GB/T28097-2011
苹果黑星病菌检疫鉴定方法
DetectionandidentificationofVenturiainaequalis(Cooke)Wint.
- 中国标准分类号（CCS）B16
- 国际标准分类号（ICS）65.020.01
- 实施日期2012-06-01
- 文件格式PDF
- 文本页数9页
- 文件大小1,012.67KB
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苹果黑星病菌检疫鉴定方法
国家标准 GB/T28097一2011 苹果黑星病菌检疫鉴定方法 DeteetionandidentifieationofVenturiainaequalisCooke)wint. 2011-12-30发布 2012-06-01实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T28097一2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口
本标淮起草单位;安徽出人境检验检疫局,安徽农业大学、云南出 人境检验检疫局
本标准主要起草人;姚剑、檀根甲、温劲松,余晓峰、张串、李刚、郑海松、李云飞、方元炜,张道环、 李生贵、段禄华
GB/T28097一2011 苹果黑星病菌检疫鉴定方法 范围 本标准规定了苹果黑星病菌的检疫鉴定方法
本标准适用于苹果属果树、果实、种苗及其他材料的检疫和鉴定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 sN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 苹果黑星病菌基本信息 中文名苹果黑尾病菌
学名 有性型:VenturiainaegualisCookeWint
无性型:SpilocaeapomiFr.
病害英文名 scab,blackspot
anple 异名 有性型:SphaeriacinerascensFr. Sphaerella Fuck Sbhaerel inaegualisCooke. EndostigmeinaegualisCookeSyd
inaeguali、CookePetr
Endostigme" Fleisch)Jorst. 无性型:FusicladliumdendriticumWallr.)Fuck ClaboriumlenlriticumWallr 根据《真菌词典》第九版(2001),有性型属真菌界Fungi,子囊菌门Ascomycota,子囊菌纲Ascomy cetes,座囊菌亚纲Dothideo0 cetidae,格袍腔菌目Plee es,黑星菌科Venturiaceae,黑星菌属Ven omyce eosporale tria
无性型属环黑星弛属spilwuea,仁果环黑星袍SpilwueaomiFr.(一Fusicladiumdendritieun Wallr.Fuck.
苹果黑星病菌的其他信息参见附录A
方法原理 经现场查验,取样后,实验室用显微镜等仪器设备进行检测,根据其危害症状,形态学特征进行结果 判定
GB/r28097一2011 仪器及用具 5.1 仪器 显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、生物培养箱
5.2用具 解剖刀,锻子 试剂和培养基 试剂 4%次氯酸钠,70%酒精 6.2培养基 PDA培养基,pH值调节至5.5~6.5
现场检验 7.1抽样方法 按sN/T2122进行抽样
7.2症状检查 逐一对抽检样品进行症状检查,并将疑似感病样品带回实验室作进一步检验
7.2.1叶片检查 叶片上病斑多先从叶片正面发生
病原菌从侵人点放射状扩展,形成病斑
叶片正面病斑初为淡 黄绿色色泽逐渐变深,后变为黑色,圆形、近圆形,直径3mm一6mm或更大,病斑周围有明显的边缘
老叶上尤甚
幼叶病斑多表面粗糙羽毛状,成叶病斑边缘明显而不整齐,有时表生白色棉絮状物
病斑 多由叶片正面向上突起,其背面形成环状凹人,呈泡斑状,有时病斑脱落穿孔
叶背面侵染形成的病斑 略成圆形,表生黑褐色霉状物,叶片正面对应部位褪绿,枯死
侵染较晚的,仅在叶片背面产生黑色多角 形病斑
叶片上病斑可互相汇合,占据大部叶面,叶片扭曲,卷曲,进而干枯并早期落叶
在叶柄和主叶脉上的病斑黑色,较小,小点状,梭形或长条形,往往导致叶片变黄脱落 7.2.2花器检查 发病花瓣褪色,片上生灰色病斑,但常被尊片绒毛覆盖,不易察觉
花梗上病斑还可环切花梗,造 成落花
7.2.3果实检查 果实从幼果至成熟期均可被侵染,果面病斑初为黑色星状斑点,很小,微凸,上生有绒状菌丝体
随 着果实膨大,病斑逐渐扩大并凹陷,表层木栓化,边缘开裂,有不规则细小裂纹,整体疮痂状
病果开裂、 畸形
在秋季被侵染的果实,病面密生黑色或褐色小点,不表现典型症状,但在贮藏期病斑逐渐扩大
GB/T28097一2011 7.2.4苗木,接穗等繁殖材料检查 1年生枝条被侵染,常发生在离枝端大于10cm的部位,病斑较小,枝条长大后,病斑消失,但在一 些感病的品种上,病斑并不消失,使病枝呈泡肿状
