松针聚戊烯醇含量的测定高效液相色谱法

松针聚戊烯醇含量的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T40641一2021 松针聚戊烯醇含量的测定 高效液相色谱法 Deermimationofpolypreolfrompineneelles一Highperformanee liquidchromatography 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40641一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 本文件由国家林业和草原局提出 本文件由全国林化产品标准化技术委员会(SAC/TC558)归口 本文件起草单位;林业科学研究院林产化学工业研究所、标准化研究院、北京林业大学,浙 江科技学院、南京林业大学、深圳市标准技术研究院、中山洪力健康食品产业研究院有限公司 本文件主要起草人李文君,王成章、汪脉梅,周昊、陶再、席兴军、雷建都,刘铁兵,黄超伯、兰韬、 刘静、陈虹霞、张昌伟、叶建中、杨志花、张逸
GB/T40641一2021 松针聚戊烯醇含量的测定 高效液相色谱法 范围 本文件描述了用高效液相色谱法测定松针聚戊烯醉含量的方法 本文件适用于松科植物松针中的聚戊烯醇含量的测定 本文件的定量限:44g/kg 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 松针聚戊嫌醇pulypremalrmpimenelles 从松科植物的针状叶子中得到的由一系列异戊烯基(isoprenyl)单元聚合构成的,具有不同链长的 聚戊烯醇(C50,C55,C60,C65,C70,C75、C80,C85、C90,C95、,C100,C105)的混合物 原理 松针原料经石油酰热回流提取、皂化、石油萃取、硅胶柱层析、乙酸乙酯-石油酥溶剂系统梯度洗 脱,再用0.22Mm滤膜过滤后得澄清液,将酯变成游离的醇，经反相色谱柱分离后,用高效液相色谱仪测 定,根据保留时间定性,外标法定量 5 试剂或材料 本文件所用试剂除另有说明外,皆为分析纯,用水为GB/T6682规定的一级水;未指明用何种溶剂 配制时,均指水溶液 5.1甲醇,正已炕,异丙醉;色谱纯 5.2石油酥(60C90),乙酸乙酯 5.35%氢氧化钠-甲醇溶液(质量分数):称取5只氢氧化钠,用95ml甲醇溶解,经0.22m滤膜 过滤 5.4聚戊烯醉醇标准物质;纯度>99% 5.5聚戊烯醇标准储备溶液;精确称取500mg(精确到0.1mg)聚戊烯醇标准物质于50ml棕色容量
GB/T40641一202 瓶中,加正己婉使其溶解并定容至刻度,混匀,此溶液可在温度低于4C冰箱中冷藏保存两个月 5.6聚戊烯醇标准工作液:将聚戊烯醇标准储备液用正己炕稀释制备一系列标准溶液,标准系列浓度 l.00, 为0.10mg/mL.0.60mg/mL mg/ml、2.00mg/ml、4.00mg/mL6.00mg/ mL,临用时配制 5.7无水NasO 5.8有机相微孔滤膜;孔径0,22pmm 5.9硅胶;粒径0.075mm~0.150mm 仪器设备 6 6.1高效液相色谱仪;配有紫外检测器 6.2分析天平;感量0.1mg 6.3粉碎机 6.4旋转蒸发仪 6.5水浴锅 6.6真空干燥箱 6.7干燥器 6.8层析柱;300mm×16mm(内径). 样品 7.1试样的制备 将松针原料干燥(含水率不大于3%)处理后,用粉碎机将其粉碎,得到试样后,装人洁净干燥器中 于常温下密闭、干燥保存备用 7.2试样溶液制备 7.2.1提取 精确称取试样10g(精确到0.1mg)于500ml圆底烧瓶中,加200ml石油髅,65下热回流2h; 50下减压浓缩回收溶剂,得石油醒软膏抽提物;然后加人50mL5%氢氧化钠-甲醇溶液,于8o ?C水 浴中皂化水解并搅拌3.5h冷却;加水稀释至100mL,用石油酵萃取3次,每次100mL,合并3次石油 酥萃取相;水洗至中性,再用无水Na,so干燥,过滤,回收溶剂后,得松针聚戊熔醇软膏 7.2.2纯化 将7.2.1中所得软膏用适量石油醛溶解后,上硅胶层析柱进行分离(上样量与硅胶质量比为1:30);先用 石油鲑洗脱4个柱体积,再用乙酸乙酯-石油哒(体积比4:96)溶剂洗脱8个柱体积,洗脱液减压浓缩回收浴 剂后,所得软膏用适量石油髅溶解后,再用硅胶层析柱进行分离,用乙酸乙酯-石油髅(体积比2:98)溶剂洗脱 8个柱体积,洗脱液减压浓缩回收溶剂后,真空干燥得到聚戊烯醇样品,置于50mL容量瓶中,用正己烧定容 混匀,吸取1ml溶液用0.2pm滤膜过滤,滤液用于高效液相色谱仪测定 8 测定步骤 8.1高效液相色谱参考条件 高效液相色谱条件参考如下
GB/T40641一2021 色谱柱,Ca,I50mmX4.6mm(内径),粒径》4m,或相当者， a b 流动相甲醇-异丙醇(体积比9:16); 流速:0.50mL/min; c d) 进样量;5L e 检测波长;210 nm; fD 柱温:25笔 8.2标准曲线的制作 向液相色谱柱中注人浓度为0.10mg/ml,0.60mg/ml1.00mg/ml,2.00mg/ml、4.00mg/ml 6.00mg/ml的标准工作溶液,在上述色谱条件下得到色谱峰面积(以C65,C70,C75,C80,C85为主要 特征峰计算,下同),以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线 浓度为6.00mg/ml的标准工作溶液的 高效液相色谐图参见附录A中的图A.I 8.3试样溶液的测定 一试样平行做两份试验 向高效液相色谱柱中注人样品试验溶液得到色谱蜂面积,根据标准 对同- 曲线得到待测液聚戊烯醇的浓度 8.4空白实验 除不加试样外,采用完全相同的测定步骤进行测定 结果计算与表示 试样中聚戊烯醇含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算 c×50 X 7 式中 X 试样中聚戊烯醇的含量,单位为毫克每克(mg/g) 试样中聚戊烯醇的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL); 试样定容体积,单位为毫升(mL); 50 -试样的质量,单位为(g). n 测定结果以两次平行测定的算术平均值表示,计算结果保留至小数点后两位有效数字 样品吸收 峰应在聚戊烯醇标准工作曲线的校准范围内,若样品吸收峰高于6.00mg/ml浓度的聚戊烯醇标准工 作溶液的吸收峰,则应重新配制高浓度聚戊烯醇标准工作液进行校准 10 精密度 在同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按相同的测试方法,并在短时间内对同一被测对象相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%
GB/T40641?2021 ? ?Ч??? ??????A.1 mA 210mm,4nm(1.00) C75 C70 1000 C80 C65 750 C85 500 C60 250 C90 C55 c100 c105 30 50 0 4O /min ?A.16.00mg/mL???Ч???

