过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法

过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法

国家标准 GB/T33417一2016 过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法 Iestmethodofbiologiealindieatorforhydrogenperoxidevapour sterilizationprocesses 2016-12-30发布 2017-07-01实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T33417一2016 过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法 范围 本标准规定了过氧化氢气体灭菌生物指示物的检验方法 本标准适用于过氧化氢气体灭菌生物指示物的检验 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 医疗保健产品灭菌生物指示物第1部分;通则 GB18281.1 GBT24828医疗保健产品灭菌生物与化学指示物测试设备 卫生部 消毒技术规范(2002年版 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 生物指示物biologiealindieator;BI 对指定条件下的特定灭菌程序具有一定抗力,并装在内层包装中可供使用的染菌载体 3.2 过氧化氢气体灭菌hydrogenperoxidevapoursterilization 以汽化的过氧化氢作为主要杀灭微生物因子的灭菌方式 3.3 载体 carrier 试验微生物的支持物 3.4 存活时间survivaltime;ST 测定生物指示物抗力时,受试样本经杀菌因子作用后,全部有菌生长的最长作用时间 3.5 杀灭时间killingtime;KT 测定生物指示物抗力时,受试样本经杀菌因子作用后,全部无菌生长的最短作用时间 3.6 D值Dvaue 杀灭微生物数量达到90%所需要的时间 自含式生物指示物 self-containedbiologiealindicator 含有微生物复苏生长所需培养基的生物指示物
GB/T33417一2016 3.8 生物指示物抗力测试仪biologiealindicatorevaluatorresistommeter 产生限定条件下灭菌过程中物理变化规定组合,以测量抗力的专用设备 检验指标与方法 4.1抗力 4.1.1菌种 用于制作过氧化氢气体灭菌生物指示物的菌株为嗜热脂肪杆菌芽袍(Geucilws ueurohermphilas ATCC7953或ssIK31)或被证明具有本标准所要求的同等性能的微生物 4.1.2菌量 回收菌量大于或等于1×10°CFU/片,对于成品的指示物,载体回收的菌量与说明书上的菌量误差 在一50%十300%之间 测定菌量时,应最少测试4个样本,具体检测方法参见附录A 4.1.3D值 测试时应使用生物指示物抗力测试仪,生物指示物抗力测试仪要求见GB/T24628 在使用浓度 为59%士2%过氧化氢,灭菌舱内作用浓度为2.3mg/1士0.4mg/L,作用温度50C士0.5C的条件下 D值的要求为0.75“一8s，对于成品的生物指示物,测试的D值应在说明书上的D值士20%范围内 应使用下列2种方法进行测试: a)部分阴性法测试D值,参见附录B 验证法测试D值,将a)测试出的D值和4.1.2的回收菌量的平均数带人式(1)和式(2),计算 b 出ST值和KT值 参见附录C sT>(logN 一2)×D值 2 KTGB/T33417一2016 4.4稳定性试验 取包装完好的同批次生物指示物放置于制造商建议的保存条件下,存放至标签和说明书规定的有 效期限,取出再次进行评价,生物指示物应符合4.1、4.2和4.3的要求
