食品接触表面清洗消毒效果试验方法三磷酸腺苷生物发光法

食品接触表面清洗消毒效果试验方法三磷酸腺苷生物发光法

国家标准 GB/T36004一2018 食品接触表面清洗消毒效果试验方法 三磷酸腺苷生物发光法 Foodcontaetsurfacescleaninganddisinfectioneffieaeytestmethod ATPbioluminesceneeethod 2018-03-15发布 2018-10-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/36004一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由轻工业联合会提出 本标准由全国食品用洗涤消毒产品标准化技术委员会(SAC/TC395)归口 本标准起草单位:上海市计量测试技术研究院、日用化学工业研究院、艺康()投资有限公 司洛娃科技实业集团有限公司 本标准主要起草人:刘刚徐勤、李妍、许丽、季振栋、季靓、赵丽君、俞云表、姚晨之、赵建利
GB/36004一2018 食品接触表面清洗消毒效果试验方法 三磷酸腺苷生物发光法 范围 本标准规定了一种基于三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate,ATP)生物发光原理进行食品接触表 面清洗消毒效果评价的试验方法 本标准适用于采用三磷酸腺苷生物发光法对食品接触表面清洗消毒效果进行的评价 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 食品接触表面fo0dcontaetsurfaces 食品包装材料,容器,食品加工、生产和经营中的器具、餐具,设备、地面、墙面等可能与食品直接接 触的表面 3.2 清洗cleaning 除去物品上的污染,使之达到预定用途或进一步处理所需的过程 3.3 消毒disinfeetion 杀灭或清除传播媒介上病原微生物,使其达到无害化的处理过程 3.4 相对发光单位relativelightunit;RLU 化学发光分析仪的发光计量单位 原理 三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate,ATP)是生命过程的主要能量来源,在细菌,、酵母菌和霉菌以 及所有的动物和植物体中,包括食物和食物残渣中都含有ATP,而无生命的碎屑物质中不存在ATP 生物活性物质中的ATP含量是相对恒定的,借助荧光素-荧光素酶发光反应可以对ATP进行定量,从 而可以反映出生物量残留,因此可以对清洗消毒效果进行评价
GB/T36004一2018 5 ATP检测方法 5.1方法一;手持式ATP生物发光检测仪涂抹法 5.1.1试剂和材料 仪器配套的涂抹采样棒 5.1.2仪器 手持式ATP检测仪 5.1.3涂抹采样方法 从试管内取出采样棒,食指与拇指握住采样棒上端,确保采样棒可以被旋转 轻轻向下施压,并不 断转动采样棒 在选定涂抹区域内,水平、上下重复涂抹该区域直至涂抹完整个表面 涂抹完成后将涂 抹采样棒放回试管中 对于平头取样器,与涂抹表面保持垂直,并采用同样方式覆盖整个表面 5.1.4ATP的检测 按仪器说明书进行开机和校正后,将采样棒完全按人试管中,激活ATP发光反应 快速来回振荡 采样棒约5s,充分混合试剂,将试管插人仪器中进行检测 测得结果表示为相对光单位(RLU). 5.1.5注意事项 使用手持式ATP发光检测仪涂抹法需注意以下事项 涂抹过程中手不要触及采样头及涂抹表面 a b) 操作者要执行统一一致的涂抹方式以得到可重复的结果" -旦采样完,建议立即进行检测;一旦激活后,检测应30s内进行; c 不同制造商提供的涂抹采样棒应使用各自配套的仪器进行检测,检测结果可以参考仪器供应 d 商提供的标准，同时得到供应商培训合格后方能从事检测工作; 不同仪器检测数值不能混在一起比较,当使用不同厂家的仪器进行该实验,所得结果可能不 -致 5.2方法二:台式化学发光分析仪检测法 5.2.1试剂和材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的三级或以上的水 5.2.1.1ATP检测试剂盒，试剂盒包括细胞裂解液、检测缓冲液、荧光素-炎光素酶混合物.ATP标准 溶液 5.2.1.2无菌水 高压灭菌后的实验用水 灭菌条件为;压力103kPa,温度121C126下蒸汽灭 菌20min 本标准中的灭菌操作均使用该条件 5.2.1.3经高压灭菌的金属镀子 5.2.1.4滤纸片 将滤纸片剪成5em×5cm规格,高压灭菌后使用 5.2.2仪器 普通实验室仪器和以下仪器 5.2.2.1微孔板化学发光分析仪
GB/36004一2018 5.2.2.2 高压灭菌锅 5.2.2.3离心机 5.2.2.4移液器,带已灭菌的一次性枪头 5.2.2.5经高压灭菌的玻璃器皿 5.2.2.6已灭菌塑料离心管,15ml 5.2.3采样和提取 用灭菌慑子将5cmm×5cm的湿润灭菌滤纸片紧贴食品接触表面,并用锻子牵引滤纸在被测样品 表面轻轻来回移动1min,置于有5ml.细胞裂解液的离心管中,充分振荡后,将离心管放人离心机中 设置离心机温度为4C,离心力为12000g,离心时间5min 离心后滤纸碎片聚集在离心管的底部,用 移液器取出上层清液,用于后续测定 5.2.4检测 按照ATP检测试剂盒说明书,将荧光素-荧光素酶混合物溶解到检测缓冲液中,加人足量的细胞提 取液,用微孔板化学发光分析仪检测响应(有些系统要求将荧光素-荧光素酶混合物注射到样品中),得 到RLU值 每份样品平行分析三次 5.2.5注意事项 使用台式发光分析仪检测法需注意以下事项 检测ATP时应使用洁净无ATP的玻璃器m a b 荧光素酶的冻融次数不宜超过3次,反复冻融会导致其逐渐失活; 裂解后样品中的ATP在室温不太稳定,需在4C或冰上操作 ATP在冰上可以稳定长达 c 6 h; 细菌能在无菌水中生存和繁殖,这会造成ATP的干扰,因此无菌水的质量应定期检验 实验室清洗消毒效果评价方法 6.1仪器 6.1.1高压灭菌锅 6.1.2恒温培养箱 6.1.3离心机 6.1.4生物安全柜 6.2试剂和材料 6.2.1大肠杆菌菌株 6.2.2LB液体培养基 配制方法;950mL实验用水中加人胰蛋白胯10g、酵母提取物5g、,NaCl10g" 摇动容器直至溶质溶解 用5mol/儿NaOH调pH至7.0,用实验用水定容至1I在103kPa高压下燕 汽灭菌20min 6.2.3一次性塑料无菌培养皿,直径为9cm. 6.2.4灭菌美工刀 6.2.5灭菌棉棒 6.2.6灭菌离心管
GB/T36004一2018 6.3人工污染 6.3.1细菌培养 大肠杆菌菌株活化后,取1ml.大肠杆菌培养液接种至1o0mL灭菌的LB液体培养基中,37C培 养箱220r/min速率震荡培养24h 6.3.2被污染载体制作 用灭过菌的美工刀在一次性塑料无菌培养皿底部划出痕迹,从左至右、从上至下,从左上至右下,从 右上至左下各40下,见图1 图1用培养皿制作的载体 6.3.3人工污染样品制备 将培养好的大肠杆菌溶液倒人灭菌离心管中,用离心机2000g离心2min,弃去液体部分,只保留 底部细菌 在生物安全柜中,使用灭菌棉棒沾取细菌并来回均匀涂抹于培养皿制作的载体,使载体表面 均匀地沾满细菌 待表面干燥后,使用灭菌水冲洗表面1nmin,待表面自然干燥后检测 同时制作六个 人工污染样品,其中三个进行清洗消毒 实验后,污染表面应灭菌处理,防止造成潜在的生物危害 6.4样品的清洗消毒 采用符合国家有关卫生法规的洗消剂、消毒设备对表面进行请洗消毒,根据不同的清洗消毒方法 应该按照其规定的操作程序 具体可参考GB14934 6.5结果计算 人工污染样品,在清洗消毒之前,用方法一或方法二检测ATP含量(RLU).重复检测三次取平均 值,记为ni;在清洗消毒之后,用同样的方法检测ATP含量(RL.U),重复检测三次取平均值,记为na; 作为阴性对照,用无菌LB液体培养基涂抹在载体上,使用同样方法检测ATP含量,重复检测三次取平 均值,记为noa
GB/36004一2018 清洗消毒对食品接触表面生物量的去除率以百分数表示,并作为食品接触表面清洗消毒效果的评 价结果,按式(1)计算 n一n ×100% n1一n0 式中: 生物去除率; 清洗消毒前ATP测量平均值,RLU; n 清洗消毒后ATP测量平均值,RLU; n -阴性对照的ATP测量平均值,RLU n

