转基因产品检测蛋白质检测方法

转基因产品检测蛋白质检测方法

国家标准 GB/T19495.8一2004 转基因产品检测蛋白质检测方法 Detectionofgeneticallym0difiedplantsandderivedproducts一 Proteinbasedethods 2004-04-13发布 2004-04-13实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T19495.8一2004 目 次 前言 范围 规范性引用文件 术语和定义 原理 试剂 仪器设备 取样 程序 结果的分析与表述 影响检测结果的参数 10 验证方法 1l1 12检测报告 附录A(规范性附录)转基因植物及其产品中CP!EPsPs蛋白的ELIsA检测 附录B规范性附录)转基因植物及其产品中Cry1Ab/Ac蛋白的试纸条检测 参考文献
GB/T19495.8一2004 前 言 GB/T19495(《转基因产品检测》为系列标准: GB/T19495.1一2004转基因产品检测通用要求和定义 2 GB/T19495. 2004转基因产品检测实验室技术要求; GB/T19495.3一2004转基因产品检测核酸提取纯化方法; GB/T19495.4一2004转基因产品检测核酸定性PCR检测方法; GB/T19495.5一2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法; GB/T19495.62004转基因产品检测基因芯片检测方法; GB/T19495.7一2004 转基因产品检测抽样和制样方法; GB/T19495.82004 转基因产品检测蛋白质检测方法 本部分附录A,附录B为规范性附录 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本部分由质量监督检验检疫总局批准发布 本部分起草单位上海市农业科学院、农业大学、农业科学院生物技术研究所、农业部科技 发展中心,国家质量监督检验检疫总局动植物检疫实验所、上海交通大学、上海出人境 检验检疫局、华南农业大学 本部分主要起草人张大兵、黄昆仑、陆伟、潘爱虎付仲文,朱水芳、梁婉琪、贾军伟、潘良文、 梅曼彤 本部分系首次发布的国家标准
GB/T19495.8一2004 转基因产品检测蛋白质检测方法 范围 GB/T19495的本部分适用于以检测目标蛋白为基础的转基因产品定性定量检测方法 本部分附录中列出的检测方法是以现有抗体为基础的检测方法 规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T19495的本部分的引用而成为本部分的条款 凡是注日期的引用文 件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本 部分 GB/T19495.12004转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495. 2004转基因产品检测实验室技术要求 " -2004转基因产品检测抽样和制样方法 GB/T19495. 术语和定义 下列术语和定义适用于GB/T19495的本部分 -般术语 3.1 基质 martiX 测试样品中包含被溶解或固定的目标蛋白的所有物质组分的混合物 3.1.2 蛋白质变性denturatimfpteins 由于物理或化学等处理使目标蛋白的结构受到破坏或修饰,其功能、酶学性质或抗原性发生改变 3.2与抗体有关的术语 3.2.1 抗体antilody B淋巴细胞对异源成分分子(抗原)反应时产生并分泌的免疫球蛋白,可与抗原特异性结合 3.2.2 抗原antigen 被免疫系统识别、并可激发免疫系统产生免疫反应的物质 3.2.3 克隆elone 来源于一个单细胞系的相同细胞 3.2.4 交叉反应eross-reactivity 抗体与目标蛋白之外的其他物质结合的现象 3.2.5 单克隆抗体moneonalantibody 针对一个抗原决定簇、从一个杂交瘤细胞克隆产生的抗体
