蚊虫抗药性检测方法生物测定法

蚊虫抗药性检测方法生物测定法

国家标准 GB/T26347一2010 蚊虫抗药性检测方法生物测定法 Iesmethodsofmosquto resistaneetoinseetieides一Bioassay meth0ds 2011-01-14发布 2011-05-01实施 卫生部 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T26347一2010 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由卫生部提出并归口 本标准起草单位;人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所、农业大学、北京疾病 预防控制中心 本标准主要起草人:赵彤言、汪中明、董言德、曾晓、高希武、宋锋林、终颖、韩玉华
GB/T26347一2010 蚊虫抗药性检测方法生物测定法 范围 本标准规定了测定蚊虫对有机磷类,氨基甲酸酯类,拟除虫菊酯类等杀虫药剂抗药性的诊断剂量法 和敏感基线法 本标准适用于谈色库蚁(Culexi/piensallens),致倦库蚊(Cr p/piesguinueasciaas),白纹伊 蚊(Aedesalbopicus)中华按蚊(Aopheles.sinensis)等蚊虫抗药性的生物测定 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 敏感基线susceptiblebaselinedata 所测蚊虫的敏感品系对某种杀虫剂的毒力回归线(LDp) 诊断剂量diagnostiedose 由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值(LC丽或 LC Cn.,),一般以2倍LC或LCn.,值区别抗性和敏感种群 F1代F1 1generationm 采集的样本繁殖后的第一代蚊虫 试虫 样本多点采集 幼虫浸溃法采用F1代四龄幼虫 成蚊接触筒法采用野外采集的幼虫或蛹羽化后,3d5d未吸血雌蚊 试剂 丙酮乙醛、白油,杀虫剂原药等 仪器 蚊笼、滤纸、接触简(参见附录A,吸蚊器 测试条件 温度:25C士1C,光周期:l4L:10D,相对湿度:60%~80%
GB/T26347一2010 敏感基线法 7.1原理 依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线 作为敏感基线 以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,来确定待测种群的抗性水 平 具体是比较两条毒力回归线的值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化 7.2操作步骤 7.2.1幼虫浸溃法 每只烧杯量人149mL脱氧自来水 将待测药剂用丙酮等比或等差稀释至一个系列浓度,通过预 实验确定药剂的浓度系列范围,最低浓度时幼虫死亡率小于20%,最高浓度时大于80%,然后吸取 1ml.已配制好的药液滴人水面上,用玻璃棒搅匀,然后把另一杯中预先挑选的幼虫(30只)连同50ml. 水全部注人烧杯内.合计200mL水溶液,整个实验保持在25C士1C,相对湿度60%80%的温室 内,24h后检查死亡数 每个浓度重复3次 以丙酮作为对照 根据每一浓度对应的死亡率,将剂量 取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归,求出IC值 7.2.2成蚊接触法 用白油与乙酵按1:2的配比混合物将待测药剂等比或等差稀释至一个系列浓度,通过预实验确定 药剂的浓度系列范围,最低浓度时幼虫死亡率小于20%,最高浓度时大于80%,取2m每个浓度的药 液均匀涂抹于15.7cm×12.5cm大小的1nmm厚的滤纸上,待溶剂挥发大约5h后,衬垫于圆筒内壁， 做为接触简,用吸蚊管吸取30只羽化后3d5d未吸血雌蚊,放人接触简内,关闭隔板,开始计算接触 时间接触1h后抽开隔板,将蚊虫吹人恢复筒内,取下恢复筒,直立放置,用一浸有8%葡萄糖水的棉花 团置于隔板上的小孔内,24h后记录试虫死亡数 每一个药剂浓度重复3次 以白油与乙腿的混合物 作为对照 根据每一浓度对应的死亡率,将剂量取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归,求出 LC值 7.3死亡判断 7.3.1 幼虫浸法 轻轻触动幼虫,以不能逃避刺激视为死亡 7.3. 成蚊接触法 .2 试虫完全不动视为死亡 7.4结果表述 结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC值/敏感种群IC值 7.5判别标准 敏感品系和所测样本之间95%置信限不重叠，且抗性倍数>5倍为抗性种群