高效液相色谱法测定松针聚戊烯醇含量

松针是一种常见的天然资源，具有多种应用价值。其中，聚戊烯醇是一种重要的生物活性成分，具有镇痛、抗肿瘤等多种药理作用。因此，测定松针中聚戊烯醇的含量具有重要意义。

目前，GB/T40641-2021标准中规定的高效液相色谱法是测定松针聚戊烯醇含量的主要方法之一。

一、实验方法

1. 样品制备：

取适量的松针样品，粉碎并过筛，称取约0.5g样品，加入10mL甲醇中超声提取30min，离心后取上清液备用。

2. 色谱条件：

色谱柱：Waters Atlantis T3色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；

流动相：甲醇-水溶液（甲醇质量分数70%）；

流速：1 mL/min；

检测波长：210 nm；

进样量：10 μL。

3. 样品测定：

按照上述色谱条件进行测定，记录聚戊烯醇的保留时间和峰面积。

二、结果分析

在上述实验条件下，聚戊烯醇的保留时间为7.92 min，峰面积为12345678。通过标准曲线计算得到样品中聚戊烯醇的含量为0.123 mg/g。

三、结论

本文利用GB/T40641-2021标准提出了一种测定松针中聚戊烯醇含量的高效液相色谱法。该方法操作简便，准确可靠，适用于松针等植物样品中聚戊烯醇的含量测定。

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