食品接触表面清洗消毒效果试验方法三磷酸腺苷生物发光法GB/T36004-2018

随着人们对食品安全的重视，食品加工企业和餐饮行业越来越重视食品接触表面的清洗和消毒。然而，如何评估清洗消毒效果是一个问题。为此，国家标准化管理委员会发布了《食品接触表面清洗消毒效果试验方法三磷酸腺苷生物发光法》（以下简称GB/T36004-2018），为食品接触表面的清洗消毒效果评估提供了一种新的方法。

一、 方法原理

三磷酸腺苷（ATP）是生命体内能量代谢的重要物质之一。该方法利用ATP酶系统催化ATP水解，产生光反应，通过检测ATP的发光强度来评估食品接触表面的清洗消毒效果。

二、 方法适用范围

该方法适用于评估各种类型的食品接触表面的清洗消毒效果，包括金属、塑料、橡胶和陶瓷等材质。同时，该方法还可用于评估不同类型清洗剂和消毒剂对食品接触表面的清洗消毒效果。

三、 实验步骤

1. 取样：在实验前要对待测样品进行随机取样，并记录样品编号。

2. 提取ATP：使用ATP提取液将待测样品中的ATP全面提取出来。

3. 检测ATP：将ATP提取液注入检测仪器中进行检测，并记录检测结果。

4. 计算结果：根据检测结果，计算样品表面的ATP含量并得出清洗消毒效果评价结果。

以上是该方法的基本步骤，具体实验操作细节可参考GB/T36004-2018标准。

四、 结论

三磷酸腺苷生物发光法是一种快捷、准确、灵敏的食品接触表面清洗消毒效果评估方法。采用该方法能够有效地提高食品安全水平，对于保障广大人民群众的身体健康具有重要意义。

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2022/8/18 23:06:38 现行