GB/T19495.8一2004 3.2.6 lantilody 多克隆抗体polyconal 针对多个抗原决定簇,由多个淋巴细胞克隆产生的抗体 3.2.7 抗体特异性specifieityofanantibody -种抗体可专一地与一个抗原决定簇结合而不与其他抗原决定簇结合的能力 3.3目标蛋白为基础的检测技术有关术语 3.3.1 antibody 偶联抗体conjugate 与一个酶或荧光物质结合的抗体 3.3.2 蛋白质免疫印迹westernbloting 从聚丙烯酰胺凝胶上将经过电泳分离的蛋白质转移到固相介质上,目标蛋白可被标记抗体特异识 别的方法 3. 3. linkedimunosorbentassay 酶联免疫吸附分析ELISAenzyme 利用酶联抗体和底物形成有颜色反应的产物的一种体外定量分析方法 3.3.4 检测试剂盒testkit 用于检测某一特定成分的一组试剂的组合体 3.3.5 检测试纸条dipstiekformat 抗体或分析物包被在固相支持物表面,适合快速定性分析的侧向流动试纸条 原理 从测试样品中按照一定的程序抽提出含有目标蛋白的基质,利用抗体与目标蛋白(抗原)特异性结 合特性,通过偶联抗体与抗原抗体复合物的作用产生可检测的信号 试剂 除另有规定外,所有试剂的等级和要求应符合本部分的附录A,附录B和GB/T19495.2一2004中 的规定 如未明确规定的,试剂应是分子生物级的 所有试剂的储存和使用应符合供应商和实验室的 要求 仪器设备 6.1搅拌器 6.2匀浆器 6.3冷冻离心机(4000g一10000g) 6.4酶标仪 取样 按照GB/T19495.7一2004中的规定执行 1 由指定单位提供,给出这一信息是为了方便本部分的使用者,并不表示对该产品的认可 如果其他等效产品具 有相同的效果,则可使用这些等效产品
GB/T19495.8一2004 程序 8.1一般要求 抗体,偶联抗体,底物等的贮藏条件和保质期应与生产商要求一致 为了实施本部分,应注意实验室的质量保证(如有关仪器的校准、两次测定、空白、标准物质的使用、 制作标准曲线等),认真清洗与样品直接接触的所有仪器,以防污染 8.2样品溶液的准备 称取适量有代表性的分析样品于聚丙烯管中,其中一部分用于蛋白质抽提,加人抽提液,匀浆或混 匀,制备样品溶液 对于固体等不能直接测试的样品,经磨碎,搅拌等处理后进行测试 粉末,面粉有膨 胀特性,有时需要用两倍体积的抽提液 脂肪含量高的实验室样品需要抽提较大的测试样本 蛋白质抽提 选用适于特定基质的抽提方法 测试样品或标准品的抽提和稀释等在附录里面有详细描述 应使 用聚丙炜管抽提蛋白,以避免蛋白吸附 在抽提和分析时使用相同的缓冲液.,以尽可能减少基质对检测 的影响,抽提缓冲液应保证最大量地从样品中抽提出目标蛋白成分 8.4标准曲线的制作 使用与基质一致的阳性标准品制作标准曲线 8.5分析程序 按照本部分附录所列程序,根据空白对照、阳性标准品、阴性标准品及测试样品的数量选取适量的 检测试剂,将测试测样品的溶液稀释到适合分析的浓度 根据所选方法,轻轻混匀,使反应在规定的时间和温度范围内进行,根据附录所述方法终止反应,及 时读出检测数值 结果的分析与表述 一般要求 重复测定同一样品的吸光值的差异不得超过15%,计算所得的浓度差异不得超过20% 如果超过 变异系数百分数的上限,必须重新选取样品检测,重复3次以上 检测结果不能表述为在样品中无转基 因成分 9.2定量分析 需要分析下列参数 空白对照,阳性标准品、阴性标准品及测试样品的原始数据; 重复试验的变异系数百分值 阳性标准品的变异系数百分值; 对照样品的变异系数百分值 所有最后检测结果在报告时都必须考虑检测方法的不确定度 定量结果应根据在阳性标准品线性范围内的测量值来计算 9.3结果的表述 定性检测结果表述: -阴性结果“在×××检测下限时未检测到×××”或“低于×××检测的下限时未检测到×× 阳性结果;“在×××检测下限时检测到×××”或“高于×××检测的下限时检测到×××” 定量检测结果表述: 低于定量下限的阳性结果;“阳性,高于检测下限,但低于定量下限” 高于定量下限阳性结果;“在×××检测下限时检测到×××,含量为×××”或“高于××× 检测下限时检测到×××,含量为×××”
