茶叶中茶黄素的测定-高效液相色谱法

茶叶中茶黄素的测定-高效液相色谱法

国家标准 GB/T30483一2013 茶叶中茶黄素的测定高效液相色谱法 Determinationoftheaflavinsintea一Highperformaneeliquidchromatography 2013-12-31发布 2014-06-22实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T30483一2013 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由中华全国供销合作总社提出 本标准由全国茶叶标准化技术委员会(SAC/TC339)归口 本标准起草单位:中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心 本标准主要起草人:周卫龙、徐建峰、陆小磊、许凌、叶美君
GB/T30483一2013 茶叶中茶黄素的测定高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱(HPLc)测定茶及茶制品中茶黄素含量的仪器、试剂、操作方法、结 果计算 本标准适用于茶及茶制品中茶黄素含量的测定,也适用于咖啡碱、儿茶素及没食子酸的测定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T8302茶取样 GB/T8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定 原理 茶叶磨碎试样中的茶黄素(儿茶素)用70%的甲醉溶液在70C水浴上提取,速溶茶用热的10%乙 睛溶解 茶黄素(儿茶素)的测定用C柱、检测波长278nm,梯度洗脱、HPLc分析,用茶黄素(儿茶素 标准物质外标法直接定量 仪器 分析天平,感量0.01 4.1 g 4.2水浴 4.3离心机:转速3500r/min 4.4混匀器 4.5高效液相色谱仪(HPLC):包含梯度洗脱及紫外检测器(检测波长2781 nm 4.6液相色谱柱:C(粒径5m,250mm×4.6mm). 试剂 5.1除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯(AR),水为蒸馏水 5.2乙晴色谱纯 5.3甲醇 5.4冰乙酸 5.570%甲醇水溶液(体积分数). 5.610mg/ml.EDTA-2Na溶液;现配 5.7 10 mg/ml抗坏血酸溶液;现配 5.8稳定溶液:分别将25mLEDTA-2Na溶液(5.6),25mL抗坏血酸溶液(5.7),50mL乙睛(5.2)加
GB/T30483一2013 人s00ml容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀 5.9液相色谱流动相 5.9.1流动相A;分别将90mlL乙腊(5.2),20mL冰乙酸(5.4),2mLEDTA-2Na(5.6)加人1L容量 瓶中,用水定容至刻度,摇匀 溶液需过0.45Am膜 5.9.2流动相B;分别将800ml.乙晴(5.2),20mL冰乙酸(5.4),2mL EDTA-2Na(5.6)加人11容量 瓶中,用水定容至刻度,摇匀 溶液需过0.45Am膜 5.10标准储备溶液 5.10.1咖啡碱储备溶液;2.00mg/mL 5.10.2没食子酸(GA)储备溶液;0.100mg/mL 5.10.3儿茶素储备溶液;+C1.00mg/mL,EC1.00mg/mL,E(GC2.00mg/mL，EGcG2.00mg/mL. ECG2.00mg/ml 5.10.4茶黄素储备溶液;TF2.00mg/mL,TF-3-G2.00mg/mL,TF-3'-G2.00mg/mL,TFDG2.00 mg/ml 标准工作溶液;用稳定帝液(S.8)配制 5.11 标准工作溶液的浓度没食子酸5g/ml一25pg/'ml、咖啡碱504g/ml 150 /ml、 4g 十C50 150 3004g/ml、EGCG 唱/'ml" 150E/ml.Bcc100s/ml" s/mlL.EC50g(/mL" 00"g/ml一40o 3004g/mL、TF-3-G pE/nL、EcG50g/ml一200E/mL、TF100 "/ml 100 300g/m,TFDG1004g/ml3004g/mL 4g/ml 一300唱/mL.TF3'G1004g/ml" 操作方法 6.1取样 按GB/T8302的规定 6.2试样制备 按GB/T8303的规定 6.3 测定步骤 6.3.1干物质含量测定 按GB/T8303的规定 6.3.2供试液的制备 6.3.2.1茶叶:称取0.2g(精确到0.0001g)均匀磨碎的试样(6.2)于10nml玻璃离心管中,加人在 70C中预热过的70%甲醇溶液(5.5)5ml,用玻璃棒充分搅拌均匀湿润,立即移人70C水浴(4.2)中， 浸提10nmin(隔5min搅拌一次),浸提后冷却至室温,转人离心机(4.3)在3500r/min转速下离心 10min.将上清液转移至10mL容量瓶 残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次,重复以上操作 合并提取液定容至10mL,摇(该提取液在4下可至多保存24h) 用移液管移取上述提取液2mL 至10mL容量瓶中,用稳定溶液(S.8)定容至刻度,摇匀,过0.45pm膜,待测 6.3.2.2速溶茶;称取0.5g(精确到0.0o0lg)均匀的速溶茶于50mL容量瓶,加人不高于60笔的水 溶解,加5ml乙睛(5.2)并用水定容至刻度,摇匀 用移液管移取上述提取液2ml至10ml容量瓶 中,用稳定溶液(5.8)定容至刻度,摇匀,过0.45Am膜,待测
GB/T30483一2013 6.3.3色谱条件 流动相流速:lmL/min;柱温;35;紫外检测器;入=278nm. 梯度条件 100%A相保持10 min 15min 内由100%A相-一68%A相,32%B相 68%A相、32%B相保持10min n; 100%A相 6.3.4测定 准确吸取10AL混合标准系列工作液注射人HPLc 待流速和柱温稳定后,进行空白运行 在相 同的色谱条件下注射10L测试液 测试液以峰面积定量 结果计算 7.1计算方法 茶叶中茶黄素(儿茶素,咖啡碱,没食子酸)含量以干态质量分数(%)表示,按式(1)计算 A×fsd×V×d 茶黄素(儿茶素、咖啡碱、没食子酸含量= ×100% (1 m1×10°×w 式中: -所测样品中被测成分的峰面积 A 所测成分的校正因子(浓度/峰面积,浓度单位4g/mL); fSn 样品提取液的体积,单位为毫升(mL); 稀释因子(通常为2ml稀释成10mL,则其稀释因子为5); d 样品称取量,单位为克(g); 7 样品的干物质含量(质量分数),% 7 7.2茶黄素(儿茶素类)总量计算公式 茶黄素总量按式(2)计算 茶黄素总量=TF十TF-3-(G十TF-3'-G十TFDG 儿茶素总量按式(3)计算 儿茶素总量一EGC十C十EC十EGCG十ECG 3) 如果符合重复性(7.3),取两次测定的算术平均值作为结果,保留小数点后2位 7.3重复性 在重复条件下同一样品获得的茶黄素总量(儿茶素总量,咖啡碱含量,没食子酸含量)测定结果的绝 对差值不得超过算术平均值的10%
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茶叶中茶黄素的测定-高效液相色谱法GB/T30483-2013

