蜂王浆中17种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

蜂王浆中17种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T23411一2009 蜂王浆中17种憧诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofresiduesof17quniolonesinroyaljelly LC-Ms/MSmethod 2009-03-28发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23411一2009 前 言 本标准的附录A,附录B附录C和附录D为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:丁涛,徐锦忠、吴斌、刘艳、张婧、郭玲、蒋原、陶宏锦
GB/T23411一2009 蜂王浆中17种呸诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了蜂王浆中恩诺沙星简称ENR,下同),环丙沙星简称CIP,下同),诺氟沙星简称 NOR,下同),氧氟沙星(简称OFL,下同),双氟沙星简称DIF,下同),氟甲简称FLU,下同,沙拉 沙星(简称SAR,下同),司帕沙星简称SPA,下同)，丹氟沙星简称DAN,下同),氟罗沙星简称 FLE,下同,马波沙星(简称MAR,下同),伊诺沙星(简称ENO,下同),奥比沙星简称ORB,下同),毗 崛酸(简称PIP,下同),培氟沙星(简称PEF,下同),洛美沙星(简称LOM,下同)和茶酸(简称NAL 下同17种唾诺酮残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法 上述17种畦诺酮类药物中英文名称、结 构式,CAs号和相对分子质量参见附录A 本标准适用于蜂王浆中瞠诺酮类残留量的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISO3696;1987,MOD) 方法提要 蜂王浆样品用氢氧化钠溶液溶解后,阴离子交换柱富集和净化,利用液相色谱-串联质谱仪测定,优 化选择二级质谱碎片,内标法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 甲酸(85%. 4.1 4.2甲醇;HPLC级 4.3氢氧化纳 4.4阴离子交换柱(PAXY):500mg,6mL,或相当者 4.5咋诺酮类标准品;ENR,CIP,NoR,oFL、,DIFHCI,sARHCI,sPA,DAN、,FLU、FLE、MAR、 ENo.ORB,PIPPEF、LOM和NAL,纯度>99% 尔代诺氟沙星(简称NOR-D,下同)纯度>99%. 4.6 /ml 准确称取适量的唯道副类标准物质(A.),用甲醉(.2)溜 唾诺酮类标准储备溶液;l.0 mg 液配成1.0mg/mL的标准储备液 储备液贮存在4C冰箱中,可保存6个月 畦诺酮类标准工作溶液;用甲醉-水(2十8,体积比)分别配成浓度范围为1ng/ml一50ng/ml标 准工作溶液,其中内标为50ng/ml,现配 4.9内标溶液(NOR-D.):用甲醉(4.2)配制浓度为14g/mlL内标溶液,内标溶液在4C保存 4.10氢氧化钠溶液(0.1mol/IL);取4g氢氧化钠,溶解于1L水中 4.11甲酸-甲醇溶液(5十95,体积比):取5mL甲酸(4.1),溶解于95mL甲醇(4.2)中
GB/T23411一2009 4.12甲醇-水(2十8,体积比);量取20mL甲醇(4.2)于80mL水中,混合均匀 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪;配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量0.lmg和0.01g各一台 5.3固相萃取装置 5.4旋转蒸发仪或相当者 5.5涡旋混匀器 5.6真空系;真空度不低于80kPa 5.7高速离心机转速不低于6000r/min. 5.8移液器 5.9塑料管;50mL 5.10滤膜:有机相,0.45 m 试样的制备与保存 试样的制备 将实验室样品搅拌均匀,分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样品瓶中,密封并做上标记 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留含量变化 6.2试样的保存 将试样于冷冻状态下保存(一18C) 测定步骤 提取 准确称取2g蜂王浆(精确到0.01g)试样,置于50ml具塞离心管中.准确加人同位素内标溶液 (4.9)50L,涡旋10s,加人10ml氢氧化钠溶液(4.10),涡旋1nmin,8000r/min高速离心5min,过 滤于干净的50mL离心管中 用6mL甲醇、6ml水活化固相萃取柱(4.4),将样品滤液过柱,再用 6mL水洗涤固相萃取柱,抽近干,6ml 甲酸-甲醇(4.11)洗脱,收集洗脱溶液 40C水浴旋转蒸发干 用甲醇-水(4.12)1.0mL定容,过滤到进样瓶中,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.2测定 7 .2.1液相色谱条件 n色谱柱;Ca.3Am.150mmX2.1mm(内径)或相当者 b) 流动相甲醉十0.1%甲酸水溶液; e)流速;0.20mL/min: d 梯度洗脱程序:参见附录B; e)柱温;室温 f 进样量:25L 7 .2. .2 串联质谱条件 参见附录C 7.3液相色谱-质谱测定 7.3.1定性测定 进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图 中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准品谱图相比,最大允许相对偏差不超过 表1中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物
GB/T23411一2009 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%50% >10%一20% 10% 士20% 士50% 允许的相对偏差 士25% 士30% 7.3.2定量测定 标准工作溶液(4.8)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样,以标准与内标物峰面积比值为纵 坐标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制标准工作曲线(Ing/ml一50ng/mL),用标准工作曲线对 样品进行定量,样品溶液中唾诺酮类的响应值均应在仪器测定的线性范围内 在上述色谱条件下,其相 应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D. 空白试验 除不加人试样外,按上述(7.1一7.3)步骤进行 结果计算 结果用色谱数据处理机或按式(1)计算 ×m C ×m 式中: -样品中吮诺酮类药物的浓度,单位为微克每千克(ug/kg); -样品中呤诺酮类药物的峰面积与相应内标峰面积比值 A 瞠诺酮类药物标准的质量,单位为纳克(ng): mm 标准品中吮诺酮类药物的峰面积与相应内标峰面积比值 样品质量,单位为克(g). n 检测低限、回收率范围和精密度 本标准中蜂王浆中17种畦诺酮类药物测定低限为2.54g/kg 蜂王浆中睡诺围类药物漆加浓度及回收率范围(内标校正)的试验数据(n=10 添加水平为2.54g/kg,17种唾诺酮类回收率范围为67%113% 添加水平为5.0g/kg,17种幄诺酮类回收率范围为65%107%; 添加水平为l0.04g/kg,l7种畦诺酮类回收率范围为64%103%. 在2.5g/kg、,5.04g/kg和10.04g/kg添加水平上,相对标准偏差(RSD)为4.0%~6.0%.