GB/T26347一2010 诊断剂量法 原理 依据杀虫剂对敏感品系的毒力回归线,确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂 量 一般用2倍敏感品系的1c,值作为诊断剂量 根据待检测蚊虫种群在诊断剂量下的死亡率作为 抗性判定标准 8.2操作步骤 8.2.1幼虫浸溃法 取1mL已配制好的药液加人盛有149m脱氯自来水的烧杯中,用玻璃棒搅匀 把另一杯中预先 挑选好的30条幼虫连同50mL水,全部注人上述烧杯内,合计200m溶液，使药剂的终浓度达到诊 断剂量常用杀虫药剂对淡色库蚊幼虫的诊断剂量参见表B.1) 以1mL 相应溶剂处理为对照组 24h后记录死亡数 实验重复3次 8.2.2 成蚊接触法 药剂用白油与乙哒混合物(配比1:2)稀释至诊断剂量浓度(常用杀虫剂对成蚊的诊断剂量参见 表B2和表B3),取2ml药液均匀涂抹于15.7 cm×12.5cm大小的1mm厚的滤纸,待溶剂挥发5h 后,将滤纸衬垫于接触筒内壁,用吸蚊管吸取30只羽化后3d一5d未吸血雌蚁,放人接触筒内,关闭隔板， 开始计算接触时间接触1h后抽开隔板,将蚊虫吹人恢复筒内,取下恢复筒,直立放置,用浸有8%葡萄糖 水的棉花团置于纱网上,24h后记录试虫死亡数 实验重复3次,以白油与乙酥的混合物作为对照 8.3结果表述 结果用死亡率表述,见公式(1) M=×100% 式中 M 死亡率; N 死亡虫数 试虫总数 N 对照死亡率小于5%无需校正;对照死亡率在5%20%之间,用Abbott公式进行校正;对照死亡 率大于20%为无效测定 依据Abbott公式校正死亡率,见公式(2). M一M M = 上×100% T一M 式中: M -校正死亡率; M -处理组死亡率; M. -对照组死亡率 8.4判别标准 在诊断剂量下蚁虫的死亡率在98%一100%表明其为敏感种群;死亡率在80%一97%表明其为可 能抗性种群;死亡率<80%表明其为抗性种群
GB/T26347一2010 附 录A 资料性附录 世界卫生组织(wHo)推荐使用的接触筒 每两个筒组成一套.一个用浸药滤纸衬垫于其内壁作为接触筒,另一个作为蚊虫接触药纸后恢复饲 养的恢复筒 两个简用有机玻璃制成,筒长12.5cm,直径5em,一端用尼龙纱封口,另一端有几圈外螺 纹 两个筒由一白色不透明的有机玻璃方隔板连接,隔板边长77cm,厚约0.5cm,中间有直径5cm的 圆孔和高1cm的边圈(有内螺纹),隔板中间装有1块活动抽板,抽板长15cm,开有直径4.5em的圆 孔，拉动抽板可使隔板两侧的圆筒封闭或打通 参照示意图见图A.1 抽板 恢复筒 按触简 纱4 纱网 隔板 125 125 注1;图中尺寸单位为mm,材料为俐化有机玻稍璃 注2:主要做法;接触简和恢复简一端为1mm钢丝纱网，一端与隔板相连接,通过内外丝与简连接;抽板夹在隔板 中间 抽板高150mm,宽6o 下部预留直径45mm、 回孔 mm， 15mm 图A.1成蚊接触筒示意图
GB/T26347?2010 ?B ?? ?ó? B.1B.1?????? B.1????? ? LCa/g/L LCn/g/L ?/g/I ? 1.1510 1.8010 5.0010 6.0010" 4.30X10 5.00X10 ? 3.9X10" 8,5010" 4.0010 7.9610- 2.3310- 1.0010- Ч? ? 4.98X10 7.1710- 2.0010- ? 4.871o 1.3810 3.0010 ?:????????воó????,???20033? B.2B.2????ó?? B.2???ó?? ?/(g/I ? lCn/g/L) LC/g/L b?SE еη 0.78 0.l11 1.51?0.20 7.7 0,046 0.328 1.49?0.22 ? 3.3 0.18 0.28 6.97?1.04 0.79 ?? Ч? 0.0089 0.038 2.04?0.40 0.25 ? 0.0047 0.0236 1.83?0.22 ?:????????воó????,???20053? B.3B.3wHo???,ú?ó?? B.3WIHO???áú?ó???1h) λ?& ? ? " DDT 40.0 40" 40.0" 1o ? 10.0 50.0 8.0 50.0 1.0 ? 1.0 1.0 1.0 ? 1.5 ? 0.5 0.25
GB/T26347一2010 表B3(续) 单位为g/儿 杀虫剂 埃及伊蚊 致倦库蚊 按蚊" 酰菊前 5.0 0.25 高效氯氟瓠菊醒 0.50" 0.3 二氯苯酵菊酯 7.5 2.5 我国主要是中华按蚊、嗜人按蚊、大劣按蚊和微小按蚊 接触30min 接触时间4h Anopheles.sacharowi的接触时间2h 接触时间2h

