蜂蜜中淀粉糖浆的测定离子色谱法

蜂蜜中淀粉糖浆的测定离子色谱法

国家标准 GB/T215332008 蜂蜜中淀粉糖浆的测定离子色谱法 Determinationofstarehsrupyinhoney一onchromatwgraphmy 2008-04-09发布 2008-09-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21533一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出 本标准由中华全国供销合作总社归口 本标准起草单位:大连市产品质量监督检验所 本标准主要起草人:潘炜、王春燕、郑顺利、于利军、牟世芬、张明、李鹏、董广彬、李海燕、姜俊 本标准为首次发布
GB/T21533一2008 蜂蜜中淀粉糖浆的测定离子色谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中果葡糖浆、麦芽糖浆、异麦芽糖浆、洽糖浆等淀粉糖浆的测定方法 本标准适用于蜂蜜中淀粉糖浆的测定 本标准检出限;5%淀粉糖浆 原理 蛟蜜中不含五糖(DP5)以上的寡糖,而各种淀粉糖浆中均含五糖(DP5)以上的寡糖,使用凝胶体积 排阻法去除样品中果糖、葡萄糖,将寡糖富集后直接经阴离子交换色谱-电化学检测器检测,将五糖 DP5)以上寡糖的存在作为蜂蜜中淀粉糖浆的判定指标 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂为分析纯,所用水为18.2Mn/em的高纯水 3.1聚丙烯酰胺凝胶微球,粒径45am一90m,分级分离的相对分子质量范围1001800,按使用说 明书进行水化和脱气 注:可使用Bio-GelP-2Gel型聚丙烯酰胺凝胶或同等性能的凝胶材料 3.2凝胶层析柱;将聚丙烯酰胺凝胶(3.1)湿法装人1.5cm×15cm空柱管中,装人的凝胶高度为 l0cm， 上端保持1cm以上的水层,避免干澜 3.3层析柱架 麦芽糖标准储备液;分别称取色谱纯麦芽糖、麦芽三糖,麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖 3.4 标准物质各10.0mg,用水分别溶解定容至10ml,配制成浓度为1mg/ml的储备液,于棕色瓶中4c 下储存 3.5麦芽糖标准混合使用液;吸取一定量的麦芽糖标准储备液(3.4),按表1用水配制麦芽糖标准混合 使用液,在4C下保存不超过30d 该溶液用于样品色谱图中寡糖保留时间的定位 表1麦芽糖标准混合使用液的配制 标准物质 麦芽糖 麦芽三糖 麦芽四桃 麦芽五糖 麦芽六糖 麦芽七糖 0.20 0.50 储备液吸取量 ml 0.l0 0.30 0.40 l.00 定容体积/ml. 10 40 50 混合使用液浓度/(ug/ml 10 20 30 100 3.650%氢氧化钠储备液符合离子色谱使用纯度 无水乙酸钠;符合离子色谱使用纯度 3.80.45Am样品滤膜;水性 仪器 离子色谱仪;配电化学检测器 4.1 4.2分析天平;感量0.1mg 试样制备 5 称取混匀的蜂蜜2.0g作为试样,用水溶解后定容至20mL,用0.45Am水性滤膜过滤,滤液
GB/T21533一2008 备用 5.2将准备好的聚丙烯酰胺凝胶层析柱(3.2)中的水放尽,至下端无水珠滴下时,将样品滤液(5.1 2.0ml沿柱壁慢慢加人层析柱中,恰好流至凝胶上方无液时,加人3.0mL水冲洗柱壁,又至凝胶上方 无液时,再加人5.0mL水冲洗凝胶柱 注意每次在层析柱上方加液(或水)的时机,应是前次加液(或 水)的层析柱体上端液体怕好流尽,下蹦恰好无液体滴出 弃去上述三次共10.0m流出液后于层桥 柱下方接上一支2mL具塞塑料离心管,从柱上方加人2mL水,收集这2mL流出液至离心管中,盖紧 离心管塞,摇匀后作为待测样品溶液,24h之内测定 层析柱中加人50ml水冲洗,至全部流出后,该 柱直接用于处理下一个样品 5.3将纯蜂蜜作为阴性对照品,蜂蜜中掺人5%市售果葡糖浆、蜂蜜中掺人5%市售麦芽糖浆的样品作 为阳性对照晶,按照5.1和5.2进行操作 测定 6.1离子色谱条件 nx0. .1.1色谱柱;CarboPacTruPA2003mm×250nmm带CarboPaerMPA2003nmm )mm保护柱)或 6. 相当性能的分离柱,柱温30C 6.1.2流动相;A;100%水;B;200mmol/L氢氧化钠,200mmol/I乙酸钠 梯度洗脱条件见表2 表2梯度洗脱条件 流动相/% 时间/min 流速/ml/min) 曲 线 B 90 10 线性 0,4 90 10 线性 线性 20 0,4 70 30 70 线性 30 0.4 30 lo 40 90 线性 60 0.4 90 1o 线性 .1.3检测器:电化学检测器;Au工作电极;Ag/AgCl参比电极 检测池温度30C 糖检测波形参 6. 见表3. 表3糖检测波形 时间/s 电位/ 积分 时间/s 电位/V 积分 0.00 十0.10 o. .42 -2.00 0.20 十0.10 开始 0.43 十0.6o 0.40 十0.l0 结束 0.44 -0.10 0.41 -2.00 0.50 -0.10 进样量;20l 样品测定 依次将麦芽糖标准混合使用液(3.5)、纯蜂蜜阴性对照品(5.3)、含5%果葡糖浆的蜂蜜(5.3)和含 5%麦芽糖浆的蜂蜜等阳性对照品(5.3)的寡糖收集液注人离子色谱仪中,观察离子色谱图,当谱图与附 录A中参考谱图基本吻合时,方可进行实测样品的测试 结果判定 分析比较纯蜂蜜阴性对照样品和含5%糖浆的蜂蜜阳性对照样品的寡糖谱图,找到两者之间有明
GB/T21533一2008 显差异的“指纹区”,并以此作为纯蜜中掺人淀粉糖浆的判定指标 任一掺人果葡糖浆的蜂蜜样品,在麦 芽五糖至麦芽六糖之间和麦芽六糖至麦芽七糖之间有两个典型的“指纹峰"P1和P2,根据这两个峰的 出现可判断蜂蜜中掺人果葡糖浆 任一掺人麦芽糖浆的蜂蜜样品,在麦芽五糖至麦芽六糖之间、麦芽六 糖至麦芽七糖之间以及麦芽七糖之后,有三个典型的“指纹峰簇”P1、P2和P3,根据这三个峰簇的出现 可判断蜂蜜中掺人麦芽糖浆(包括高麦芽糖浆、异麦芽糖浆和冶糖糖浆) 除了描述出的基本特点外,不 同工艺条件下生产的糖浆还可见到其他出峰位置有其他峰形特征的微量寡糖峰,但不影响“指纹区”的 基本特征和判定 麦芽糖标准混合使用液、纯蜂蜜将含5%果葡糖浆的蜂蜜、含5%麦芽糖浆的蜂蜜的寡糖离子色谱图 参见图A.1、图A.2、图A.3、图A.4
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