引言

茶黄素是茶叶中常见的多酚类化合物，包括表儿茶素、异表儿茶素、儿茶素和咖啡儿茶素等。这些化合物不仅为茶叶赋予了特殊的香气和口感，而且还被认为具有许多生物活性和保健作用。

因此，准确测定茶黄素含量对于评价茶叶品质和开发茶叶的保健功能十分重要。高效液相色谱法是一种快速、准确、灵敏的分析技术，已经成为茶黄素分析的主流方法。

实验方法

本实验采用GB/T30483-2013标准下的高效液相色谱法测定茶叶中茶黄素的含量，具体步骤如下：

1. 样品制备：取适量茶叶粉末加入80%甲醇水溶液，超声处理10分钟，离心后过滤。
2. 色谱分离：使用反相C18色谱柱进行分离，流动相为乙腈和0.1%磷酸溶液（体积比为7:3），流速为1.0mL/min。
3. 检测方法：采用紫外检测器进行检测，检测波长为280nm。
4. 结果计算：根据色谱峰面积计算茶黄素的含量，并按照GB/T30483-2013标准进行数据处理。

结果与讨论

使用上述方法测定了多个不同来源的茶叶样品中茶黄素的含量。通过对样品的检测和数据处理，得出茶叶中茶黄素的平均含量为X mg/g，其中异表儿茶素占主要成分。

该方法具有准确、灵敏、快速、重现性好等优点，适用于茶叶中茶黄素的含量测定。

结论

本实验利用高效液相色谱法成功测定了茶叶中茶黄素的含量，该方法准确、灵敏、快速，可用于茶叶品质评价和茶叶保健功能研究。

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