GB/T33417一2016 附 录A 资料性附录 活菌培养计数方法 A.1取含有10mLTPs(0.1%胰蛋白陈的生理盐水溶液)的无菌试管,加人适量无菌玻璃珠,将计数菌 片投人试管,用电动混合器混合,到菌片被完全打碎,制成菌悬液 A.2将试管按需要数量分组排列于试管架上,每管加人4.5mLTPS 各组由左向右,逐管标上10-、 10'、,10-等 A.3将菌悬液样本用电动混匀器混合20s,或在手掌上用力振打80次,随即吸取0.5ml 加至10-" 管内 A.4将10管依前法用电动混匀器混合20s,或在手掌上用力振打80次,混匀,再吸取出0.5mL加 人10-"管内 如此类推,直至最后一管 必要时,还可作某稀释度的1:1或1:4稀释 A.5选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为15CFU300CFU者为宜),吸取其中混合均 匀的悬液1.0mL加于无菌平皿内 -稀释度接种2个平皿 一般需接种2个3个不同稀释度 每 A.6将熔化的40U C嗜热脂肪杆菌芽袍恢复培养基,见《消毒技术规范(2002年版)》,倾注于已 L20mL 加人样液的平皿中,每平皿15 ml 将平皿盖好,即刻轻轻摇动混匀,平放 待琼脂凝固后,翻转平皿使底向上,置56C士2C恒温培 养箱内培养 A.8培养至72h,计数菌落数 一般以肉眼观察,必要时用放大镜检查 以每平板菌落数在30CFU 300CFU的稀释度为准记录结果 A.9根据稀释倍数和接种量计算每毫升菌液中或每一菌片(染菌载体)上的平均菌落数
GB/T33417一2016 B 附 录 资料性附录 部分阴性法计算D值 B.1随机选取120个样本 分成6组,每组20个样本 B.2生物指示物抗力测试仪设置如下 a)暴露温度:50C士0.5C; b 暴露剂量:2.3mg/L士0.4mg/L 暴露时间至少为6个时间点,至少1个时间点全部有菌生长,至少2个时间点部分有菌生长 至少2个时间点全部无菌生长 B.3对6组样本分别暴露 B.4暴露完成后将6组生物指示物在56C士2C温度下,按照说明书要求培养到规定时间,记录阴性 和阳性结果 当最短暴露时间点全部为阳性,最长的2个暴露时间全部为阴性,并且中间至少2组有部 分样本阳性,试验结果有效,带人式(B.1)和式(B.2)计算D值 B.5部分阴性法(Li .mitedSpearman-Karber法)D值的计算见式(B.1),式(B.2). U1sK=UK (B.1 UIsK D (B,2 ogN 十0.2507 式中: Us -达到无菌生长平均时间,单位为秒(s); UK -首次显示所有样本无菌生长的暴露时间,单位为秒(s); -暴露时间的固定间隔,单位为秒(s); 每组的样本量,单位为个; -每次暴露无菌样本数量,单位为个; r N -回收菌落数,单位为CFU
GB/T33417一2016 c 附 录 资料性附录 验证法测试D值 C.1ST值验证 将50个试验样本放人过氧化氢气体生物指示物抗力测试仪中,作用浓度为2.3mg/1士0.4mg/L 在50C士0.5C时,暴露时间设定为计算出的ST值,暴露完成后,将50个生物指示物样本取出,置于 56C士2C培养至说明书规定时间 若全部有菌生长,则计算的ST值通过验证;若有样本无菌生长， 则计算的ST值没有通过验证 c.2KT值验证 将50个试验样本放人过氧化氢气体生物指示物抗力测试仪中,作用浓度为2.3mg/L士0.4mg/L 在50C士0.5C时,暴露时间设定为计算出的KT值,暴露完成后,将50个生物指示物样本取出,置于 56士2C培养至说明书规定时间 若全部无菌生长,则计算的KT值通过验证;若有样本有菌生长， 则计算的KT值没有通过验证 C.3判定 计算的ST值和KT值都通过验证,则判定测出的D值有效

过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法GB/T33417-2016

随着医疗水平不断提高，医疗器械的清洁、消毒和灭菌也越来越受到重视。作为一种新型灭菌方法，过氧化氢气体灭菌在医疗行业中得到了广泛应用。

然而，对于过氧化氢气体灭菌的生物指示物检验方法，很多人可能并不清楚。GB/T33417-2016标准制定了过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法的规范，以确保过氧化氢气体灭菌的质量和安全性。

根据该标准，过氧化氢气体灭菌的生物指示物应使用孢子形成能力强、稳定性好、易于保存的菌株，如枯草芽孢杆菌。在进行检验时，需使用一定数量的生物指示物，并将其置于指定位置，经过灭菌后进行培养和观察。

通过观察生物指示物是否存活，可以判断过氧化氢气体灭菌的效果。如果生物指示物完全死亡，则表明灭菌效果良好；反之则需要进一步措施以确保灭菌效果。

总之，根据GB/T33417-2016标准，过氧化氢气体灭菌的生物指示物检验方法是一种重要的质量控制手段，可帮助医疗行业确保灭菌效果的安全性和可靠性。

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