环境中有机污染物遗传毒性检测的样品前处理规范

环境中有机污染物遗传毒性检测的样品前处理规范

国家标准 CB/T154401995 环境中有机污染物遗传毒性检测的 样品前处理规范 Guidelinesforpreparingsamplesfor genetoxieitytestingoforganic pollutantsinenvironment 1995-03-25发布 1995-08-01实施 国家环境竟保护局 发布 国家技术监督局国家标准
国家标准 环境中有机污染物遗传毒性检测的 GB/T15440一1995 样品前处理规范 Cuidelinesforpreparingsamplesfor genetoxieitytesttngoforganie pollutantsinenvironment 本规范规定了环境中有机污染物遗传毒性检测时样品前处理的技术要求， 本规范分五篇 第一篇大气可吸入颗粒物样品前处理 第二篇地面水及废水样品前处理 第三篇非水液态废弃物样品前处理 第四篇土壤及沉积物样品前处理 第五篇固体废弃物样品前处理 规范所给定义仅限定在本规范内使用,不具普遍性 本规范不对样品前处理的质量控制及操作安全性作全面闹述,仅对特定问题给以说明,其他同题应 遵从合格实验室准则的有关原则 本规范的质量控制原则皆以遗传毒性检测系统本身正常为前提 本规范不另提供记录表格,样品前处理过程的记录应遵从常规分析测试原则 第一篇大气可吸人颗粒物样品前处理 适用范围 本规范适用于大气可吸入颗粒物中非挥发性有机物,不适用于大气可吸入颗粒物的气态及半气态 有机物 引用标准 2 GB6921大气飘尘浓度测定方法 GB6682实验室用水规格和实验方法 3 定义 可吸入颗粒物;能长期悬浮在空气中,空气动力学当量直径<10m的、能进入人体呼吸道的颗粒 物 仪器设备 采样系统;符合GB6921的要求 4.2超细玻璃纤维滤膜;过滤效率不低于99.99% 国家环境保护局1995-03-25批准 1995-08-01实施
GB/T15440一1995 43索氏提取器;500mL容量 44超声波清洗器.250w功率 45分液漏斗 4.6旋转燕发器 47KD浓缩器 48锅瓶 49减压阀 410高纯氮气 411一般实验室器具及玻璃器皿,为避免其他有机物质的干扰,所有骏璃器皿及直接接触样品的器具 均需洗净,并经纯水及纯有机溶剂冲洗 试剂 纯水;符合GB6682实验室用水规格中一级水标准的水,即电导率<0.0s)/cm(25c),吸光度 5.1 <0.o(254mm,lcm光程)三氧化硅含放<0.mg/儿L 可用去离子水(加少量KMnO,)经全鞍璃器 皿重蒸熔制得 5.2溶剂等级不得低于分析纯,且皆应在玻璃容器中重燕溜后方能使用 5.2.1二氧甲婉 5.2.2二甲基亚飘(DMsO). 5.3氢氧化钠.e(NaOH)-1mol/几L. 5.4盐酸:c(HC)=1mol/几 5.5无水硫酸钠 样品采集 按GB6921的方法采集一定量的大气可吸入颗粒物,记录流量及采样时间 采样前,将滤膜于 500C灼烧半小时后称重 采样后,将对折的滤膜用硫酸纸包好,装入黑色纸袋,于4C条件下运输并于 采样前的称重条件下平衡至少24h后称重 称重后的滤膜装入塑料袋,于一20c以下避光保存,采样后 应尽快进行样品制备 采样时间不应超过24h,在此期间如不能采集到足量的尘,可在同一采样地同时设置两个或更多 的采样器,将所得尘样合并为一个样品 样品制备 7.1有机物分离提取 可采用索氏提取法,超声提取法,必要时进行不同有机组分的提取 7.1.1索氏提取 将样品滤膜对折成卷状,放入提取器 分别用100mL二氯甲婉在溶剂沸点条件下(40C)提取2 次,每次16h(每小时回流510次),将两次的提取液冷却至室温后合并 用孔径<0.5mm的微孔全 玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中 7.1.2超声提取 将逮膜剪成1cm小片,放入瓶塞配有聚四叛乙婿衬垫的玻璃试管中,在超声波清洗器中用二银甲 烧提取2次,每次10min 用孔径<0.5mm的微孔全玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中 7.1.3不同有机组分的提取 7.1.3.1将索氏提取或超声提取得到的提取滤液放入分液潇斗,用1mol/几盐酸提取3次,每次用量 约50一5mL(提取液H为1一2).