蚊虫抗药性检测方法生物测定法GB/T26347-2010

蚊虫抗药性是指蚊虫对化学除虫剂产生的耐药现象，是目前世界上防控疟疾、登革热等传染病的主要障碍之一。因此，建立一种准确、可靠的蚊虫抗药性检测方法对于传染病防控至关重要。

生物测定法GB/T26347-2010概述

生物测定法是一种常见的蚊虫抗药性检测方法，其主要原理是通过测定在药物作用下蚊虫的死亡率来判断蚊虫对药物的敏感性。生物测定法GB/T26347-2010是我国针对蚊虫抗药性检测制定的标准，该标准规定了蚊虫抗药性检测方法的基本流程和实验指导原则。

试验方法

生物测定法GB/T26347-2010中规定了以下试验方法：

• 1. 筛选蚊群：选择符合标准的蚊种，建立一份容易复制、可重复的筛选方案。
• 2. 药品溶液配制：按照给定的方法和浓度配制药品溶液。
• 3. 实验设计：确定试验组和对照组，每个组设立多个剂量处理。
• 4. 蚊虫保存：将蚊虫保存在稳定的环境中，以保证其状态不受影响。
• 5. 药物接触：将蚊虫暴露于药物溶液中，控制接触时间。
• 6. 死亡记录：记录在规定时间内死亡的蚊虫数目。
• 7. 数据分析：根据实验结果进行数据统计和分析，评估蚊虫对药物的敏感性。

注意事项

在进行蚊虫抗药性检测时，需要注意以下事项：

• 1. 严格按照生物测定法GB/T26347-2010的要求进行操作。
• 2. 确保蚊虫状态与试验前相同。
• 3. 控制实验条件的一致性。
• 4. 选择合适的药品浓度，确保实验结果准确可靠。
• 5. 对实验过程中出现的问题及时处理。

通过以上步骤的试验，可以得到蚊虫对药物的敏感性，为传染病防控提供依据，以保障人民身体健康和生命安全。

结语

蚊虫抗药性严重影响了传染病的防控效果，因此建立一种准确、可靠的检测方法对于传染病防控至关重要。生物测定法GB/T26347-2010是一种常见的检测方法，可以帮助人们更好地评估蚊虫对药物的敏感性。在进行试验时，需要严格按照标准要求进行操作，并注意实验过程中的各项细节。

蚊虫抗药性检测方法生物测定法的相关资料

和蚊虫抗药性检测方法生物测定法类似的标准

GB/T26348-2010

蚊虫抗药性检测方法不敏感乙酰胆碱酯酶法

2022/11/6 20:32:08 现行

GB/T26347-2010

蚊虫抗药性检测方法生物测定法

2022/11/6 20:28:30 现行