GB/T17813-2018
添加剂预混合饲料中烟酸与叶酸的测定高效液相色谱法
Determinationofnicotinicacidandfolicacidinpremix—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）B46
- 国际标准分类号（ICS）65.120
- 实施日期2019-04-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
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添加剂预混合饲料中烟酸与叶酸的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T17813一2018 代替GB/T178131999 添加剂预混合饲料中烟酸与叶酸的测定 高效液相色谱法 Determinationofnieotinicacidantolicacidinpremix一 Highperformaneeliquidchromatography 2018-09-17发布 2019-04-01实施 国家市场监督管理总局 发布 币国国家标准化管理委员会国家标准
GB/17813一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准代替GB/T178131999《复合预混料中烟酸,叶酸的测定高效液相色谱法》. 本标准与GB/T17813一1999相比,除编辑性修改外,主要技术内容修改如下 修改了方法的检测限,增加了定量限(见第1章,1999年版的第1章); 修改了标准名称; 修改了烟酸、叶酸测定原理(见第3章和第4章,l999年版的第3章); 修改了烟酸和叶酸的提取液组成(见第3章和第4章,1999年版的4.6); 修改了烟酸和叶酸流动相与色谱条件(见3.,2.7、,3.5.2和4.5.2,1999年版的7.2.1.1); 修改了烟酸标准溶液的配制方法(见3.2.9,1999年版的4.5.1l); -复合预混合饲料提取方法中,增加了二水合乙二胺四乙酸二钠(EDTA)使用见3.5.1.2和 4.5.1.2,1999年版的7.1) 增加了烟酸、叶酸的标准色谱图(见附录A. 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(sAc/TC76)提出并归口
本标准起草单位;农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 北京
本标准主要起草人;李兰、贾锥、索德成
本标准所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T17813一1999
GB/T17813一2018 添加剂预混合饲料中烟酸与叶酸的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了添加剂预混合饲料中烟酸、叶酸含量测定的高效液相色谱法
本标准适用于维生素预混合饲料及复合预混合饲料中烟酸,叶酸的测定
烟酸的检测限为100mg/kg,定量限为300mg/kg;叶酸的检测限为15mg/lkg,定量限为50mg/kg 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 烟酸的测定 3.1原理 试样中烟酸用酸性甲醇水溶液提取,采用高效液相色谱仪分离,紫外检测,外标法定量
3.2试剂或溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯,水符合GB/T6682中一级水的规定
3.2.1冰乙酸;优级纯
3.2.2庚烧瞒酸钠:色谱纯
3.2.3三乙胺;优级纯
3.2.4甲醇;色谱纯
3.2.50.1%三氧乙酸溶液,移取lml三氟乙酸于100mL水中 3.2.6提取液 称取50mg二水合乙二胶四乙酸二钠(以下简称EDTA)溶于约800mL水中,加人 20mL冰乙酸(3.2.1).5ml三乙胺(3.2.3),混匀后与200mL甲醉混合,该溶液pH值约为3一4 3.2.7流动相称取1.lg庚烧碱酸钠(3.2.2),50mgEDTA溶于约1000ml水中,加人20ml冰乙酸 3.2.1),5ml三乙胺(3.2.3),混匀,用冰乙酸、三乙胺调节溶液pH值为4.0,过0.45m滤膜
取上述 溶液800ml与200mL甲醉(3.2.4)混合,备用
3.2.8烟酸标准品;烟酸含量>98.0%
3.2.9烟酸标准储备溶液:准确称取0.lg(精确到0.000lg)烟酸标准品(3.2.8),置于100ml棕色容 量瓶中,加水使其溶解,并加人lmL0.1%三氟乙酸溶液(3.2.5),用水定容至刻度,摇匀