GB/T15440一1995 7.1.32孩性组分,将7.1.3.1中3次提取所得的水相合并,用1mol/儿氢氧化钠将pH调至11~12 用二报甲烧提取3次,每次用量约50100mL,将3次提取的有机相合并,并使其通过无水流酸钠除去 水分 此为孩性组分 飞.13.3中性组分;将7.1.3.1中3次提取所得的有机相合并,用1mol/儿氢氧化钠提取3次,每次用 量约50一75mL(提取液H为11~12) 将3次提取的有机相合并,并使其通过无水流酸钠除去水分 此为中性组分 7.1.3.4酸性组分;将7.1.3.3中3次提取所得的水相合并,用1mol/几盐酸将pH调至1一2.用二氧 甲婉提取3次,每次用量约100mL，合并3次提取的有机相,使其通过无水碗酸钠除去水分 此为酸性 组分 注意在提取过程中如水相、有机相间的乳化层超过有机相的1/3,应使用离心等物理学方法进行分 离 提取液浓缩 7.1.1、7.1.2所得提取液及.7.1.3所得各有机组分提取液体积在1L以下时,可用K-D浓缩器浓 缩,如提取液体积大于1L,使用旋转蒸发器,将提取液蒸发至近100mL,用K-D浓缩器浓缩 留出 0%浓缩后的提取液以备重量分析及化学分析,另外50%继续用K-D浓缩器浓缩至1mL 7.3溶剂置换 于40c水浴条件下用平稳氮气流将浓缩过的提取液吹干 加入适量(ImL左右)DMs0或遗传毒 性检测所需的其他溶剂使萃取物溶解,并稀释至适当浓度以备进行遗传毒理学检测 提取液应于一20C避光保,并应在提取之日起的3周内进行检测 样品量计算结果的表示 8.1采气总量用m'表示 82可吸入颗粒物采集总量用mg表示 83提取有机物的量用mg表示 质量控制 9.1设置现场采样及溶剂对照,即在采样期间将空白谴膜放置在现场(注意防止污染),除不参与采样 外，,空白池膜籍经历从膜准备到遗传毒性检测的全过醒 如此对照的进传毒性检测呈阳性反应,应分别 检查采样过程及制备系统,找出原因,重复对照试验,至合格为止 9.2设置阳性对照,即将在所要进行的遗传毒性检测中肯定会产生阳性结果的对照物滴加在空白谜膜 上,使其经历样品制备的全过程 如遗传毒理学检测结果为阴性,应检查制备系统,找出原因,重复阳性 对照试验,至合格为止 10安全性 由于对样品制备中涉及的毒性与致瘤性不竞全清楚,应将其按有潜在健康危害的物质对待,操作者 应保持最低限度的接触 第二篇地面水及废水样品前处理 适用范围 1 本规范适用于地面水及废水中的非挥发性有机物,不通于挥发性有机物 12定义 地面水,本规范中包括江水、河水、湖水.池塘水等
GB/T15440-1995 度水;本规范中包括工业废水及生活污水等 非水液相,本规范中为与水介质分层,主成分不是水的液相 沉积固相;本规范中为从静置24h的废水样中分离出来的固相或半固相 仪器、设备 13 131果样瓶;瓶盖具鼻四极乙婚村垫的棕色-螺口,大口骏璃瓶,或在样届无腐烛性条件下使用具铝信 外衬的橡皮塞 32分液漏斗 33 贮水器;具下口的玻璃或搪瓷容器 134玻璃树脂柱,不低于10cm高,柱直径与柱长比为1:4110之间 135输液系 13.6~13.11分别与4.6~4.11相同 14 试剂 4.1纯水;与5.1相同 142复很化纳cONOH)=10mal/L. 143 1(V/)硫酸 1 144氢氧化呐e(NsaoH)-1mal/L. 1体5盐酸cGHc)=1molL. 4.6溶剂,等级不得低于分析绝,且皆应在玻璃容器中重燕溜后方能使用 体61 二氯甲婉 4.6？