GB/T37272-2018
尿液中△9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法
Determinationof11-nor-9-carboxy-delta-9-tetrahydrocannabinolinurine—Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod
- 中国标准分类号（CCS）C06
- 国际标准分类号（ICS）11.020
- 实施日期2019-04-01
- 文件格式PDF
- 文本页数8页
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尿液中△9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法
国家标准 GB/T37272一2018 尿液中A-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationof11-nor-g-earboxy-delta-g-tetrahydroeannabinolinurine Liquidchromatography-tandemassspeetrometrymethod 2018-12-28发布 2019-04-01实施 国家市场监督管理总局 发布 币国国家标准化管理委员会国家标准
GB/T37272一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由司法部提出并归口
本标准起草单位;司法鉴定科学研究院
本标准主要起草人:卓先义、向平,刘伟、严慧、沈保华、马栋、施妍、沈敏
GB/T37272一2018 尿液中A-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了尿液中A'-四氢大麻酸的液相色谱-串联质谱(IC-MS-MS)检测方法
本标准适用于尿液中A"-四氢大麻酸的定性分析和定量分析
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GA/T122毒物分析名词术语 术语和定义 GA/T122界定的术语和定义适用于本文件
原理 尿液中A"-四氢大麻酸在碱性条件下水解,然后在酸性条件下用有机溶剂萃取,采用液相色谱-串联 质谱法进行检测
试剂或材料 所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T6682规定的一级水;试剂和材料 包括 正己烧
a 乙酸乙酯
b) 乙晴;HPLC级
c 甲酸;优级纯
d 乙酸;色谱纯
e 冰乙酸;优级纯 20mmol!/L乙酸铵溶液;取乙酸铵1.54g,置1000mL量瓶中,加水适量,加人甲酸2.0mL g 加水至刻度,摇匀
1mol/L氢氧化钠溶液取氢氧化钠4.0g,加水100mL溶解
h) i mol/L盐酸溶液;取浓盐酸20.8mL,加水稀释至250mL 公"-四氢大麻酸对照品溶液;市售100g/ml
甲醇溶液,置冰箱中冷冻保存
保存时间为 12个月
GB/T37272一2018 k A'-四氢大麻酸对照品工作溶液;试验中所用其他浓度的对照品溶液均从上述对照品溶液用甲 醇稀释得到
密封,置于冰箱中冷藏保存
保存时间为3个月
内标物"-四氢大麻酸-d，对照品溶液;市售1004g/mL甲醇溶液,置冰箱中冷冻保存
保存 D 时间为12个月
内标物-四氢大麻酸d对照品工作溶液.将内标对照品溶液用甲醉稀释,配制成104g/ml m 的工作溶液,密封,置于冰箱中冷藏保存
保存时间为3个月
具塞玻璃试管
n 精密pH试纸
o 6 仪器设备 仪器设备包括 液相色谱-串联质谱仪,配有电喷雾离子源(ESI)
a b) 涡旋振荡器 离心机
c 恒温水浴锅
d 精密移液器:10AL一100aL、100aL1000L
e 电子天平
fD 检测步骤 7.1定性分析 7.1.1样品提取 精密量取待测样品尿液1mL,加人1mL的1 mol几氢氧化钠溶液调至pH13.80C水浴中水解 30min n,冷却后加人lml的1nmol/L盐酸溶液调至pH7~8,再加人100AL冰乙酸,调至pH4~5,加 人3mL正已炕:乙酸乙酯(9:1),混旋,离心,吸取上清液,60C水浴空气流下吹干,残留物中加人 200L乙睛;20mmol/儿1乙酸铵溶液(91)定容,取5"L供IC-Ms/MS检测
7.1.2添加样品及空白样品 取空白尿液样品1mL两份，一份添加A-四氢大麻酸工作溶液制得15ng/ml添加样品，一份做 阴性对照,按上述操作与待测样品平行提取和分析
7.1.3仪器检测 7.1.3.1液相色谱-串联质谱仪参考条件 以下为参考条件,按照本法所获得的液相色谱-串联质谱图参见附录A中的图A.1,可根据不同品 牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 a 色谱柱;MGIIC18,34m,50mm×3mm(内径)或相当者; b 柱温:室温; c 流动相;乙晴;20mmol/儿L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液(9:l); d 流速:200AL/ min; 进样量:5AL; e
GB/37272一2018 离子源:ESI,负离子模式 f 离子喷雾电压;4000V; 8 h)离子源温度:450C; 检测方式:多反应监测(MRMD 碰撞气、气帘气等气流值应优化至最优灵敏度 "-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表1
k 表1A'-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对,去簇电压(DP),碰撞能量(CE 名称 定性离子对 定量离子对 DP/V CE/eV 343/299 -28 '-四氢大麻酸 343/299 80 28 343/245 352/308 352/308 -四氢大麻酸-d -80 30 7.1.3.2进样 分别吸取待测样品空白和添加样品提取液,按7.1.3.1条件进样分析
