酸的测定分光光度法》
本标准与GB/T154001994相比,除编辑性修改外,主要技术内容的变化 -增加了高效液相色谱法,修改了适用对象,增加了两个方法的定量限(见第1章,1994年版的 第1章. -修改了分光光度法原理的表述(见4.1,1994年版的第3章)
-修改了精密度的表述(见4.7,1994年版的8.3)
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口
本标准起草单位农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 北京],通威股份有限公司
本标准主要起草人李兰、贾争,赵艳、赵根龙、宋军、张风怦
本标准的历次版本发布情况为 GB/T154001994
GB/T15400一2018 饲料中色氨酸的测定 范围 本标准规定了饲料中色氨酸含量测定的高效液相色谱法和分光光度法
本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中色氨酸的测定
高效液相色谱法的定量限为0.02%;当试样最大称样量为700mg,水解液稀释倍数为25倍时,分 光光度法的定量限为0.04%
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GB/T6433饲料中粗脂肪的测定 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GByT14899.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 高效液相色谱法(仲裁法 3.1原理 试样中的色氨酸经氢氧化锂溶液水解,用高效液相色谱法分离,紫外或荧光检测器检测,外标法 定量
3.2试剂或材料 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯
3.2.1水;符合GB/T6682中一级水的规定
3.2.2甲醇:色谱纯
3.2.3氢氧化钾溶液(0.1mol/L);称取0.56只氢氧化,溶解于100mL.水中,即得
3.2.4氢氧化锂溶液(4mol/L):称取83.9g氢氧化锂,溶解于500mL水中,即得
3.2.5乙酸钠缓冲溶液0.0085nmol/LNa*,pH=4.5);称取0.70g无水乙酸钠,溶解于1000mL水 中,用冰乙酸调节pH为4.5
3.2.6流动相:乙酸钠缓冲溶液(3.2.5)十甲醇(3.2.2)=95十5
3.2.7L-色氨酸标准储备溶液;准确称取25mg(精确到0.0001g色氨酸对照品(纯度大于99%),置 于25mL烧杯中,用滴管滴加氢氧化钾溶液(3.2.3)使其溶解将其定量地转移至250mL棕色容量瓶 中,用水定容,浓度为100"g/mL 2 2C8保存,有效期为1个月
3.2.8L-色氨酸标准系列溶液:准确移取L色氨酸标准储备溶液(3.2.7)5.00mL、7.50mL、 10.00mL,12.50ml、15.00mL、17.50ml分别置于25mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀
其 溶液浓度分别为20"g/ml,304g/ml404g/ml,50"g/ml,604g/ml和70g/ml
2C8C保 存,有效期为2周
GB/T15400一2018 3.3仪器设备 3.3.1天平:感量0.0001g、感量0.001g 3.3.2聚四氟乙烯水解管;配衬管和密封垫
3.3.3恒温干燥箱;可达到110士2C
3.3.4离心机转速不低于4000r/min
3.3.5高效液相色谱仪;配紫外检测器或者荧光检测器
3.4样品 按GB/T14699.1的规定,抽取有代表性的饲料样品,用四分法缩减取样
按GB/T20195制备试 样,磨碎,全部通过0.25 孔筛,混匀,装人密闭容器中，备用
取适量试样,按照GB/T6433测定试 mm 样脂肪含量
3.5试验步骤 3.5.1脂肪含量小于4%的试样 平行做两份试验
称取未脱脂试样50mg100mg(精确至0.0001g),置于聚四氟乙烯水解管 (3.3.2)衬管中,加1.5mL氢氧化锂溶液(3.2.4),充氨1min,旋紧密封盖后放人l10士2C恒温干 燥箱(3.,3.3)中,水解20h
