鸡组织中已烯雌酚残留的测定高效液相色谱-电化学检测器法

鸡组织中已烯雌酚残留的测定高效液相色谱-电化学检测器法

国家标准 GB/T20443一2006 鸡组织中己烯雌酚残留的测定 高效液相色谱-电化学检测器法 MethodforthedeterminationofdiethyIstilbestroinehiekentissue Highperformaneeliquidchromatographywitheleetrochemicaldetectiom 2006-11-01实施 2006-08-28发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 小 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20443一2006 鸡组织中己烯雌酚残留的测定 高效液相色谱-电化学检测器法 范围 本标准规定了鸡组织中已烯雌酚残留量测定的高效液相色谱-电化学检测器方法 本标准适用于鸡组织中(鸡肌肉和鸡肝脏)己烯雌酚残留量的测定 原理 鸡组织中的己烯雌盼经叔丁基甲基酥提取,C柱净化,甲醇和水的混合液洗脱 以甲醇-磷酸盐缓 冲液(pH3.5)为流动相,用高效液相色谱-电化学检测器法测定,外标法定量 电化学检测器对可氧化 还原的化合物具有很高的灵敏度,利用这一特点,可测出痕量的己烯雌酚 试剂和材料 所有试剂除注明外均为分析纯,实验用水为去离子水 3.1叔丁基甲基酥;色谱纯 3.2甲醇色谱纯 3.3氢氧化钠溶液1moL/几水溶液 乙酸 3.5乙酸溶液;体积分数为20%水溶液 3.6磷酸盐缓冲液;0.05moL/L磷酸二氢钾水溶液,pH3.5 3.7己烯雌雕酚标准品;纯度>99% 3.8己烯雌盼标准储备液;准确称取一定量的己烯雌酚标准品于棕色容量瓶中,用甲醇溶解后定容至 刻度,得1004g/mL的标准储备液 储存于4C冰箱中,使用前恢复至室温 3.9己烯雌酚标准工作液;用前将储备液用甲醇稀释为50ng/mL一2000ng/mL的浓度系列 仪器和设备 高效液相色谱仪,配电化学检测器 4.2均质器 4.3固相翠取装置 固相萃取小柱:C柱,容积为6mL 4.4 4.5旋转蒸发仪 心形瓶;100m 分液漏斗;100mL 4.8酸度计 4.9涡旋混均器 44 .10真空梨 44 .11样品浓缩仪 样品处理 样品采集后于10000r/min下匀浆(或者将样品尽量粉碎),于一20C以下冷冻保存,分析用时将其
GB/T20443一2006 解冻后使用 分析步骤 6.1提取 称取试样10尽(精确至0.01g)于50ml带盖离心管中,加人15m叔丁基甲基艇,用均质器以 10000r/min的速度均质15s后以3000r/min的速度离心10min,收集上清液,再用15ml叔丁基甲 基酥提取一次,合并有机相至100ml分液漏斗中,加人1moL/L的氢氧化钠溶液10mL.,剧烈振摇 min,静置分层30min,收集水相并用体积分数为20%的乙酸调pH至4.5,备用 6. 2 净化 依次用5mL甲醇、5mL水和5mL的甲醇:水[V甲醇)+V(水)=45十55]预洗C小柱,然后将 6.1中备用液过柱,弃去流出液;再用4mL的甲醇;水[V(甲醇)+V(水)=80十20]洗脱,洗脱液用旋转 蒸发仪浓缩至约1ml后用甲醇转移至2.0mL的小瓶中,用氮气吹干,最后用300 L流动相溶解供高 心 效液相色谱-电化学检测器测定用 6.3测定 6.3.1高效液相色谱条件 色谱柱.C,3.9mmX150mm 流动相甲醇-0.05moL/L磷酸盐缓冲液(pHH3.5)[v(甲醇)十v0.05mol/1磷酸盐缓冲液)= 60十40] 流速1.0nmL/min 电化学检测器的灵敏度设在1nA,工作电势为900mV; 进样量:40ML 6.3.2高效液相色谱测定 根据样液中己烯雌盼残留量情况,选定峰面积相近的标准工作溶液 标准工作溶液和样液中己烯 雌酚响应值均应在仪器检测线性范围内 标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定 在上述色谱 条件下,己烯雌酚保留时间约为7.2min 标准品色谱图参见附录A中图A.1 6.3.3空白试验 除不加试样外,采用6.l一6.3.2的测定步骤进行平行操作 6.3.4结果计算和表述 用色谱数据处理系统或按式(1)计算试样中己烯雌酚残留量 A c V×1000 X= AmX1000 式中 试样中己婚雕丽残留量,单位为微克每千克(g/ g/kg); 样液中己烯雌酚峰面积 标准工作液中己烯雌盼峰面积; 标准工作液中己烯雌盼的质量浓度,单位为微克每升(ug/L); 样液最终定容体积,单位为毫升(mL); -最终样液所相当的试样质量,单位为克(g) m 检测限回收率 检测限 本方法在鸡组织(鸡肉和鸡肝)中的检测限为1ug/kg 7.2回收率 本方法在1g/kg一100g/k似讼加浓度的回收率为60%~I10%
GB/T20443一2006 附 录 A 资料性附录 标准品色谱图 己烯雌酚标准品的液相色谱图见图A.1 40.00 mv 35.00 30.00 25.00 20.00 15.00 DES 10.00 5.00 0.00 -5.00 2.00 4.00 8.00 10.00 12.00 图A.1己烯雌酚标准品的液相色谱图