7.1.3.3记录和计算 记录各待测样品及添加样品平行进样后A'-四氢大麻酸的保留时间及峰面积值
在相同的试验条件下,待测样品中出现两对定性离子对色谱峰,其保留时间与添加样品中'-四氢 大麻酸保留时间比较,相对误差在士2.5%内.且相对离子对丰度比与质量浓度相近添加样品中的相对 离子对丰度比之相对误差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在-四氢大麻酸
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许相对误差 相对离子对丰度比 >50 2050 1020 10 允许的相对误差 十20 十25 十30 士50 7.2定量分析 7.2.1样品提取 取待测样品1mL两份,加人10L内标工作溶液,余下同7.1.1
另取空白样品两份,根据待测样品中A"-四氢大麻酸的质量浓度情况添加系列质量浓度的A-四氢 大麻酸,作为添加样品,与待测样品平行操作
待测样品中A'-四氢大麻酸的质量浓度应在工作曲线的线性范围内
7.2.2仪器检测 仪器参考条件同7.1.3.1
7.2.3进样 分别取待测样品、系列质量浓度的添加样品,按7.1.3.1条件进样分析
7.2.4记录与计算 在系列浓度的A'-四氢大麻酸添加样品中,以A'"-四氢大麻酸与内标物定量离子对的峰面积比(Y
GB/T37272一2018 为纵坐标、A"-四氢大麻酸质量浓度(C)为横坐标进行线性回归,得线性方程
根据待测样品中A"-四氢大麻酸及内标物定量离子对的峰面积值,按式(1)计算出待测样品中A"- 四氢大麻酸的质量浓度
A'-四氢大麻酸的线性、准确度和精密度的试验数据参见附录B中的表B.1和 表B.2. 式中 -待测样品中A'-四氢大麻酸的质量浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml); -待测样品中A"-四氢大麻酸与内标物定量离子对的峰面积比 线性方程的截距; 线性方程的斜率
7.2.5平行试验 待测样品同时平行测定两份,双样相对相差按式(2)计算 C ×100% RD= 式中 RD 相对相差; 两份待测样品平行定量测定的质量浓度,单位为纳克每毫升(E C、C g/ml); e 两份待测样品平行定量测定质量浓度的平均值,单位为纳克每毫升(ng/mL)
分析结果评价 8 8.1定性结果评价 8.11阴性结果评价 着添加样品中检出"-四氢大麻酸成分,待测样品中未检出凶"-四氢大麻酸成分,则阴性结果可靠; 若添加样品中未检出'"-四氧大麻酸成分,则阴性结果不可靠
8.1.2阳性结果评价 若待测样品中检出'-四氢大麻酸成分,且空白样品无干扰,则阳性结果可靠;着待测样品中检出 "-四氢大麻酸成分,且空白样品亦呈阳性,则阳性结果不可靠
8.2定量结果评价 若待测样品中A'-四氢大麻酸质量浓度的双样相对相差小于或等于20%,定量数据可靠,其质量浓 度按两份样品的平均值计算
若待测样品中_"-四氢大麻酸质量浓度的双样相对相差大于20%,定量 数据不可靠,应按7.2重新提取检验
8.3检出限和定量下限 本标准尿液中'-四氢大麻酸的检出限为4ng/mL.,定量下限为10ng/mL
GB/T37272一2018 录 附 A 资料性附录 A'-四氧大麻酸的多反应监测(MRM)色谱图 "-四氢大麻酸的多反应监测(MRM)色谱图,见图A.1
Max.2.9e4cps
XxCof-RM(2pairs:343. 丰度 4.66 2.9e4 2.0e4 1.0e4 0.0 1.02.03.04.05.06.07.0 时间/min xcCof-MRM2pairs:343.. Max.2.8e4cps
丰度 4.66 2.8e4 2.0e4 1.0e4 0.0 1.02.03.04.05.06.0 时间/min xICofMRM(2pairs:34. Max.1687.6cps 丰度 4.64 688 500 1000 500 2.03.04.05.06.07.0 时间/min 图A.1尿液中A9-四氢大麻酸的多反应监测(MRM)色谱图
GB/T37272一2018 附 录 B 资料性附录) 线性、精密度和准确度 B.1A'-四氢大麻酸的线性方程和线性范围见表B,1
表B.1线性方程和线性范围 目标物 线性范围/(ng/mL 线性方程 A'-四氢大麻酸 y=0.014r0.004 102000 0.996 B.2A"-四氢大麻酸的添加浓度及其精密度和准确度的试验数据,见表B.2
表B.2A-四氢大麻酸的添加浓度及其精密度和准确度的试验数据 目标物 浓度/ng/mL 精密度(RSD)/% 准确度/% 40 10.7 97.4 A'-四氢大麻酸 100 3.0 105.0 1000 2.6 101.7
尿液中△9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法GB/T37272-2018
随着大麻的合法化趋势，对其含量和成分的监测变得越来越重要。而尿液作为一种常用的生物体液，也被广泛应用于药物检测和临床监测中。因此，确定尿液中四氢大麻酸（THCA）的浓度是很有必要的。
GB/T37272-2018标准规定了一种使用液相色谱-串联质谱法测定尿液中THCA浓度的方法。该方法的原理是：将尿液样品经过前处理后，采用液相色谱-串联质谱仪进行分析。具体步骤如下：
- 步骤1：将尿液样品与内标加入离心管中，经过混合后进行离心。取上清液进一步处理。
- 步骤2：将样品在高速离心下进行前处理，然后蒸干使其变为粉末状，并加入甲醇和乙腈进行萃取。
- 步骤3：采用液相色谱-串联质谱法对样品进行分析，利用气体产生的离子对样品进行碎裂，再根据得到的碎片离子进行检测和定量。
该方法的优点是灵敏度高、可靠性好、准确度高，可以用于监测THCA的浓度范围。但是需要注意的是，在操作时需要严格控制前处理条件，以避免样品发生不必要的污染和损伤。
总之，GB/T37272-2018标准下使用液相色谱-串联质谱法测定尿液中THCA浓度的方法具有很高的可靠性和准确度。这个方法的出现为大麻的监测提供了有效的手段和技术支持。
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