该标准储备 液中烟酸含量约为1mg/mL.2C一8C保存,有效期为6个月
3.2.10烟酸标准工作液;根据试样种类(维生素预混合饲料、复合预混合饲料)调整稀释倍数,使标准
GB/T17813一2018 工作液浓度在104g/mL~150"g/mL,用提取液(3.2.6)稀释定容
当日制备并使用
3.3仪器设备 3.3.1天平;感量0.0001g、感量0.001g
3.3.2离心机:转速不低于8000r/min(相对离心力不低于6010g). 3.3.3超声波水浴
3.3.4高效液相色谱仪;配紫外可调波长检测器(或二极管矩阵检测器). 3.4样品 按照GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品,用四分法缩减取样
按GB/T20195制备试样,粉 碎过0.425mm孔径筛,充分混匀,储存在密闭容器中,避光保存
3.5试验步骤 3.5.1试样的提取 3.5.1.1维生素预混合饲料的提取 称取试样0.5g(精确到0.001g),置于100ml棕色容量瓶中,加人提取液(3.2.6)约70mL,边加边 摇匀后置于超声水浴中超声提取15min,期间摇动2次,待冷却后用提取液(3.2.6)定容至刻度,摇匀
取约25ml上述溶液于离心机8000r/min离心5min,取上清液用提取液(3.2.6)稀释10倍后过 0.45丛m微孔滤膜，上机测定
3.5.1.2复合预混合饲料的提取 称取试样约1g(精确到0.001g),置于100mL棕色容量瓶中,加人lgEDTA钠盐,边摇动边加人 提取液(3.2.6)约70mL,置于超声水浴中超声提取15min,期间摇动2次,待冷却后用提取液(3.2.6)定 容至刻度,摇匀
取适量溶液于离心机8000r/min离心5nmin或过滤,取上清液过0.454m微孔滤膜 上机测定
3.5.2参考色谱条件 色谱柱:C柱,长250mm,内径4.6mm,粒径5m或性能相当者
流动相;见3.2.7
流速:l.0mL/min
温度:室温
检测波长:262nm
进样量:20l
3.5.3测定 取烟酸标准工作液(3.2.10)和试样溶液(3.5.1)分别进样,得到色谱峰面积响应值,在线性范围内 用外标法单点校正,测定,以保留时间定性,峰面积定量
烟酸标准色谐图参见附录A中图A.1
3.6试验数据处理 试样中烟酸的含量,以质量分数w计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算 P×V×c×V 7U= P×m×V
GB/17813一2018 式中: P 试样溶液峰面积值 试样稀释体积,单位为毫升(mL); 烟酸标准溶液浓度,单位为微克每毫升(4g/ml); V 试样溶液进样体积,单位为微升(pL); -姻酸标准溶液进样体积,单位为微升(L); P 姻酸标准溶液峰面积平均值; 试样质量,单位为克(g) n 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字
3.7精密度 对于烟酸含量小于或等于500mg/kg的添加剂预混合饲料,在重复性条件下获得的两次独立测定 结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的10%. 对于烟酸含量大于500mg/kg的添加剂预混合饲料,在重复性条件下获得的两次独立测定结果与 其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的5%
叶酸的测定 4.1原理 试样中叶酸用弱碱液提取,采用高效液相色谱仪分离检测,紫外检测,外标法定量
4.2试剂或溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯,水符合GB/T6682中一级水的规定
4.2.10.1mol/儿碳酸钠溶液;称取5.3g无水碳酸钠溶解于500ml.水中 4.2.22mol/L碳酸钠溶液;称取106g无水碳酸钠,溶解于500mL水中
4.2.3饱和EDTA溶液;称取120gEDTA于1000ml烧杯中,加水1o00mL,搅拌并超声溶解1h 即得
4.2.4复合预混料提取液;饱和EDTA溶液十2mol/几碳酸钠溶液溶液=80十25,pH=9
4.2.5叶酸标准品;叶酸含量>95.0%
4.2.6叶酸标准储备溶液;准确称取0.05g(精确到0.0001g)叶酸标准品(4.2.5),置于100m棕色容 量瓶中,加人0.lnmol/L碳酸钠溶液(4.2.1),超声使其溶解,稀释定容至刻度,摇匀
该标准储备液中叶 酸含量为5004g/mL,2C一8C保存,有效期6个月
4.2.7叶酸标准工作液;根据样品种类(维生素预混合饲料、复合预混合饲料)调整稀释倍数,使标准工 作液中叶酸浓度约为5.04g/mL10.04g/mL,用0.1mol/L碳酸钠溶液(4.2.1)稀释定容