甲脖 体6了两版 体64己烧 146.5 二甲基亚硕(DMSO) 147XAD2树脂或等效的大孔树脂 树脂应经纯水及甲脖漂洗后,在索氏提取器中分别用甲醉二裹 甲梳.己烧、丙酬提取8h,去除有机物 净化后的树脂漫于甲脖中,置冰箱怜藏备用 15样品采集 手工采集适量样品放入采样瓶中,样品要完全充满容器,击封,并于2h内送至实验室,尽快进行处 理 6样品制备 16.1有机物的分离提取 16.1.1有机物分离提取前的样品预处理 将果样瓶于4C静置量4h,使非水渡相,水相.沉积圆相分离 非水液相接非水液态度弃物样品制备 规范处理;沉积固相按固态废弃物样品制备规范处理 水相按下述原则处理;悬浮物重量低于5%的地 面水可直楼进行有机物的大孔树脂提取;悬浮物重量高于%地面水及废水进行有机物的液-液提取 16.1.2有机物的液-液提取 取2份1500ml的水样分放到2个2000mL分液漏斗中 用10mol儿氢氧化钠将plH调至1l. 向每个分液漏斗加人150mL二氧甲婉,振荡2min,注意放气 至少静置10min,使有机相与水相分离， 分出有机相 再各用100ml二然甲境提取两次 将3次提取液合并在1000mL烧瓶中 如有机相与 水相间的乳化层多于溶剂层的1/3,则可用离心等物理学方法完成两相的分离 用1:1就酸溶液将水
GB/T15440一1995 相的pH调至2以下 用二氧甲烧150mL.100mL、.100L分三次进行溶剂提取 将这三次提取的有 机相也并入1000m烧瓶中 16.1.3有机物的大孔树脂分离提取 将净化后的树脂连同丙酮一道装入树脂柱,树脂上、下端分别垫、盖玻璃棉,将盛水容器与树脂柱相 连 排去柱中丙酮,用纯水洗柱3次 使水样流经树脂柱,流速为1一2倍柱体积/min,水样景不超过 2000倍柱体积,用真空暴抽去柱中余水,然后用4一8倍柱体积85'15的己烧!丙阴和8个柱体积= 飘甲烧分别3次浸挂以洗脱有机质 漫泡时间为每次0m，然后授缓清流-将洗脱液收集至烧瓶中 16.1.4必要时,按7.1.3对16.1.2提取液和16.1.3的洗脱液进行不同有机组分的提取 16.2提取液浓缩 将经16.1.2、16.1.3、16.1.4获取的提取液或洗脱液按7.2所述方法浓缩 16.3溶剂置换 与7.3相同 样品量计算结果的表示 17 17.1样品前处理所得水相体积或流经树脂柱水样的体积以L表示 7.2有机提取物的重量以mg表示 18 质量控制 18.1设置树脂及溶剂对照,即用纯水代替水样,完成样品制备全过程 用所得浓缩物进行遗传毒性检 测,如呈阳性反应,则分别检查树脂及溶剂系统,找出原因,重复该试验,直至合格为止 18.2设置平行样 183设置阳性对照,见9.2 19 安全性 与10相同 第三篇非水液态废弃物样品前处理 20适用范围 本规范适用于非水液态废弃物中的挥发性及非挥发性有机物 1 定义 非水液态废弃物;本规范中为主要成分不是水的液体,包括水溶性和非水溶性液体以及某些液体的 混合物 液体中固体含量应低于5%. 22 仪器、设备 采样瓶1000~1500mL,瓶塞盖具聚四颊乙嫌衬垫的螺口玻璃瓶 爱" 超声波清洗器 2.3分液漏斗 同4.6一410所列仪器设备 22 .4 2.5一般实验室器具及装满器皿,处理方法与4且相同 23 试剂 23.1纯水;与5.1相同
