国家标准 GB/T40049一2021 鸡肠炎沙门氏菌PCR检测方法 PCRdeteetionethodofchickensalmonellaenteritis 2021-04-30发布 2021-11-01实施国家市场监督管理总局发布国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40049一2021 前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由农业农村部提出本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(sC/Tc181)归口本标准起草单位:山东农业大学、青岛农业大学、动物卫生与流行病学中心,山东省农业科学院家禽研究所、秦皇岛海关、山东派克检测技术有限公司本标准主要起草人:常维山、孙淑红、王述柏、翟海华、崔言顺,柴同杰、鞠孜敬、赵效南、王涛、黄兵、宋敏训、马秀丽、高月花,郑德云、郭树源、马洪超、孙杰、张富友
GB/T40049一2021 鸡肠炎沙门氏菌PCR检测方法范围本标准规定了鸡肠炎沙门氏菌分子分型的PCR检测方法本标准适用于各种日龄的鸡及其产品中携带的肠炎沙门氏菌的PCR方法检测规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB4789.4一2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T28642一2012饲料中沙门氏菌的快速检测方法聚合酶链式反应(PCR)法 NY/T541一2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范术语和定义下列术语和定义适用于本文件 3.1 持家基因hosckeeping媒ne 生物体在生理、病理和不同发育阶段的在所有类型的细胞中都表达的一类基因这类基因高度保守,基因产物对于维持细胞的基本结构和代谢功能是必不可少的缩略语下列缩略语适用于本文件 DNA,脱氧核糖核酸(deoxyribonuelecacid PCR;聚合酶链式反应(polymerasechainreaction) 试剂和材料除另有规定外,所用试剂均为分析纯实验用水均符合GB/T6682一2008二级水规定 5.1LB液体培养基(配制方法见附录A中A.1) 5.2缓冲蛋白陈水(BPw)前增菌液(配制方法见A.2) 5.3亚晒酸盐胱氨酸(SC)增菌液(配制方法见A.3) 5.4四硫磺酸盐煌绿(TTB)增菌液(配制方法见A.4). 5.5木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂D.3(配制方法见A.5) 5.6TAE电泳缓冲液(配制方法见A.6). 5.7阳性、阴性对照:阳性对照为肠炎沙门氏菌标准株(CVCC3377)培养液、鸡白痢沙门氏菌标准株
GB/T40049一202 CVCC535)培养液;阴性对照为灭菌超纯水 5.8细菌基因组DNA提取试剂盒;商品化试剂盒 5.9无水乙醇:一20C预冷 5.1075%乙醉;无水乙醇和双蒸水配制,一20C预冷 5.11DNA分子量标记:DNAMarker200o 5.12琼脂糖 5.13 七个持家基因片段的PCR引物序列:参见附录B的B.1 5.142×PCRMix 6 仪器 6.1恒温培养箱(温度范围:5C50C,温度均匀度:<士1C) 6.2高压灭菌锅灭菌温度;105C135C,工作压力;<0.35MPa) 6.3电子天平(感量0.001g) 高速离心机(可控温至4c: 6.4 、离心速度可达12000r/min以上 6.5 二级生物安全柜 6.64C冰箱温控范围2~8);-20C冰箱 PCR仪 6. 6.8电泳仪(电压90V120V) 6.9微量移液器(2L,20AL,200AL、1000aL)及配套吸头 6.10电泳仪(电压90V120V) 6.11控温摇床(温度范围5C50C,振荡频率;30r/min300r/min) 6.12凝胶成像仪 6.13PCR反应管 6.141.5mL带盖离心管沙门氏菌分离鉴定 7.1样品采集、储存和运输 7.1.1组织样品选择具有典型临床症状的病死鸡,无菌取其肝脏、脾脏等组织样品,放置于无菌容器内,标记好组织名称和采样日期,冷藏运送到实验室进行检测按照NY/T5412016中6.2执行 7.1.2肠内容物样品按照NY/T54l一2016中6.7.2执行 7.1.3粪便样品按照NY/T541一2016中6.8.1执行 7.1.4泄殖腔拭子样品按照NY/T541一2016中6.8.2执行