GB/T23411一2009 附 录A 资料性附录 隆诺酮类药物及其代谢物中英文名称化学结构式,CAs号和相对分子质量 表A.1哇诺酮类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量 序号中文名称/英文名称/简称 化学结构式 相对分子质量 CAS号 恩诺沙星 OH 359 93106-60-6 Enrofloxaein ENR H 环丙沙星 OH Ciprofloxacin 331 85721-33-l (cIPy 诺氟沙星 OH Norfloxacin 319 70458-96-7 NOR CH 氧氟沙星 82419-36-1 Ofloxacin 361 (OFL HO 氟甲吮 OH Flumequine 261 42835-25-6 FLU CH OH 双氟沙星盐酸盐 DifloxaeinHC 436 98106-17-3 HC HCI
GB/T23411?2009 A.1) /?/ ??? ? CAS OH ?? SarafloxacinHCl 422 98105-99-8 HN (SARy ?? 3922 10871-86-8 Sparfloxacin H,C (SPA NH OH OH ?? Danofloxaein 357 112398-08-0 DAN OH ? 10 Fleroxcain 369 79660-72-3 FLE H.C ? OH 11 362 Marbofloxacin 115550-35-]l MAR NH ?? 12 Enoxacin 320 7401l-58-8 HO ENOo
GB/T23411一2009 表A.1续) 序号中文名称/英文名称/简称 化学结构式 相对分子质量 CAS号 OH 奥比沙星 13 Orbiloxaein H,C 395 13617-63-3 N (ORB CH 毗噪酸 14 303 51940-44-4 Pipemidicacid PIP HO,C' 培氟沙星 15 Pefloxacin 333 70458-92-3 PEF Me CO.H 洛美沙星 6 L.omefloxaein 351 98079-51-7 I LoM Co.,H 酸 Me 17 Nalidixicacid 232 389-08-2 NAL CO,H
GB/T23411一2009 B 附 录 资料性附录 流动相梯度洗脱程序 表B.1流动相梯度洗脱程序 时间/minm 甲醇/% 0.1%甲酸水溶液/% 0.00 10 90 2.00 10 90 90 4.00 10 8.00 90 10 9.00 10 90 12.00 10 90
GB/T23411一2009 附 录 c 资料性附录 质谱/质谱条件及选择离子参数设定表 离子源;电喷雾离子化电离源(ESI).正离子监测 扫描方式;选择离子检测SRM): 雾化气、鞘气为高纯氮气,碰撞气为高纯氯气; 喷雾电压:4100V; 加热毛细管温度;350C 表C.1选择离子参数设定表 母离子 定量离子 定性离子 碰撞电压/ 序号 测定物质 m/2) m/z m/2) 316 7 ENR 360 316 3 245 31 CIP 332 231 34 288 76 NOR 320 276 302 261 35 OFL 362 261 318 26 299 31 DIF 400 299 382 26 299 31 386 299 SAR 368 23 292 24 SPA 393 292 22 375 34o 23 DAN 358 340 27 283 202 29 FLU 262 202 18 244 326 21 10 FLE 370 326 16 332 72 21 nm MAR 72 363 345 14 232 35 ENo 12 321 232 303 18
GB/T23411一2009 表C.1续) 碰撞电压 母离子 定性离子 定量离子 序号 测定物质 m/z2 m/2) m/2) 352 19 ORB 13 396 352 295 25 217 30 14 PIP 304 217 189 22 233 25 15 PEF 334 233 290 20 308 30 l6 352 308 LOM 334 22 187 28 17 NAL 187 233 215 24 18 325 18 NOR-D 281 281
GB/T23411一2009 D 附 录 资料性附录 隆诺酮类药物及其内标离子流色谱图 8.48 8.43 8,14 100 1007 100] DIF400>299 ENO321>232 LMO352>308 50- 50-1 50- 8.6 8.38 9.6 100 00 1007 NAL233>187 50 0- SAR386>299 50. CTP332>231 O 8.76 9,0 B.4 100 100] 50- OFL362>261 50- 50- SPA393>292 FlLU262>202 8.39 8.33 100 100 100] 激" ENR360>316 50- 50 ORB396>352 50- DAN358>340 8.04 G .82 8.32 100 100] 0- LE370>326 PIP304>189 50- NOR320>276 50. .93 83 8,I8 100- 00 100] NOR-D325>281 50- 50 50- MAR363>72 PEF334>233 10 10 10 lmin lmin lmin 图D.1呸诺酮类药物及其内标离子流色谱图 10