GB/T40267-2021
植物源产品中左旋多巴的测定高效液相色谱法
DeterminationofLevodopainplantderivedproducts—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）A40
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2021-12-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
- 文件大小430.89KB
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植物源产品中左旋多巴的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T40267一2021 植物源产品中左旋多巴的测定 高效液相色谱法 DetermnationofL.eodopainplantderivedproducts- Highperformaneeliquidchromatography 2021-05-21发布 2021-12-01实施 家市场监督管理总局 国 发布 国家标准花管委员会国家标准
GB/40267一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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GB/T40267一2021 植物源产品中左旋多巴的测定 高效液相色谱法 范围 本文件描述了植物源产品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法
本文件适用于蚕豆(ViciafabaL.,狗爪豆[Sizolobiwmcochinchinensis(Lour.)Tangetwang]、 常春油麻藤(MucumasemerirensHemsl.)等植物源干样品中左旋多巴含量的测定
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义
原理 试样用2%(体积分数)盐酸溶液超声提取后,经反相色谱柱分离,紫外(或二极管阵列)检测器检 测,以保留时间定性,采用外标法定量
试剂或材料 S 5.1试剂 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水
5.1.1磷酸氢二钾(K,HPO
3H,O);优级纯
5.1.2盐酸(HCl)
5.1.3磷酸(H,PO) 5.1.4甲醇(CH,OH);色谐纯
5.2溶液配制 5.2.12%(体积分数)盐酸溶液;取盐酸20mL,加水至1L
5.2.210mmol/几磷酸氢二钾溶液称取磷酸氢二钾2.3g,加水950mL溶解,加磷酸调节pH7.0,再 用水稀释至1L
GB/T40267一202 5.3标准品 左旋多巴标准品:纯度>99%;分子式:C,HNO.;CAs号:59-92-7
5.4标准溶液配制 标准储备液;称取左旋多巴标准品约20mg(精确至0.1mg),用2%(体积分数)盐酸溶液溶解并 5.4.1 定容至10mL,配制成质量浓度为2000mg/L的左旋多巴标准储备液,于4C下保存备用,有效期为 1个月
5.4.2标准中间液;准确移取标准储备液2.5mL于100mL容量瓶中,用2%体积分数)盐酸溶液稀 释定容,摇匀,配制成质量浓度为50.0mg/L的标准中间液 5.4.3低浓度标准工作溶液;分别准确移取适量标准中间液,用2%体积分数)盐酸溶液稀释配制成质 量浓度为0.500mg/L1.25mg/IL2.50mg/L5.00mg/L、l0.0mg/L、15.0mg/L、30.0mg/1的低浓 度标准工作溶液,现配现用
高浓度标准工作溶液;分别准确移取适量标准储备液用2%(体积分数)盐酸溶液稀释配制成质 5.4.4 量浓度为30.0mg/L,50.0mg/L、,100mg/L,200mg/L,500mg/儿L,700mg/L1000mg/L的高浓度标 准工作溶液,现配现用
5.5材料 微孔滤膜(水相)孔径0.454m
6 仪器设备 高效液相色谱仪;配紫外检测器(UV)或二极管阵列检测器(DAD). 6.1 6.2分析天平;感量0.01mg和0.0001g
6.3超声波发生器;功率250w,工作频率40kHz
6.4离心机;转速不低于800og
6.5 酸度计;精度为0.o1个pH单位
6.6涡旋混匀器
6.7电动粉碎机
样品 取蚕豆、狗爪豆、常春油麻藤等样品约250g,用电动粉碎机粉碎,过3554m士134nm内径筛,混匀 制备好的试样均分成两份,装人洁净的盛样容器内,密封并标识,于室温、密封、避光保存
试验步骤 8 8.1试样处理 称取试样1g(精确至0.001g)于50ml具塞离心管中,加人10ml2%<体积分数)盐酸溶液,涡旋 混匀后超声提取30min,间隔15min摇匀一次,然后在8000(×g)下离心5min,将上清液转移至
GB/T40267一2021 25mL容量瓶中
残渣再用10mL.2%体积分数)盐酸溶液重复提取一次,合并两次提取液,用2%体 积分数)盐酸溶液定容,摇匀,过0.454m微孔滤膜,待测
8.2测定 8.2.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下所示: 色谱柱;C色谱柱,4.6mm×250mm,粒径5m,或性能相当者 a 流动相甲醇-10mmol/L磷酸氢二钾溶液 5 95; 流量:0.7mL/ min; 柱温;20C; d 进样量:10AL; 检测波长:;280nm
8.2.2标准工作曲线的制作 依据试样中左旋多巴的含量选择合适质量浓度范围的标准工作溶液由低到高浓度依次进样分析
以左旋多巴色谱峰面积为纵坐标,溶液质量浓度为横坐标,绘制标准工作曲线
标准工作溶液色谱图见 附录A中图A.1
8.2.3样品测定 将试样溶液注人高效液相色谱仪,依据保留时间定性,记录峰面积,根据标准工作曲线得到试样溶 液中左旋多巴的质量浓度,应使试样溶液中左旋多巴的质量浓度在标准工作曲线质量浓度范围内,超过 标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样分析
典型样品溶液色谱图见图A.2 8.3平行试验 按8.1和8.2的规定对同一试样进行两次平行测定
试验数据处理 试样中左旋多巴的含量按照式(1)计算 pXV×/×10-《×100 7 mn 式中 试样中左旋多巴含量,单位为克每百克(g/100g); Z0" 由标准工作曲线得到的试样中左旋多巴质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); 试样定容体积,单位为毫升(mL) -试样溶液稀释倍数; 试样称样量.单位为克(e 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字
GB/T40267一202 10精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%. 1 其他 本方法测定左旋多巴的检出限为0.000275g/100g,定量限为0,00110g/100g
GB/40267一2021 A 附 录 (资料性 高效液相色谱图 左旋多巴的标准工作溶液色谐图见图A.1,典型样品溶液色谱图见图A.2
mAU mAU 40o 400 300 300 6.58 200 200 100 100 6.58 /minm 1/min 图A.1左旋多巴标准工作溶液色谱图 图A.2蚕豆样品溶液色谱图
高效液相色谱法测定植物源产品中左旋多巴
HPLC技术是一种常用的分析化学方法，广泛应用于食品、药品、农产品等领域。在植物源产品中，左旋多巴是一种重要的生理活性成分，具有多种药理作用，特别是对神经系统疾病的治疗作用。因此，准确测定植物源产品中的左旋多巴含量对保证其药效和质量具有重要意义。
GB/T40267-2021标准规定了一种测定植物源产品中左旋多巴含量的HPLC方法。该方法采用反相色谱柱进行分离，以甲醇-水为流动相，在紫外检测器下检测左旋多巴峰，并与标准品比较计算含量。
具体操作步骤如下：
- 样品的制备。将粉碎的植物源产品样品加入甲醇水混合溶液中，在70℃下超声提取30分钟，离心后取上清液进行下一步分析。
- 色谱条件设置。采用C18反相色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）进行分离，以甲醇-水（含0.1%甲酸）为流动相，洗脱时间为25分钟，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm。
- 构建标准曲线。将左旋多巴标准品按不同浓度稀释后进行HPLC分析，绘制标准曲线，计算出回归方程和相关系数。
- 样品测定。将制备好的样品注入HPLC系统进行分析，根据回归方程计算出样品中左旋多巴的含量。
该方法简单、快速、准确、重复性好，并且可以适用于各种类型的植物源产品。因此，该方法是测定植物源产品中左旋多巴含量的一种可靠的选择。