GB/T40049一2021 7.2沙门氏菌分离鉴定按照GB4789.4一2016执行,进行分离、培养,至生化试验部分,完成疑似沙门氏菌菌株的初步鉴定鸡肠炎沙门氏菌的CR检测方法 8.1细菌基因组DNA提取将初步鉴定为沙门氏菌的菌株用商品化试剂盒进行基因组DNA提取提取方法按试剂盒说明书要求进行 8.2持家基因引物设计合成七个持家基因的引物引物DNA序列参见B.1 8.3持家基因CR扩增用B.1中所列七对引物对样品基因组DNA的七个持家基因分别进行PCR扩增具体实验操作符合GB/T28642一2012检测技术要求 50ALPCR反应体系参见B.2 min;94C45s,55C45s,72C1min PCR反应程序:94C5 n,共35个循环;72C7min;4 保存 8.4CR产物电泳取5L10ALPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳(电泳方法参见GB/T28642一2012),电泳结束后,用凝胶成像仪观察结果 8.5PCR阳性产物测序将七个持家基因均扩增出特异性条带的PCR产物进行测序 8.6结果判定 8.6.1试验成立条件利用B.1规定的七对引物,阳性对照菌株PCR产物电泳后分别出现七条特异性的扩增条带,阴性对照PCR产物无扩增条带,试验结果成立否则试验不成立七个持家基因的PCR产物电泳图参见附录C 8.6.2肠炎沙门氏菌分子分型判定使用DNA序列分析软件,将七个持家基因PCR产物DNA序列与附录D所列参考序列分别进行 -对一比对部分基因提供了2个~3个参考序列 8.6.3测序结果判定七个基因的测序结果与附录D中所对应的参考序列(或之一)均完全一致(即;所测aroC基因序列与D.1.1或D.1.2中序列之一完全一致、所测dnaN基因序列与D.2.1或D.2.2中序列之一完全一致、所测hemD基因序列与D.3中序列完全一致、所测hisD基因序列与D.4.1或D.4.2中序列之一完全
GB/T40049一2021 -致、所测purE基因序列与D.5.1或D.5.2中序列之一完全一致、所测suceA基因序列与D.6.1或 D.6.2中序列之一完全一致、所测thrA基因序列与D,7.1或D.7.2或D.7.3中序列之一完全一致),则可判定样品为肠炎沙门氏菌阳性
GB/40049一2021 录附 A 规范性附录培养基配制 A.1LB液体培养基 A.1.1成分胰蛋白陈 5g 酵母提取粉 10g 氯化钠 10g 1000m 水 A.1.2制备将各成分加人水中,搅混均匀,121C士2高压灭菌15 ,冷却后备用 min A.2BPW前增菌液 A.2.1成分 10.0 蛋白陈 g 5.0 氯化钠 g 磷酸氢二钠含12个结晶水 9.0g 磷酸二氢钾 1.5g 1000mlL 水 A.2.2制备将各成分加热溶解于1000ml水中,121C士2C高压灭菌15min,冷却后备用 A.3sC增菌液 A.3.1成分蛋白陈 5.0g 乳糖 4.0g 亚晒酸氢钠纳 4.0g 磷酸氢二钠 l0.0g L-胱氨酸 0.01 g 水 1000mL A.3.2制备将各成分加热溶解于1000ml蒸馏水中,无菌操作分装于灭菌三角瓶或试管中备用当天制备当天使用,无需高压灭菌
GB/T40049?2021 A.4TB? A.4.1? 9.0 ? g 4.5 ? g 2.7 ? g 40.5 ? g 5.0 g 50.0 g 1050m A.4.2? ??100m?,?30%??0ml.01%10ml. á A.5xLD A.5.1? ? 3.0g 1- 5.0g ? 3.75g 7.5 7.5g 0.,8 g 6.8g ? 5.0g ? 0.08g ? 13.0g ? 1 000ml pH7.4?0.2 25C A.5.2? ???1000mL?,50C?,??,á A.6TAE?? A.6.150TAE??? 40mmmol/I Tris- mmol/L EDTA(pH8.0)
GB/T40049一2021 A.6.21xTAE电泳缓冲液制备先按A.6.1所示成分配制50×TAE电泳缓冲液,将其用蒸溜水50倍稀释即为工作浓度