GB/T19495.8一2004 10影响检测结果的参数 每次测试样品得到的实验数据,应与试剂盒的各种参数的标准值进行比较,以保证检测结果的可靠 性和一致性,当检测的数值与试剂盒提供的各种参数不一致时,说明这个检测结果不准确,需进一步对 这些检测数据进行验证 10.1交叉反应 检测一个特定的目标蛋白,需分析其在不同基质中反应的特异性 可以用目标蛋白的类似物即具 有相似序列的蛋白来评价交叉反应,同时也要对含有成分尽可能相近的非转基因样品进行检验和比较 10.2基质效应 不同的基质所适用的免疫检测范围不同,应明确基质的应用范围,用与基质相一致的标准品,制作 阳性标准品的稀释曲线,用于测试样品的定量检测,标准曲线的形状不应因基质效应而改变 如果样品 与标准品在不同的基质中进行检验,应考虑基质效应 10.3线性率 对于定量检测来说.应明确不同基质免疫分祈的线性范围 阳性标准品的检测数值在- 一定范围内 应该是线性关系;如果出现曲线,应该检测更多的阳性标准品,获得更多标准点,制作标准曲线;如果曲 线斜率不相同,应对样品稀释和测试,并进行统计分析 验证方法 如果对检测结果出现异议,可以用定性或定量PCR检测方法验证 12检测报告 检测报告至少需包含以下信息 实验室样品的信息 标明是定性或定量检测方法 定性检测下限 最高或最低定量检测的下限; 取样日期,类型， 收样日期 检测日期 测试样品的数量; 检测结果及所采用的数量单位; 在检测中观察到的异常现象; 可能对检测结果有影响,但在方法中未提到的操作或其他因素
GB/T19495.8一2004 附 录 A 规范性附录 转基因植物及其产品中CP4EPss蛋白的EL.IsSA检测 适用范围 A.1 本附录规定了转基因大豆及其初级加工产品中CP4EPSPS蛋白的ELISA方法,也适用于含有 CP4EPsSPS蛋白的其他转基因植物检测 A.2原理 用直接酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测CP4EPSPS蛋白的原理如图A.1至图A.4所示 单克隆抗体; 包被表面 注:酶标板表面包被有特异的单克隆捕获抗体 图A.1 -抗原; 包被表面 注:当加上测试样品时,捕获抗体与抗原结合,未结合的样品成分通过洗涤除去 图A.2 -辣根过氧化酶 检测抗体 包被表面 注:洗涤之后,加人与辣根过氧化物酶偶联的多克隆抗体,该抗体可与CP4EPSPS蛋白的另一个抗原表位特异结合 图A.3
GB/T19495.8一2004 TMB TMB 包被表面 注:洗涤之后,加人辣根过氧化物酶的显色底物四甲基联苯胺 HRP可催化底物产生颜色反应,颜色信号与抗原 --定袍围内呈线性关系 浓度在 波长测每一孔的光密度 显色一定时间后,加人终止液终止反应 在450 50pAm" A.3试剂 A. .3.1检测试剂盒通常提供的试剂 A.3.1.1大豆抽提缓冲液;碉酸钠缓冲液,pH7.5 A.3.1.2大豆分析缓冲液;磷酸盐缓冲液,Tween=20,BSA,pH7.4 3.1.3包被有单克隆捕获抗体的酶标孔 A 与辣根过氧化物酶偶联的兔抗 A 3 偶联抗体稀释剂:10%热灭活的小鼠血清 5 显色底物 终止液.0.5%硫酸 0倍浓缩的洗涤缓冲液;PBs,Tween-20pH7.1 与基质匹配的阴性和阳性标准品,如0.1%,0.5%,1%,2%,5% 其他需要准备的试剂 A.3.2.170%的甲醇溶液(体积比)取700mL甲醇加水定容至1L 95%的乙醇 仪器设备 A.4.1通常实验室仪器设备 A.4.2酶标仪 .3 孔径450Am的滤膜 A.4. A.4.4孔径150Am的滤膜 A.4.5多通道移液器 A.5操作步骤 A.5.1样品的预处理 取500g以上大豆,粉碎、微孔滤膜过滤 在操作过程中小心避免污染,避免局部过热 定性检测 的微孔滤膜孔径应为450um,保证孔径小于450Am的粉末质量占大豆样品质量的90%以上 定量检