GB/T15440一1995 23.2溶剂等级不得低于分析纯,且皆应在玻璃容器中重蒸憎后方能使用 23.2.1二氯甲烧 23.2.2二甲基亚碱(DMSO). 3.3氢氧化钠c(NaOHD)=1mol/几. 234盐酸c(GHC!)=】mol/A 23.5无水硫酸钠 24 样品采集 用玻璃容器随机采集一定量的样品,样品应将容器充满,并于2h之内送至实验室 用前将样品在 室温条件下放置1一2h,称重 采样后应尽快进行样品制备 25 样品制备 25.1无须进行组分提取的挥发性非水液态废弃物不必进行有机物提取,即可直接用于以干燥器法等 实验手段进行的诱变性检测 25.2无须进行组分提取的非挥发性非水液态废弃物不必进行有机物提取,仅需称取一定量受试液溶 于或悬浮于一定量DMSO或遗传毒性检测所需其他溶剂中,于室温下超声处理5min后进行遗传毒理 学检测 25.3不同有机物组分的提取;如遗传毒性检测箭要按组分提取的样品,按下述方法操作,首先,称取近 5g样品,放入250mL雉形瓶中,加100mL二氯甲婉,搅动烧瓶,使样品溶解,若不完全,用分液漏斗分 层(不溶于二氯甲婉的液相可直接进行遗传毒理学检测. 其后程序与7.1.3相同 25.4提取液浓缩;将25.3中所得各组分按7.2所述方法浓缩 25.5溶剂置换;与7.3相同 6样品量计算结果的表示 86.1样品总量以我计 26225.4浓缩后的样品重以g计 63提取的各有机组分的量以mg计 27 质量控制 27.1设置溶剂对照,即不用样品,仅用所需溶剂完成样品制备全过程,所得浓缩物的遗传毒性检测结 果为阳性,则应更换溶剂,重复溶剂空白试验,至合格为止 27.2设置平行样 27.3设置阳性对照,见9.2 28 安全性 与10相同 第四篇土壤及沉积物样品前处理 29 适用范围 本规范适用于土壤及沉积物中的非挥发性有机物
GB/T15440一1995 30定义 士壤;本规范中为颗粒直径小于2mm,且能支持植物生长,结合成一体的物质 沉积物;本规范中为在水生环境中淤积和残留的土壤类物质 31 仪器、设备 311采样瓶;棕色、广口、瓶盖带聚四颊乙烯衬垫的螺口玻璃瓶 1.2果样勺或铲 31.3索氏提取器 1.4研磨机 1.5超声波清洗器,500w功率 1.6分液漏斗 扑7 4.64.10所列仪器设备 31.8 -般实验室器具及玻璃器皿,处理方法与4.11相同 32 试剂 32.1纯水与5.1相同 32.2溶剂,等级不得低于分析纯,且皆应在玻璃容器中重燕瘤后方能使用 32.21二飘甲烧 32.22二甲基亚碱(DMMsO). 32.3无水硫酸钠 2.4氢氧化钠c(NaOH)=1mol/几. 32.5盐酸.c(GHcl)=1mol/L 3样品采集 将样品装入采样瓶中,样品应充满容器 如采集水下样品,应用水样将表面覆盖物冲去 沉积物样 品上面应覆盖水样后再旋上瓶盖 样品于4保存,运输,如超过48h,应-10C保存 一般在袖或其他 有机物污染情况下采样量约s00s,污染不严重或含水量大的土壤果样量应2一3k 采样时要注意样 品对采样地的代表性,应在采样地范围内不同方位的采样点上采集5一10个样品,混合均匀为 一个样 品 样品采集后应尽快进行样品制备 样品制备 34 34.1有机物分离提取 34.1.1有机物分离提取前的样品预处理 将样品风干,压碎样品的团粒,40一60目过筛.采样用四分法缩分,直至选取适宜量的样品为止.应 留取2份样品,其中1份用于测量含水量 沉积物样品需经离心去除样品中的水分,去除水分前后都应测量样品重量.然后同土壤一样留取另 -份样品测量含水量 34.12索氏提取 可用索氏提取法提取样品中有机物 将10g土壤沉积物样品与10g无水碗酸钠混合,放入索氏提取器 用300mL二氨甲婉在溶剂沸 点条件下提取16h(每小时回流5~10次)使提取液冷却,过滤,然后使其通过无水硫酸钠柱去除水分 34.1.3研磨提取