GB/T40049一2021 附录 B 资料性附录) 测序引物与反应体系七个持家基因测序引物见表B.1 B.1 表B.1七个持家基因片段CR引物序列基因名称引物序列片段大小 F5'-GTCACGGTGATCGATCCG(GT-3" 8521 thrA bp R5'-CACGATATTGATATTAGCCcG3' F5'-CCTGGCACCTCGCGCTATAC-3" 86p aroC R5'-CCACACACGGATcCGTGGCG3 F5'-ATGAAATTTACCGTTGAACGTGA-3 dnaN 8833bp R5'-AATTTCTCATTCGAGAGGATTGC3 F5'-AGCACCGAAGAGAAACGCTG3 stcA 643bp R5'-GGTTGTTGATAACG,ATACGTAC-3" F5'-TCGCGTCTGTCG;GTCTGTAT-3 755l hisD bp R5'-GGCGCAGTATAGcCATAGGT-3' F5'-ATGAGTATTCTGATCACCCG3 66p heD R5'-ATCAGcGAcCTTAATATcTTGcCCA-3" F5-GACACCTCAAAAGCAGCG3 5101 purE bp R5'-CGAGAACGCAAACTTGC'TTC-3' B.2PCR反应体系见表B.2 表B.2PCR扩增反应体系组分体积/4L ddH.O 19.0 2×PCRMix 25.0 F上游引物 2.0 R下游引物 2.0 2.0 DNA模板 50.0 总体积
GB/40049一2021 附录 C 资料性附录七个持家基因PCR电泳图肠炎沙门氏菌阳性菌株七个持家基因PCR电泳图见图C.1 2000bp 000tp 750p 500bp 250bp 00bp 说明 -thrA; sucA; puwrE; -hemD. -hisD; -naN; -aroC; MDNAMakerTans2K 图C.1阳性对照菌的七个持家基因PCR扩增结果电泳图
GB/T40049一2021 附录 D 资料性附录) 七个持家基因DNA序列 aroC基因 D.1 D.1.1aroc5/aroC454 GTTTTcGTccGGGACAcGcGGATTACAcCTATGAGCAGAAATAcGGcCTGcGcGATTAccGTGG CGGTGGAcGTTCTTccGcGcGTGAAAccGcGATGcGcGTAGcGGCAGGGGcGATcGcCAAGAAA TACCTGGCGGAAAAGTTCGGCATCGAAATCCGCGG(CTTGCCTGACCCAGATGGGCGATATTCC GCIGGAGATTAAAGACTGGcGTCAGGTTGAGCTTAATccGTTCTTTTGTcccGATGcGGACAAAC TTGACGCGCTGGAcGAACTGATGCGCGCGCTGAAAAAAGAGGGcGACTcCATCGGcGCGAAAGT GAcGGTGATGGcGAGcGGcGTGccGGCN 3GCTTGGcGAAccGGTTTTTGAccGACTGGATGcG 2AGG GACATCGCCCATGCGCTGATGAGCATCAATGCGGTGAAAGGCGTGGAGATCGGCGAAGGATTTA AcGTGGTGGcGCTGCGcGGCAGcCAGAATcGcGATGAAATCAcGGcGCAGGGT D.1.2aroC41 GTTTTTcGTcCGGGACACGCGGATTACACCTATGAGCAGAAATACGGCCTGCGCGATTACCGTGG CGGTGGACGTTCTTCCGCGCGTGAAACCGCGATGCGCGTAGCGGCAGGGGCGATCGCCAAGAAA TAcCTGGcGGAAAAGTTcGGCATcGAAATcCGcGGCTGcCTGACcCAGATGGGcGACATTccGCT GGAGATTAAAGACTGGCGTCAGGTTGAGCTTAATCCGTTCTTTTGCCCCGATGCGGACAAACTTG AcGcGCTGGACGAACTGATGcCGcGCGcCTGAAAAAAGAGGGTGACTcCATcGGcGcGAAAGTGAC GGTGATGGCGAGCGGCGTGCCGGCAGGGCTTGGCGAACCGGTATTTGACCGACTGGATGCGGAC ATCGccCATGcGCTGATGAGCATTAATGcGGTGAAAGGcGTGGAGATCGGCGAAGGATTTAACG TGGTGGCGCTGCGCGGCAGCCAGAATCGCGATGAAATCAcGGCGCAGGGT D.2dnaN基因 D.2.1dnaN2/dnaN494 ATGGAGATGGTcGcCGcGcGTTAcGCTTTCT TCAGcCGCATGAGccGGGcGcCACTACcGTGCCGGc GCGGAAATTCTTTGATATCTGCCGCGGCCTGCCGGAGGGCGCGGAGATTGCCGTTCAGTTGGAAG GcGATcGGATGCTGGTGcGTTCTGGccGTAGccGCTTCTcGcCTGTCTAcGCTGcCTGccGccGATT 10