GB/T19495.8一2004 测的样品先用孔径为450Am的微孔滤膜过滤后,再经孔径为150Am的微孔滤膜过滤,过滤得到的样 品量只要能满足检测要求即可 对于其他类型的材料采用类似的方法处理 在检测不同批次样品之间应将处理大豆样品的所有设备进行彻底清洁 首先,尽可能除去残留材 料,然后用酒精洗涤两遍,用水彻底清洗,风干 同时,工作区应保持清洁,避免样品交叉污染 A.5.2样品抽提 测试样品、阴性及阳性标准品在相同条件下抽提两次 每一种标准品在称量时按照含量由低到高 的顺序进行 种样品称出0.5g士0.0g,放人15ml聚丙烯离心管中 为避免污染在称量不同样品时. 将每一 用酒精棉擦干净药匙并晾干,或使用一次性药匙 向每个离心管中加A.了nL抽挺拔冲液 将级冲液与管内物质W烈混匀并旋翼熊荡,使之成为均 -的混合物低脂粉末和分离蛋白质需延长混合时间,有时超过15 1;全脂粉末容易混匀,不超过 mln 5 min) 4c下50g离心15mim. 小心吸取上清液于另一干净的聚丙烯离心管中,每管吸取1ml上清液 上清液可于2C一8C贮 存,时间不超过2Ah 在检测前,用大豆检测缓冲液按照表A.1所列比例稀释样品溶液 表A.1不同基质的稀释度 基质 稀释度 大豆 1:300 1;300 豆粉 脱脂豆粉 1300 分离蛋白 1:10 A.5.3ELISA操作步骤 A.5.3.1孵育 在室温下,取出酶标板,加10oL稀释的样品溶液及对照到酶标孔中,轻轻混匀 37C孵育1h(每 次加样应该更换一次性吸头,以免交叉污染 并使用胶带或铝箱封住酶标板,以免交叉污染和蒸发》 A.5.3.2洗涤 把10倍浓缩的洗涤缓冲液用水稀释10倍,用洗涤工作液洗涤酶标板3次 在此过程中,不要让酶 标孔干,否则会影响分析结果;不管是人工洗涤还是自动洗涤,应确保每一孔用相同体积的洗液洗涤,以 免出现错误的结果 人工洗涤;将酶标板翻转,倒出微孔内液体 用装有洗涤工作液的500mL洗瓶,将每孔注满洗涤 液,保持60s,然后翻转,倒掉洗涤液 如此重复操作总共3次 在多层纸巾上将酶标板倒拍数次,以去 除残液(用胶带将酶标板条固定以免滑落). 自动洗涤,孵育完毕,用洗板机将所有孔中的液体吸出,然后在每孔内加满洗涤液 如此重复3次 最后,用洗板机吸出所有孔中洗涤液,在多层纸巾上将酶标板反放拍干,以去除残液 A.5.3.3加入偶联抗体 根据使用说明,用偶联抗体结合稀释剂溶解抗体粉末得到抗体贮存液.于2C8C贮存 取240l偶联抗体贮存液,加人到21mL偶联抗体稀释剂中得到偶联抗体工作液,于2C一8C贮 存 在每孔中加100L偶联抗体工作液,封闭酶标版,轻轻摇晃混匀,37C孵育1h A.5.3.4洗涤 洗涤方法同A.5.3.2
GB/T19495.8一2004 A.5.3.5显色 每孔中加人100L显色底物,轻轻摇动酶标板,室温孵育1omin(加显色底物时应连续一次完成,不 得中断,并保持相同次序和时间间隔 A.5.3.6终止反应 按照加人显色底物同样的顺序向酶标孔中加人100L终止液,轻轻摇动酶标板10s,以终止颜色 变化,并使终止液在孔中均匀分布(在加人终止液时应连续一次完成,不得中断,酶标板应注意避光,防 止颜色深浅因受到光的影响而发生变化) A.5.3.7吸光值的测定 在加人终止液30min之内用酶标仪在450nm波长测量每孔的吸光值(oD). 记录所得结果,用计算机软件处理 A.6流程图 蛋白质抽提流程见表A.2,ELISA实验流程见表A.3 表A.2蛋白质抽提流程 程 序 详细说明 称量 称量0.5段测试样品,空白,参照标准 加缓冲液 加人抽提缓冲腋(A.3.1.1)4.了nL 混匀 使测试样品与抽提缓冲液充分混匀,高脂粉末低于5min,低脂粉末,分离蛋白质15min以上 离心 在4c以5000g将样品离心15min,吸取上清液到另一干净离心管中 稀释 根据基质不同以1;300或1:10稀释,稀释测试样品溶液,空白、阴性和阳性标准品 表A.3ELISA实验流程 详 程序 体积 细说明 加样 微量移液器吸取已稀释的样品溶液、空白、阴性和阳性标准品至相应酶标孔 100Al 孵育 37C孵育1h. 洗涤 用洗涤缓冲液(A.3.1.8)洗涤3次 加样 向每个酶标孔中加人偶联抗体(A.3.1.4 100AL 孵育 7C孵育1 洗涤 用洗涤缓冲液(A.3.1.8)洗涤3次 加样 100AL 向每个酶标孔中加人显色底物(A.3.1.6) 孵育 室温孵育10min 加样 向每个酶孔中加人终止液(A ，3.1，7) 100AL 混匀 轻轻混匀10s 测量吸光度 用酶标仪测量每孔在450nm的吸光度 测试样品中目标蛋白浓度的计算 测试样品及参照标准的数值需减去空白样的数值,所测量的阳性标准品的平均值用于生成标准曲 线,测试样品的平均值根据标准曲线计算相应浓度