GB/T15440一1995 也可用研磨提取法 将25g土壤或沉积物样品与25g无水硫酸钠混合,放入研磨罐中 加入约150mL二氯甲烧,旋紧 研磨器盖,研磨30min,港出溶剂 再用75ml二抓甲梳重复提取,共两次,或直到提取液无色时为止 将提取液合并,过滤,并使其通过无水硫酸钠柱去除水分 34.1.4超声提取 索氏提取及研磨提取都不适宜的样品可选用超声提取法 将25《土壤或沉积物样品与50g无水硫酸钠混合,放入250mL烧杯中.在超声器中用150mL二 氮甲婉提取两次,或直到提取液无色时为止 将提取液合并,过滤,并使其通过无水硫酸钠柱去除水分 34.1.5不同有机组分的提取 必要时,按下述方法进行不同有机组分的提取 首先,将前述几种方法中得到的提取物10又溶于 30mL二飘甲烧中,放入分液漏斗 其后程序与7.1.3相同 34.2提取液浓缩 将34.1所得提取液按7.2所述方法浓缩 34.3溶剂置换 与7.3相同 35样品量计算结果的表示 35.1样品总量以g表示 35.2土壤样品干重为土壤样品总量与含水量的差,以g表示;沉积物样品干重为沉积物样品总量与水 样重量及含水量的差,以g表示 35.3提取的各有机物及各有机组分的量以mg计 36质量控制 36.1设置溶剂对照,与27.1相同 36.2设置平行样 36.3设置阳性对照,参见9.2. 37 安全性 与10相同 第五篇固体废弃物样品前处理 38适用范围 本规范适用于固体废弃物中的非挥发性有机物 9定义 固体废弃物;本规范中为含水量低于50%,由有一定硬度,粘着的颗粒物或25C条件下保持不呈液 态或气态的物质组成的废弃物 40仪器、设备 0.1样晶容器,棕色,大口,瓶盖具幕四戴乙燥村垫的螺日玻璃瓶,如样晶对玻璃有腐蚀性,可使用聚 四叛乙烯容器 40.2采样勺或铲
GB/15440一1995 40.3索氏提取器 40.4研磨机 40.5分液漏斗 40.64.6~4.10所列仪器设备 41 试剂 与32相同 42 样品采集 用采样勺或铲将适量样晶采集至样品容器中,采样操作应在弱光条件下进行 样品应于4C或低于 4C保存,运输,一般在采样后即刻进行样品制备 样品制各 43 去除液相及降低样品粒度方法 43.1 选用下述适当物理学方法去除样品中的液相和降低样品粒度 于4C静置24h,将液相与固相分离 油性或粘着废弃物可用无水硫酸钠或硅胶处理 b. 研磨,40~60目过筛; c 油性或粘着废弃物可使其冷冻后再研磨,降低其粒度 d. 43.2有机物分离提取 3.2.1索氏提取 将10x固体样品与10g无水硫酸钠混合,放入索氏提取器,用300mL二氯甲婉提取16h 使提取 液流经无水硫酸钠去除水分 3.2.2研磨提取 将10g固体样品与10g无水硫酸钠混,放入研磨器中,加入300mL二氯甲婉 研磨30s,间歇 5min,再研磨15s 重复上述操作 研磨结束后,用滤纸过滤提取液,并使其通过无水疏酸钠去除水分 323不同有机组分的提取: 与7.1.3相同 43.3提取液浓缩 将43.2.1、43.2.2和43.2.3所得提取液按7.2所述方法浓缩 43.4溶剂置换 与7.3相同 44样品量计算结果的表示 44.1样品总量以g计 44.2提取的有机物及各有机组分的量以mg计 45质量控制 45.1设置溶剂对照,与27.1相同 45.2设置平行样 453设置阳性对照,参见9.2.
GB/T15440一1995 46安全性 与10相同 附加说明 本标准由国家环境保护局科技标准司提出 本标准由北京市环境保护科学研究所、环境科学院负责起草 本标准主要起草人汪晶、间雷生 本标准由国家环境保护局负贵解释