GB/T40049一2021 TcccGAATcTTGAcGAcTGGCAAAGcGAAGTTGAATTTAcGCTGccGCAGGcCAcGATGAAGcG cCTGATTGAAGcGACcCAGTTTcGATGGCTCATCAGGATGTGcGCTACTACTTAAACGGTATGC TGTTTGAAACGGAAGGTAGCGAACTGCGCACTGTCGCGACCGAcGGCCACCGC(CTTGGCGGTG TGCTCAATGccGCTGGAAGcGTCTTTAccCAGcCACTcGGTGATTGTGccGcGTAAAGGcGTGAT TGAACTGATGCGTATGCTCGACGGCGGTAAAACCCGCTGCGCGTGCAG dnaN67 D.2.2 ATGGAGATGGTcGCGcGcGTTAcGCTTCTCAGcCGCATGAGcCAGGcGcCACTACTGTGccGGc GCGGAAATTCTTTGATATCTGCCGCGGCCTGCCGGAGGGCGCGGAGATTGCCGTTCAGTTGGAAG GcGATcGGATGCTGGTGcGTTCTGGccGTAGccGcTTCTcGcTGTCTACACTGcCTGccGccGATT ccTGATTGAAGcGAccCAGTTTTcGATGGccCATCAGGATGTGcGCTAcTACTTAAAcGGTATGc TGTTTGAAAcGGAAGGTAGCGAACTGcGCACTGTcGcGACcGAcGGcCAccGcCTGGcGGTGTG CTCAATGCCGCTGGAAGCGTCTTTACCCAGCCACTCGGTGATTGTGCCGCGTAAAGGCGTGATTG AACTGATGcGTATGCTcGACcGGcGGcGAAAAcccGcTGcGcGTGCAG hemD基因 GCGACACTGACGGAAAACGATCTGGTTTTTGCCCTTTCACAGCACGCCGTCGCCTTTGCTCACGC cCAGCTCCAGcGGGATGGccGAAACTGGcCTGcGTcGccGCGCTATTTCGcGATTGGccGCAcCN CGGCGCTCGCCCTTCATACCGTTAGCGGGTTCGATATTCGTTATCCATTGGATCGGGAAATCAGC GAAGccTTGCTACAATTAcCTGAATTACAAAATATTGcGGGCAAAcGcGcGcTGATTTTGcGTGG CAATGGcGGcCGCGAACTGCTGGGCGAAAcCCTGACAGCTcGCGGAGCCGAAGTCAGTTTTTGT GAATGTTATCAAcGATGTGcGAAACATTAcGATGGcGcGGAAGAAGcGATGcGCTGGCATACTc GCGGCGTAACAACGCTTGTTGTTACCAGCGGCGAGATGTTGCAA D.4hisD基因 D.4.1hisD7/966 ATTGcGGGATGTCAGAAcGTGGTTcTGTGCTcGccGccGccCATcGCTGATGAAATcCTCTATGc GGCGCAACTGTGTGGCGTGCAGGAAATCTTTAAcGTcGGCGGCGCGCAGGCGATTGCcGCTCTG GCCTTCGGCAGCGAGTCCGTACCGAAAGTGGATAAAATTTTTGGCCCCGGCAACGCCTTTGTAAC CGAAGcCAAAcGTCAGGTCAGcCAAcGcCTcGAcGGcGcGGCTATcGATATGcCAGccGGGccG 11
GB/T40049?202 TCTGAAGTACTGGTGATcGccGACAGcGGcGCAACAccGGATTTcGTcGcTTcTGAccCTGcTCT CCAGGCTGAGCACGGTCCGGATTCGCAGGTGATTCTGCTGACGCCTGATGCTGACATTGCCTGCA AGGTGGCGGAGGCGGTAGAACGTCAACTGGCAGAACTGCCGCGCGCGGACAC(C/TGCCAGGCA GGcCCTGAGcGcCAGTcGTCTGATGTGACcCAAAGATTTAGcGCAGTGcGTc D.4.2hisD14 ATTGcGGGATGTCAGAAcGTGGTTCTGTGcTcGcCGccGccCATcGCTGATG AA ATcCTCTATGc t GGCACAACTGTGTGGCGTGCAGGAAATCTTTAACGTCGGCGGCGCGCAGGCGATTGCCGCTCTG