GB/T19495.8一2004 A.8结果可信度判断的原则 对于阳性标准品(大豆种子)而言,该方法检测的灵敏度必须保证在0.1%以上,定量检测的线性范 围是0.5%3% 每一轮检测都必须符合表A.4所列的结果可信度判断的原则 每一轮反应应当包括空白,阴性标 准品、阳性标准品和测试样品 所有样品检测液、空白对照都必须设置一个重复 如果不符合表A.4 中所列的条件,所有检测实验需重新操作 表A.4结果可信度判断的条件 空白对照 OD0m<0.30 阴性标准品 0.30 ODs 2.5%阳性标准品 oD 0.8 一 重复的OD值差异<15% 所有阳性标准品,oD值 重复的CV15% 重复的cV<20% 未知样品、溶液 重复的浓度值差异<20%
GB/T19495.8一2004 附录 规范性附录 转基因植物及其产品中Cry1Ab/Ac蛋白的试纸条检测 适用范围 本附录规定了转基因抗虫棉及其初级加工产品中Cry1Ab/Ac蛋白的一种胶体金标记免疫试纸条 检测方法,也适用于含有Cry1Ab/Ac蛋白的其他转基因植物检测 B.2 原理 用胶体金标记免疫试纸条法检测BT蛋白的原理如图B.1、图B.2所示 吸收热 C节 T带 稍酸纤维素膜 PvC底板 胶体金垫 样品吸收垫 图B.1金标免疫检测试纸条系统示意图 试纸条系统使用一种特殊的多孔膜(NC膜)作为固相载体 该膜具有很强的蛋白吸附功能,抗体 吸附于NC膜并经干燥处理后即作为固相,可与液相中的相应抗原抗体免疫金快速结合 作为金标免 疫检测试剂盒系统主体的膜反应体系由以下部分组成 硝酸纤维素膜;高蛋白亲和性的高分子纤维素膜(NC膜),经预处理后制备为反应膜,用来作 为系统反应的载体和显示反应结果 样品吸收垫;采用吸水玻璃纤维,加速吸水 -胶体金垫:采用吸附力较强的玻璃纤维,作为金标记抗体的固相载体 吸收垫;吸水垫 PVc底板;一种塑料基板,作为反应体系的支撑物 1o
GB/T19495.8一2004 质控带 金标抗体对应 多抗包被 质控带 金标抗体与 抗原免疫 检测带 单抗包被 mmY 检测带 金标抗体富集带 固定金标抗体 图B.2金标试纸条反应原理图 在湿润状态下,液相中的抗原抗体免疫金可因“灯芯引流现象”作快速定向泳动并与固相另一抗原 决定簇单抗结合,形成特异的金标记抗体一抗原一抗体红色沉积线,表现出抗原抗体的特征反应 如果 Cry1Ab/Ac蛋白在植物样品中浓度等于或高于其检测灵敏度值时,在检测带上出现特异的金标记红色 沉积线,质控带也出现红色沉积线 阴性结果在检测过程中由于检测带没有抗体抗原反应,将会仅在质 控带上出现胶体金标记红色沉积线 B.3试剂 B.3.1 -般要求 除非特别说明之外,在分析过程中,建议采用分析纯的试剂和燕憎水 试纸条需贮藏在4C一25C的干燥环境中,试纸条包装上明确标注了保质期,稳定性试验证明,试 纸条在4C25C的干燥环境可保存18个月 如果试剂盒有抽提缓冲液,稀释好的抽提缓冲液也应保存在4C一25C,保存时间不能超过试剂盒 的保质期 B.3.2检测试剂盒通常提供的试剂 B.3.2.1棉花抽提缓冲液 B.3.2.2BT体金标记免疫检测试纸条 每条试纸条只检测一次,不能重复使用 B.3.3检测试剂盒未提供的试剂 去污剂(可任意选择). 仪器设备 B.4 常规实验设备 B.5操作步骤 B .5.1样品预处理 样品经研磨后用样本缓冲液或蒸榴水抽提和稀释,混匀后静置,取上清液作为测试样品 样品的制 备与稀释对检测性能有明显影响,如样品液有大量组织块,会影响检测条吸取样品液;如样品太稀,则易 出现假阴性结果(植物叶子样本,可使用试剂盒配套提供的叶片专用处理袋) 11
