动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定免疫亲和-液相色谱法

动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定免疫亲和-液相色谱法

国家标准 GB/T21321一2007 动物源食品中阿维菌素类药物 残留量的测定 免疫亲和-液相色谱法 Determinationofavermectinsresiduesinfo0dstuffsofanimalorigin- Immumattinity-highperformaneeliquidcehromatwgraph 2007-10-29发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21321一2007 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位:农业大学、检验检疫科学研究院 本标准主要起草人:沈建忠、张素霞、李建成、曹兴元、王战辉、李晓薇、丁双阳,吴聪明、彭涛、国伟
GB/T21321一2007 动物源食品中阿维菌素类药物 残留量的测定 免疫亲和-液相色谱法 范围 本标准规定了动物源食品中阿维菌素类药物残留量检测的免疫亲和-液相色谱法 本标准适用于牛肝脏和牛肌肉组织样品中阿维菌素、伊维菌素,多拉菌素和埃普利诺菌素残留量的 测定 本标准的方法检测限;阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和埃普利诺菌素均为14g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992. 2,neqIsO3696;1987) 原理 用甲醇提取试样中四种阿维菌素类药物,经免疫亲和色谱柱净化,用甲醇洗脱 洗脱液经氮气吹 干,衍生化后,用高效液相色谱-荧光检测法测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 甲醇色谱纯 4.2乙睛色谱纯 43磷酸二氢钾 44氧化娜 45磷酸氢二钠(NaHPO.12H.o) 4.6氯化纳 乙酸 4.81-N-甲基咪幽;含量>99% 4.9埃普利诺菌素标准品;纯度>98% 4.10阿维菌素标准品;纯度>98% 411多拉黄素标准品纯度多9.3% 4.12伊维菌素标准品;纯度>98% 4 13 免疫亲和色谱柱(IAC柱);长4cm,内径1cm,IAC凝胶体积为1ml 4.14组织稀释液:0.01mol/几磷酸盐缓冲液(pH7.4) 称取磷酸二氢钾(4.30.2g、氯化钾(4.4 0.2g,磷酸氢二钠(4.5)2.9g,氯化钠(4.6)8.8g,用水溶解并稀释至1L 4.15洗涤液:A液、B液和C液 A液为0.01mol/L.磷酸盐缓冲液(4.l4)十甲醇(80十20,体积比). B液为20%甲醇溶液;C液为50%甲醇溶液
GB/T21321一2007 16衍生化A液:1-N-甲基咪陛十乙睛(2+5,体积比),现配现用 4. 4.17衍生化B液:乙酸酥+乙睛(3十4,体积比),现配现用 4.18埃普利诺菌素,阿维菌素,多拉菌素和伊维菌素标准储备液:l004g/ml 准确称取适量埃普利 诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品(4.94.12),分别用乙腊配成1004g/ml.的标准储备 液 一20C保存六个月 'ml 取四种标准储备液(4.18)各1.0ml于10mL容量瓶中,用乙腊 4.19混合标准储备液:14g/ 溶解并稀释至刻度,4C保存三个月 4.20标准工作液:分别量取适量上述混合标准储备液(4.19),用乙睛稀释成浓度为1、5、10、2050 100和200ng/ml的系列标准溶液 仪器 5.1高效液相色谱仪;配荧光检测器 5.2组织匀浆机 5.3离心机 5.4旋转蒸发仪 5.5涡动仪 5.6氮吹仪 5.7恒温加热器 试样制备与保存 取新鲜或解冻的动物组织,剪碎,10000r/min匀浆1min -20C下保存 分析步骤 提取 称取试样1g(精确到0.01g),于30mL 离心管中，加4mL甲醉,涡动1nmin,300r/min振荡 30mim.300，/min离心10min.取上请液 残用4mL甲醉重复提取1次.合并两次提取液 7.2净化 提取液中加20ml组织稀释液(4.14),涡动混合均匀后,过1AC柱,自然重力下流出,依次用洗涂 液A液20mLB液15ml和C液3mL(4.15)洗涤,用4ml甲醉洗脱于试管中,0C氮气吹干 7.3衍生化 试样残渣中加1o0L衍生化A液(4.16),涡动0.5min,再加100衍生化B液(4.17),涡动 0.5min,密闭,于96C恒温箱中衍生化反应100min 取出,冷却至室温 用乙晴稀释至2.5ml.,过 am滤膜,进行PLc分析 0.2 注;标准溶液经氮气吹干后同法进行衍生化操作 测定 液相色谱条件 色谱柱:C,250mm×4.6mm,粒径5pm,或相当者 流动相:甲醇水(97+3,体积比). 流速:1lml/min 柱温:30C 进样量;20AlL 激发波长:365" nm 发射波长:4751 nm
GB/T21321一2007 7.4.2液相色谱测定 分别取适量衍生化后的试样液和标准工作液进行液相色谱测定,做单点校准或多点校准,以色谱峰 的峰面积积分值定量 标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之 内 试样液测定过程中应参插标准工作液,以便准确定量 标准品液相色谱图见附录A 结果计算 按式(1)计算试样中阿维菌素类药物的含量 c× X= N 式中: 试样中阿维菌素类药物的残留量,单位为微克每千克(ug/kg); -试样液色谱峰对应的阿维菌素类药物浓度,单位为微克每升(4g/L) 稀释倍数; 试样质量,单位为克(g) n 注:测定结果用平行测定后的算术平均值表示,计算结果表示到小数点后两位 精密度 本方法的批内变异系数<20%,批间变异系数<30%
GB/T21321?2007 ? A ?? ? mm 5.40 3.60 .80 a.00 min 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 EP ? AVM ?; D(OR -; IVM ?? ?A.12ug/L???????