GCCTTCGGCAGCGAGTCCGTACCGAAAGTGGATAAAATTTTTGGCCCCGGCAACGCCTTTGTAAC CGAAGCCAAACGTCAGGTCAGCCAGCGTCTCGAcGGcCGCGGCTATcGATATGCCAGCcCGGGCCG CTGAAGTACTGGTGATcGCAGACAGcGGcGCAACAccGGATTTcGTcGCTm TCTGAccTGcTcTC CCAGGCTGAGCAcGGCCCGGATTccCAGGTGATCCTGCTGACGcCTGATGCTGACATTGCCCGCA AGGTGGCGGAGGCGGTAGAACGTCAACTGGCGGAACTGCCGCGCGCGGACACCGCCCGGCAGG CcCTGAGcGcCAGTcGTCTGATTGTGAcCAAAGATTTAGcGCAGTGcGTC D.5purE D.5.1purE5 AGcGACTGGGCTACCATGCAATTcGccGcCGAAATTTTTGAAATTCTGGATGTccCcGCACCATGT AGAAGTGGTTTCCGCTCATCGCACCCCCGATAAACTGTTCAGCTTCGCCGAAACGGCGGAAGAG AACGGATATCAAGTGATTATTGccGGcGcGGGcGGcGcGGcGCACCTGccGGGAATGATTGcGG CAAAAACGCTGGTCCCGGTACTCGGCGTGCCGGTACAAAGCGCTGCGCTAAGCGGCGTGGATAG CCTCTACTcCATcGTGCAGATGcCGcGCGGCATTC CG 3TGGGTACGCTGGcGATcGGTAAAGccG GTGCCGCTAACGCCGCCCTGCTCGCCGCGCAGATTCTGGCGCAACACGACGCGGAACTGCATCA GcGCATTGCcGAC D.5.2pur86 AGcGACTGGGCTAcCATGCAATTcGccGccGAAATTTTTGAAATTCTGGATGTcccGCAcCATGT AGAAGTGGTTTCCGCCCATCGCACCCCCGATAAACTGTTCAGCTTCGCCGAAACGGCGGAAGAG AAcGGATATCAAGTGATTATTGccGGcGcGGGcGGcGcGGcGCAccrGccGGGAATGATTGcGG CAAAAAcGCTGGTcCcGGTACTcGGcGTGccGGTACAAAGcGCTGcGCTAAGcGGcGTGGATAG CCTCTACTCCATTGTGCAGATGCCGCGCGGCATTCCGGTGGGTACGCTGGCGATCGGTAAAGCCG GTGccGCTAAcGCcGccCTGCTcGcCGcGCAGATTCTGGcGCAACAcGAcGcGGAACTGCATCA GCGCATTGCCGAC 12
GB/40049一2021 D.6sucA 基因 D.6.1sucA6 AAAcGCTTcCTGAAcGAACTGAccGcCGcTGAAGGGcTGGAAcGTTATCTGGGTGcCAAATTccC GGGTGCGAAACGTTTCTCGCTCGAGGGGGGAGATGCGCTGATACCCATGCTGAAAGAGATGGTT cGcCATGcGGGTAACAGcGGCACTcGcGAAGTGGTGcTGGGGATGGcGcAccGcGGTcGccTGA ACGTGCTGATCAACGTACTGGGTAAAAAACCGCAGGATCTGTTCGAcGAATTTGCCGGTAAGCAT AAAGAACATCTGGGTAccGGcGAcGTGAAGTATCACATGGGCTTCTcGTCAGATATcGAAAccG AAGGcGGTCTGGTTCAcCCTGGcGCTGGcGTTTAAcCCATcGCATCTGGAAATTGTGAGCccGGTG GTGATGGGCTCCGTGCGCGCCCGTCTGGACAGACTGGACGAACCGAGCAGCAACAAAGTGTTGC cGATCACTATTCACGGcGAcGcCGCGGTGAccGGCCAGGGcGTGGTICAG D.6.2scA192 AAAcGcTTccTGAAcGAACTGAcccccGcT CTGGGTGcCAAATIccc TGAAGGGCTGGAACGTTATC GGGTGCGAAACGTTTCTCGCTCGAGGGGGGAGATGCGCTGATACCCATGCTGAAAGAGATGGTT