取出水解管,冷却至室温,用乙酸钠缓冲溶液(3.,2.5)将水解液定量地转移至 25ml容量瓶中,并用上述缓冲溶液定容,离心或者过0.45m滤膜后上液相色谱仪测定
3.5.2脂肪含量大于4%的试样 称取脱脂后的试样,按照3.5.1步骤进行水解
3.5.3参考色谱条件 色谱柱:C8,长250mm,内径4.6mm,粒度5Mm,或性能相当者 流动相见3.2.6
流速:l.0mL/min 柱温:室温
进样体积,l0Al20ML 检测器:紫外或二极管矩阵检测器,检测波长280n nm
荧光检测器,激发波长;283nm;发射波长;343nm
3.5.4测定 按上述规定的色谱条件平衡色谱柱,向色谱柱注人相应的色氨酸标准系列溶液(3.2.8)和试样溶液 (3.51或3.5.2),以保留时间定性;在线性范围内,用外标法单点校正定量
色氨酸标准游液色谱图参 见附录A中图A.1
3.6试验数据处理 未脱脂试样中的色氨酸含量以质量分数w，计,数值以克每100克表示按式()计算 3.6.1 A， xVxxY ×10-" 7'1 ×V A×
GB/T15400一2018 式中: 试样溶液峰面积值; A w 试样稀释体积,单位为毫升(mL); 色氨酸对照品溶液的质量浓度,单位为微克每毫升(4g/ml); 0 V -色氨酸对照品溶液进样体积,单位为微升(AL); A 色氨酸对照品溶液峰面积平均值; 试样质量-单位为党(e mn V 试样溶液进样体积,单位为微升(aL). 3.6.2脱脂试样中的色氨酸含量以质量分数w计,数值以克每100克表示,按式(2)计算 A，×V×c× ×1一F)×10" A×m×V 式中 F 脂肪含量,%
式中其他参数同式(1)解释
测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留两位小数
3.7精密度 在重复性条件下,当试样中色氨酸含量小于0.1%时,两次独立测定结果的绝对差值应不大于 0.01%
当试样中色氨酸含量在0.1%0.5%时,两次独立测定结果与其平均值的绝对差值,应不大于 该平均值的3%
当试样中色氨酸含量大于0.5%时,两次独立测定结果与其平均值的绝对差值,应不 大于该平均值的2%
分光光度法 4.1原理 饲料中蛋白质经碱水解后,降解成多肽和游离的氨基酸
在硫酸介质中、氧化剂亚硝酸钠存在下
色氨酸与对二甲氨基苯甲醛缩合反应生成蓝色化合物,其吸光度在一定范围内与色氨酸含量成正比. 4.2试剂或材料 除特殊注明外,本标准所用试洲均为分析纯
水;符合GB/T6682中二级水的规定
4.2.1 4.2.2氢氧化钾溶液(10%);称取100g氢氧化钾,溶解于1000ml水中,即得
4.2.3硫酸溶液(21.2mol/L):量取589mL硫酸,缓慢加人约350mL水中,冷却后用水稀释至1L
4.2.4对二甲氨基苯甲醛溶液;称取1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于硫酸(4.2.3)中并定容至100ml.,临 用现配
4.2.5亚硝酸钠溶液(0.2%);称取0.1只亚硝酸钠,溶解于50ml水中,临用时制备
4.2.6l-色氨酸标准储备溶液;同3.2.7
4.2.7l-色氨酸标准系列溶液;同3.2.8
4.3仪器设备 4.3.1天平;同3.3.1
4.3.2培养箱:40C士2C 4.3.3离心机同3.3.4
GB/T15400一2018 4.3.4分光光度计,配1cm比色皿
4.4样品 同3.4
4.5试验步骤 4.5.1试样的水解 4.5.1.1脂肪含量小于4%的试样 平行做两份试验
参考附录B中表B.1的称样量,称取试样0.16g0.7g(精确至0.0001g)于 50ml容量瓶中，在轻轻振摇中缓慢加人25ml氢氧化钾溶液(4.2.2),使试样湿润且不粘壁,置于培 养箱(4.3.2)中水解16h18h
取出水解液冷却至室温,用水定容至刻度,摇匀
取部分水解液以 4000r/min转速离心15 min,备用
4.5.1.2脂肪含量大于4%的试样 称取脱脂后的试样,按照4.5.1.1步骤进行水解