GB/T19495.8一2004 在检测不同批次样品之间应将处理棉花样品的所有设备进行彻底清洁 首先,尽可能除去残留材 料,然后用酒精洗涤两遍,用水彻底清洗,风干 同时,工作区应保持清洁,避免样品交叉污染 B.5.1.1同一植株棉花种子 用粉碎机或其他适宜器械将种子磨碎至粉末 称取0.5g一2g,放人带盖离心管中,按表B.1中比 例加人样本缓冲液或蒸僧水,振荡2" min~5min,静置,取上清液作为测试样品 B.5.1.2多植株混合棉花种子 至少取200只样本,粉碎至粉末,称取20g一50g,放人500ml烧瓶中,按表B.1中比例加人样本 缓冲液或蒸僧水,振荡2min5min,静置,取上清液作为测试样品 B.5.1.3同一植株棉花叶片或茎 在样本处理袋中加人3mL样本缓冲液或蒸水,取0.3g棉花叶片或茎放人样本处理袋,将叶子 磨碎,静置,取上清液作为测试样品 B.5.1.4多植株棉花叶片或茎 取同样大小的叶片或茎,取2g一4g棉花叶片或茎放人样本处理袋，按表B.1中比例加人适量样本 抽提缓冲液或蒸僧水,磨碎叶片,混匀,静置,取上清液作为测试样品 在检测前,用棉花检测缓冲液按照表B1所列比例稀释样品溶液 表B.1不同基质的稀释度 叶片及" 种 植物种类 叶子/样本缓冲液或水/(g/mL) 种子/样本缓冲液或水/g/mL 棉花 B.5.2胶体金标记免疫试纸测试 试纸条应避免受,否则对检测性能有显著影响 另外,使用前应将试剂盒、样品缓冲液恢复至室 温(15C30C). 取500L样本抽提液至微量离心管 取出检测条,将标有箭头的一端垂直插人准备好的样品液中,浸人样品液的深度约为0.5cm，不能 超过“max”标记部位 试纸条取出后,应在1h内使用,室温高于30C和潮湿的环境中应尽快地使用. 检测条浸在样品液3min一5min,取出观察结果 B.6结果分析 测试样品加人样品孔后,吸水材料使测试样品缓慢上移,膜反应体系被启动,反应结果如图B.3所 示 对于转基因抗虫棉阳性标准品而言,该方法检测的灵敏度必须保证在0.25%以上 质控线 检测线 阴性 阳性 无效 图B.3试纸条检测结果示意图 12
GB/T19495.8一2004 阴性;质控区(C)出现一条红色条带,测试区内(T)未出现红色检测带(如图B.3) -阳性;质控区(C)出现一条红色条带,在测试区(T)内同时出现红色条带(如图B.3) -无效:质控区(C)未出现红色条带,表明操作过程不正确或试纸条已变质损坏(如图B.3) 在此情况下,应重新测试 13
GB/T19495.8一2004 参 考 文献 [1] Lipp,M.，Anklam，E.，andSte save，J.,2000.Validat tionofanlmmunoassayforDetection oodFra Ref- lQmtatonolaGcaetialyMoadifcdsoyheanimFecdandFa and Usinx ractions Materialse Interlabo JournalofAOACInternationalVol83，No. oratoryStudy erence .919 927 Pp. Detectionof [2]EUROPEANSTANDARDprENISO21572 Foodstuffs geneticallymodi fied andderivedproduw ProteinbasedmethodsIsO/DIs21572;2002) ucts organistms [3]COMMIsSIONDIRECTIVEof24July1979establishingCommunitymethodsofsampling ortheofeialcontrolopesticideresiduesin.andonfruitandvegetables(79/700/EEc) [4]HSU-YANGLIN*，JIN一WENCHlANG;ANDDANIEL.YANG;-CIHIHsSHIH.De ecionofGeneticallyModifiedSoybeansbyPCRMethodandImmunoassayKits Journalof FoodandDrugAnalysis，2001,9(3):160一166 14