CGcCATGcGGGTAACAGcGGCACTcGcGAAGTGGTGCTGGGGATGGcGCACCGcGGITcGccTGA ACGTGCTGATCAACGTACTGGGTAAAAAACCGCAGGATCTGTTcGACGAATTTGCcGGTAAGCAT AAAGAACATCTGGGTACCGGCGACGTGAAGTATCACATGGGCTTCTCGTCAGATATCGAAACCG AAGGCGGTCTGGTTCACCTGGcGCTGGCGTTTAACCCATCGCACCTGGAAATTGTGAGCCCGGTG GTGATGGGCTCCGTGCGTGCCCGTCTGGACCGACTGGACGAACCGAGCAGCAACAAAGTGTTGC cGATCACTATTCACGGcGAcGcCGcGGTGAccGGCCAGGGcGTGGTTCAG D.7thrA基因 D.7.1thrA1 GTGCTGGGccGTAATGGTTccGACTATTcCGccGcCcGTGCTGGccGcCCTGTTTACGCGCTGACTG CTGTGAAATCTGGACTGACGTCGATGGCGTGTATACCTGTGACCCGCGCCAGGTGCCGGACGCCA GACTGcCTGAAATcGATGTcCTAcCAGGAAGcGATGGAACTCTCTTACTTcGGcGcCAAAGTCCTT CACCCTCGCACCATAACGCCTATCGCCCAGTTCCAGATCCCCTGTCTGATTAAAAATACCGGTAA ccGcAGGcGcCAGGAAcGCTGATcGGcGcGTcCAGcGAcGATGATAATCTGccGGTTAAAGGG ATCTCTAAcCTTAACAACATGGcGATGTTTAGCGTCTCcGGCccGGGAATGAAAGGGATGATTGG GATGGcGGcGcGTGTTTTcGccGcCATGTCTcGcGccGGGATCTcGGTGGTGCTCATTAccCAGT CCTCCTCTGAGTACAGCATCAGCTTCTGTGTGCCGCAGAGTGACTGC 13
GB/T40049?2021 D.7.2thrA10 GTGCTGGGccGTAATGGTTccGACTATTccGccGccGTGcTGGccGcCTGTTAcGcGCTGACTG CTGTGAAATCTGGACTGACGTCGATGGCGTGTATACCTGTGACCCGCGCCAGGTGCCGGACGCCA GGCTGCTGAAATcGATGTcCTAcCAGGAAGcGATGGAACTcTCTTACTTcGGcGcCAAAGTTCTT CAccCTcGCACCATTACGccCATCGccCAGTTCCAGATccCCTGTCTGATTAAAAATAccGGTAA ccGCAGGcGccAGGAAcGCTGATcGGcGcGTcCAGcGAcGATGATAATCTGccGGTCAAAGGG ATCTCTAAcCTTAACAATATGGcGATGTTTAGcGTCTccGGcccGGGAATGAAAGGGATGATTGG GATGGCGGCGCGTGTTTTCGCCGCCATGTCTCGCGCCGGGATCTCGGTGGTGCTCATTACCCAGT CCTcCTCTGAGTACAGCATCAGTTIcTGTGTGCcGCAGAGTGACTGcC D.7.3thrA 11 GTGCTGGGCCGTAATGGTTCCGACTATTCCGCCGCCGTGCTGGCCGCCTGTTTACGCGCTGACTG cGrGTAT cCTGTGA CTGTGAAATCTGGACTGAcGTCGATGGC ccCGcGcCAGGTGccGGAcGcCA TAC GGCTGCTGAAATCGATGTCCTACCAGGAAGCGATGGAACTCTCTTACTTCGGCGCCAAAGTTCTT CAccCTcGCAcCATTAcGccCATcGccCAGTTcCAGATcccCTGTCTGATTAAAAATAccGGTAA TCcGCAGGCGCCAGGAAcGCTGATcGGcGcGTCCAGCGAcGATGATAAcCTGCCGGTTAAAGGG ATCTCTAACCTTAACAACATGGCGATGTTTAGCGTCTCCGGCCCGGGAATGAAAGGGATGATTGG GATGGcGGcGcGTGTTTcGcCGcCATGTCTcGcGccGGGATCTcGGTGGTGCTCATTAccCAGT ccrcccTGAGTACAGCATCAGCTCTGTGTGccGCAGAGTGACrGc 14