4.5.2显色反应 4.5.2.1L-色氨酸标准系列溶液的显色 精密移取水和L-色氨酸标准系列溶液(4.2.7)各浓度溶液1ml,分别置于10ml具塞试管中,水为 试剂空白
向每支试管内加人氢氧化钾溶液(4.2.2)1mL,混匀
将试管放人冷水盆中,加5ml对二 甲氨基苯甲醛溶液(4.,2.4),从冷水盆中取出试管摇匀在20C30C放置30 向每支试管内加 mln
人0.2mL亚硝酸钠溶液(4.2.5),摇匀,放置251 min
4.5.2.2试样溶液的显色 取2ml试样溶液(4.5.1.1或4.5.1.2)置于10ml具塞试管中,并将试管放人冷水盆中,加5ml对 二甲氨基苯甲醛溶液(4.2.4),从冷水盆中取出试管,摇匀
再从每个试样溶液中另取2ml置于10ml 具塞试管中,加5ml硫酸溶液(4.2.3)作为样品空白,摇匀
从冷水盆中取出试管，在20C30下 放置30min
向每支试管内加人0,2ml亚硝酸钠溶液(4.2.5),摇匀,放置251 mln
4.5.3比色测定 以试剂空白调零,在590nm波长处测定色氨酸标准系列溶液的吸光度值
以色氨酸浓度为横坐 标,吸光度值为纵坐标,绘制工作曲线,列出回归方程 同时测定样品空白和试样帝液的吸光度值
4.6试验数据处理 未脱脂试样中L色氨酸的含量以质量分数w,计,数值以克每100克表示,按式(3)计算 4.6.1 0×25 ×100% w (3 又IO 式中 -以试样溶液吸光度值与样品空白吸光度值之差从工作曲线上查得的色氨酸含量,单位为 微克(4g);
GB/T15400一2018 25 试样稀释倍数 m -试样质量,单位为克(g). 4.6.2脱脂试样中L-色氨酸的含量以质量分数w，计,数值以克每100克表示,按式(4)计算 p×25×1一F) ×100% . wu m又10 式中 脂肪含量,%
式中其他参数同4.6.1解释
测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留两位小数
注:试样脂肪含量小于4%时,式(3)和式(4)所得结果在允许偏差之内
4.7精密度 在重复性条件下,当试样中色氨酸含量小于0.1%时,两次独立测定结果的绝对差值应不大于 0.01%
当试样中色氨酸含量在0.1%0.5%时,两次独立测定结果与其平均值的绝对差值,应不大于 该平均值的3%
当试样中色氨酸含量大于0.5%时,两次独立测定结果与其平均值的绝对差值,应不 大于该平均值的2%
GB/T15400?2018 ? A ??) ????? ??????A.1 9.749 60 50 40 30 20 10 ?/min ?A.1???(30"g/ml)??
GB/T15400一2018 附录 B 资料性附录 参考称样量 根据样品蛋白质、色氨酸含量确定称样量,经试验研究建议不同饲料称样量见表B.1
表B.1参考称样量 蛋白质含量/% 饲料种类等 称样量/mg 650~700 10 高粱、玉米等 小麦,大麦、糠获、糠饼、配合饲料,各种叶粉、精料补充料等 ll20 450~500 2130 干酒糟,干粉渣,豆腐渣,杂豆、,糟渣类等 350400 棉仁饼、菜籽饼、蓖麻饼,向日葵饼、浓缩料等 31一40 200250 41~50 180200 虾粉、豆饼、芝麻饼、酵母、豆粕、花生饼,国产鱼粉 >50 16018o 鱼粉,血粉,肉骨粉,蚕蝠、羽毛粉等
饲料中色氨酸的测定GB/T15400-2018
色氨酸是一种必需氨基酸，对动物的生长发育和免疫功能至关重要。因此，在饲料中色氨酸的含量测定十分重要。
根据国家标准GB/T15400-2018，可以采用高效液相色谱法（HPLC）来测定饲料中色氨酸的含量。
具体操作步骤如下：
- 取样：首先需要将饲料样品进行粉碎、筛选等预处理工作，然后取适量样品称量。
- 提取：将样品加入盐酸溶液中，经过超声波提取，得到色氨酸的溶液。
- 衍生化：将色氨酸的溶液与硝酸银和氯甲烷混合，经过摇晃后静置，得到色氨酸的衍生物。
- 分析：将色氨酸的衍生物注入HPLC仪器中进行检测和分析，可以得到饲料中色氨酸的含量。
总之，采用高效液相色谱法（HPLC）来测定饲料中色氨酸的含量，是一种准确、可靠的方法。
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