另外,芽鳞内也有越季存活的菌丝体或分生袍子
实验室检测 切片检测 选取疑似感病植物组织病健交界处切片,移于载玻片中央的水滴中,镜检,观察子实体特征
分离培养检测 选取疑似感病植物组织,剪取病健交界处组织若干小块,约2mmx2mm,在70%酒精中浸湿一 下 后立即移人4%次氯酸钠中消毒处理1min,用无菌水洗3次,放于PDA平板培养基上,每皿5块,置于 16C一20,光照强度为600lx,光周期为12h条件下培养
观察病菌形态特征
鉴定特征 病菌形态特征 苹果黑星病菌有性型Venturiainaequalis(Cooke)wint.子囊座在落叶上形成,埋生或近表生叶肉 组织中,黑褐色,球形,近球形,直径约90unm100Am,孔口处稍有乳状突起,具刚毛,刚毛长25 技m 万5pm
子囊座内产生多数子囊,处于不同发育阶段
子囊长棍棒形,无色,大小(55pAm一75pm)X 6um~12um),有短柄,壁薄
子囊内含8个子囊袍子,成熟子囊袍子卵圆形,暗褐色,双胞,顶细胞较 小,基部细胞较大,大小(11Am15Am)×4Am8Am)
无性型Fusicladiumdendriticun (wallr.Fuck.分生袍子梗丛生,淡褐色至橄榄色,短棒状,直立或弯曲,不分枝,单胞,0个2个隔膜 全壁芽生产抱,环痕式延伸,大小(50Am~60am)×(4m一6Am)
分生抱子顶生,倒梨形或倒棍棒 状,顶端略尖,初无色,淡褐色至橄榄色,初单胞,后生1个隔膜,隔膜处稍缢缩,袍基平截,表面光滑或具 小扰突,大小(12.04m一26.0Am)×(5.5am~11.5m)
分离培养的分生抱子比切片观察的略大 参见附录B)
9. 病菌培养性状 2 菌株在PDA培养基上培养4d后,开始形成灰白色菌落
4周后,菌落呈不规则形或圆形,直径约 20mm,平铺状,橄榄色、灰色或黑色,有时被茸毛
菌丝初无色,后变为橄榄色
9.3与梨黑星病菌enturiapirinaCooke)Adh.的区别 梨黑星病菌有性型袍子囊棍棒形,子囊袍子顶细胞较大,基部细胞较小;无性型分生袍子梗罕见有 隔膜,梗壁上有齿状或疣状突起,分生抱子单抱,两端略尖(参见附录C)
10 结果判定 如有7.2.1一7.2.4描述中任一症状,且切片或分离培养观察的病菌形态特征与描述的病原有性型 或无性型特征相符,可判定为苹果黑星病菌
GB/r28097一2011 11样品、菌种保藏 分离菌转接在PDA培养基斜面上,待斜面表面长满菌丝后,置于4C保存,定期转楼
有条件可进 行冷冻干燥保存
检出病菌的样品妥善保存6个月
保存期满灭活处理
GB/T28097一2011 附 录A 资料性附录 苹果黑星病菌其他信息 A.1地理分布 美洲墨西哥,美国,加拿大、阿根廷、巴西、智利;欧洲;芬兰,英国,法国,奥地利、德国,前苏联,捷 克,斯洛伐克,波兰、保加利亚,匈牙利、罗马尼亚、前南斯拉夫、比利时、意大利、丹麦,荷兰、挪威,瑞典、 瑞土、土耳其;亚洲:印度、日本、朝鲜、阿富汗、叙利亚、塞浦路斯以及(吉林、黑龙江、新疆、四川、云 南等);非洲;南非,肯尼亚、利比亚;大洋洲;澳大利亚、新西兰等
A.2寄主范围 主要为苹果属果树(Malu uus
GB/r28097一2011 B 附 录 资料性附录 苹果黑星病菌形态特征 分生袍子 分生袍子梗 图B.1无性型分生抱子梗及分生袍子 图B.2有性型子囊和子囊抱子
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苹果黑星病菌检疫鉴定方法GB/T28097-2011
苹果黑星病菌是一种危害苹果树生长的细菌，能够引起苹果树的叶片和果实上出现黑色斑点，降低果实质量。因此，对于苹果黑星病菌的检测具有非常重要的意义。
GB/T28097-2011 标准介绍
GB/T28097-2011 是一个适用于苹果黑星病菌检疫鉴定的标准，该标准规定了苹果黑星病菌的检测方法、鉴定方法以及评价指标等内容。
检测方法
苹果黑星病菌可以通过细菌培养法进行检测。具体来说，就是将样品取自苹果叶片或者果实上的病斑，进行预处理之后接种在含有适当营养物质的培养基上，经过一定时间的培养，观察是否出现黑色菌落。
同时，还可以通过PCR法进行检测。PCR法是利用引物与模板DNA结合，扩增特定的DNA片段来检测目标细菌。PCR法具有快速、敏感、特异性高等优点，因此在苹果黑星病菌检测中也被广泛采用。
鉴定方法
苹果黑星病菌的鉴定主要依据其生物学特征和分子生物学特征。对于生物学特征，可以观察其形态、生长速度、菌落颜色等指标。而对于分子生物学特征，则可以通过核酸序列比对等方法进行鉴定。
评价指标
GB/T28097-2011 标准也规定了苹果黑星病菌检测的评价指标，主要包括检测限、稳定性、重复性、灵敏度等方面。这些指标的确立，为苹果黑星病菌检测提供了科学的方法和标准。
总结
苹果黑星病菌检测对于保护苹果树生长具有非常重要的作用。GB/T28097-2011 标准为苹果黑星病菌检测提供了严格的方法和标准，可以使检测结果更加准确、可靠。
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