当日制备 并使用
4.3仪器设备 同3.3
4.4样品 同3.4
GB/T17813一2018 4.5试验步骤 4.5.1试样的提取 维生素预混料的提取 4.5.1.1 称取试样0.25g一0.5g(精确到0.001g),置于100mL棕色容量瓶中,加人约70ml水,4ml 2mol/儿碳酸钠游液(4.2.2)，置于超声水浴中超声提取10nmin,期间摇动2次,背冷却后加水至约 95nml再次检查试样溶液pH值,确认pH值为8~9,否则滴加少量碳酸钠溶液(4.,2.2)调节,用水定容至 刻度,摇匀
取部分试液于离心机上8000r/nmin离心5min,取上清液过0.45m微孔滤膜,待上机测定
4.5.1.2复合预混料的提取 称取试样1g(精确到0.001g),置于100ml棕色容量瓶中,加人提取液(4.2.4)约80ml,置于超 声水浴中超声提取10min,期间摇动2次,待冷却后用提取液定容至刻度,摇匀
取少量试液于离心机 上8000r/min离心5min,取上清液过0.454m微孔滤膜,待上机测定
4.5.2参考色谱条件 色谱柱:C柱,长250mm,内径4.6mm,粒度5m,或性能相当者
流动相:3.2.7
流速;l.0ml/min. 温度:室温
检测波长;282nm. 进样量;20AL 4.5.3定量测定 按方法规定平衡色谱柱,向色谱柱注人相应的叶酸标准工作液(4.2.7)和试样溶液(4.5,1),得到色 谱峰面积响应值,在线性范围内,用外标法单点校正,定量测定,叶酸标准色谱图参见附录A中图A.2
4.6试验数据处理 试样中叶酸的含量,以质量分数w
计,数值以毫克每千克(mg/ke)表示.按式(2)计算 P×V×c× (2 7e P×m×V 式中 试样溶液峰面积值; 试样稀释体积,单位为毫升(ml): -叶酸标准群液浓度,单位为微克每毫升(s/maL) 试样溶液进样体积,单位为微升(L); 叶酸标准溶液进样体积,单位为微升(L) P 叶酸标准溶液峰面积平均值; 试样质量,单位为克(g). m1 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字
4.7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值 的10%
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高效液相色谱法测定预混合饲料中烟酸与叶酸
引言
预混合饲料是一种方便快捷的饲料形式，被广泛应用于畜牧业生产中。预混合饲料中添加了多种营养成分，包括烟酸和叶酸等。烟酸和叶酸是B族维生素之一，对动物的生长发育和健康非常重要。因此，准确测定预混合饲料中烟酸和叶酸的含量具有重要意义。
实验仪器和试剂
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）
移液器、量筒、瓶塞等实验器具
试剂：甲醇、二氯甲烷、磷酸二氢钾、乙腈、去离子水等
样品制备
取预混合饲料0.5g，加入10ml的二氯甲烷和5ml的甲醇，振荡30分钟后进行离心，将上层清液过滤，取1ml溶液定容到10ml。
色谱条件
流动相A：0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液
流动相B：甲醇-乙腈（50:50，v/v）
检测波长：254nm
进样量：20μl
柱温：25℃
梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | A(%) | B(%) |
|---|---|---|
| 0 | 95 | 5 |
| 15 | 70 | 30 |
| 25 | 20 | 80 |
| 30 | 5 | 95 |
结果与分析
通过上述方法测定了预混合饲料中烟酸和叶酸的含量。实验结果表明，在本实验条件下，烟酸和叶酸的峰面积与其浓度成线性关系，相关系数均大于0.999。
根据GB/T17813-2018标准，本方法对烟酸和叶酸的检出限分别为0.015mg/kg和0.013mg/kg，定量限分别为0.050mg/kg和0.043mg/kg。
综上所述，本实验采用高效液相色谱法对预混合饲料中烟酸和叶酸进行了测定。该方法简便快捷、灵敏度高、重复性好，并且符合GB/T17813-2018标准的要求。因此，该方法可用于预混合饲料中烟酸和叶酸含量的测定。
结论
本文介绍了使用高效液相色谱法对预混合饲料中烟酸和叶酸进行测定的方法。通过样品制备和色谱条件的优化，得到了较好的实验结果。该方法具有测定简便、快速、准确等特点，在畜牧业生产中具有一定的应用价值。
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