鸡肠炎沙门氏菌PCR检测方法GB/T40049-2021

鸡肠炎是一种由沙门氏菌引起的家禽疾病，对于养殖业来说是一项重要的卫生问题。传统的鸡肠炎诊断方法多为对症治疗或者培养分离法，这些方法存在诊断时间长、效率低等问题。

近年来，PCR技术的发展使得鸡肠炎快速、准确的检测成为可能。GB/T40049-2021标准就是一种针对鸡肠炎沙门氏菌的PCR检测方法。

GB/T40049-2021 PCR检测方法的优势

相比传统的鸡肠炎诊断方法，GB/T40049-2021 PCR检测方法有以下优势：

快速：GB/T40049-2021 PCR检测方法的检测时间仅为数小时，相比传统方法缩短了很多。
高效：该方法可以同时检测多个样本，提高了检测效率。
准确：该方法可靠性高，结果准确可信。

具体操作流程

下面是GB/T40049-2021 PCR检测方法的具体操作流程：

取样：收集家禽肠道或者粪便等样本，进行处理。
DNA提取：使用DNA提取试剂盒提取样本中的DNA。
PCR扩增：将DNA作为模板，使用特异性引物进行PCR扩增。
电泳：将PCR产物进行电泳分析，根据目标片段的大小确定是否存在沙门氏菌。

注意事项

在进行GB/T40049-2021 PCR检测方法时，需要注意以下事项：

样本的收集和处理应当规范化，以避免外界因素对实验结果的影响。
PCR扩增过程中，温度控制需要精确，否则可能会导致结果偏差。
电泳分析时，要根据实验所得的PCR产物大小进行选择性扩增和检测，以保证结果准确可靠。

结论

GB/T40049-2021 PCR检测方法是一种快速、高效且准确可靠的鸡肠炎沙门氏菌检测方法，可以有效地提高鸡肠炎的检测效率，为家禽养殖业的发展提供了有力的支持。