常见过敏蛋白的测定液相色谱-串联质谱法

常见过敏蛋白的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T38163一2019 常见过敏蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofallergenicprotein一ILC-MS/NMIsmethod 2019-10-18发布 2019-10-18实施 国家市场监督管理总局 发布 币国国家标准化管理委员会国家标准
GB/38163一2019 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口 本标准起草单位:检验检疫科学研究院、上海出人境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中 心、辽宁出人境检验检疫局检验检疫技术中心 本标准主要起草人:陈颖古淑青、邓晓军、张九凯、郑秋月、王妙、黄文胜、韩建勋
GB/38163一2019 常见过敏蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了固态食品中牛奶、鸡蛋、大豆、花生、榛子、杏仁和核桃过敏蛋白的液相色谱-串联质谱 检测方法 本标准适用于含小麦粉,燕麦粉、腰果,可可粉等固态食品基质中牛奶、鸡蛋、大豆、花生、榛子、杏仁 和核桃过敏蛋白的液相色谱-串联质请测定和确证 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义、缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1.1 特征肽characteristicpeptide 唯一在靶蛋白的胰蛋白酶消化产物中发现、其氨基酸序列具有专属性的多肽 3.1.2 食物过敏fodallery 免疫机制介导的食物免疫反应不良反应,即食物蛋白引起的异常或过强的免疫反应 注:免疫反应可由lgE或非lgE介导 表现为一疾病群,症状累及皮肤,呼吸、消化、心血管等系统 3.1.3 过敏原allergen 能够引起机体免疫系统异常反应的成分 3.1.4 过敏蛋白allergenproteinn 能够引起机体免疫系统异常反应的成分中的蛋白质 3.1.5 肽 peptide 两个或两个以上的氨基酸脱水缩合形成的有机化合物 3.1.6 胰蛋白酶trypsinm 从动物胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶,能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的梭基侧切断,特
GB/T38163一2019 异性较强 3.2缩胳语 下列缩略语适用于本文件 DTT:二硫苏糖醉dithiothreitol IAA;碘代乙酰胺(iodoacetamide) LC-MS/MS;液相色谱-串联质谱法(liquidchromatography1 -tandemmassspectrometry MRM;多反应监测(multiple reactionmonitoring oxymethylaminomethane Tris;三胫甲基氨基甲婉[tris(hydre 原理 利用质谱技术结合蛋白质组学软什挖掘能够鉴别区分目标食品过敏原特征肽段 通过构建的特征 肽段的质谱信息,对被测样品蛋白酶解后的多肽混合物进行定向监测,实现对食品过敏原的定性检测 质谱中特征肚段的响应峰面积与过敏原的含量呈线性关系,将质谱响应峰面积与过敏原含量建立标准 曲线,以肽段的谐峰面积代表过敏原的实际量,通过标准曲线计算得到被测食品过敏原含量 5 主要试剂 除非有特殊说明,仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水 5.1碳酸氢铵(NHHcO. 5.2二硫苏糖醇(c,HO.s.,DTT) 5.3碘代乙酰胺(ICH.cONH,IAA. 5.4三羚甲基氨基甲炕(c,HHNo.,Tris) 5.5盐酸 5.6磷酸 5.7乙酸(CHcOoH);色谱纯 5.8甲酸(HcOOH):色谱纯 5.9乙睛(CHCN);色谱纯 5.10碳酸氢铵溶液(500mmol/L);称取3.95g碳酸氢铵,用水溶解后定容至100mL 5.11碳酸氢铵溶液(50nmmol/L);称取3.95只碳酸氢铵,用水溶解后定容至1000mL 5.12二硫苏糖醉(500mmol/L);称取0.771g二硫苏糖醇,用500mmol/L碳酸氢铵溶液溶解后定容 至10mL 4C冷藏可保存一个月 5.13碘代乙酰胺溶液(500mmol/L);称取0.925g碘代乙酰胺,用500mmol/L碳酸氢铵溶液溶解后 定容至10mL 4C避光冷藏保存一个月 5.14Tris-HCI溶液(40mmol/L);称取2.42gTris,溶解于800mL水中,用10%盐酸调节pH至 8.0士0.1，用水定容至1000mL 5.15考马斯亮蓝试剂;称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL95%乙醇,加人100mL85%的磷 酸,用蒸僧水补充至200mL 5.16甲酸的水溶液(0.1%,体积分数);准确移取1.0ml 甲酸,用水定容至1000mL 5.17甲酸的乙腊溶液(0.1%,体积分数):准确移取1.0mL甲酸,用乙睛定容至1000mL 5.18胰蛋白酶溶液:100g胰蛋白酶(活力大于4000U/mg蛋白质),用100AL.1%乙酸溶液溶解 溶液于-20C可保存6个月
GB/38163一2019 主要仪器设备 6.1液相色谱-串联质谱仪;配有电喷雾离子(ESI)源的三重四级杆质谱仪 6.2分析天平，感量为0.lg.0.001g.0.1以 6.3恒温水浴锅 6.4离心机:转速不低于2683g 6.5超滤离心管(10kD截止膜. 6.6注射器和0.22m水系滤膜(聚酥碱滤膜). 6.7涡旋混匀仪 6.8pH计:测量精度为0.01 6.9微量移液器:0.5AL10L,l0L100AL,20L200"L,200L1000AL 6.10组织研磨器 6.11具塞离心管 6.12旋转蒸发仪 6.13分光光度计 7.1试样制备 7.1标准工作液制备 7.1.1过敏原标准品;榛子、核桃、杏仁、大豆、花生、全脂奶粉和全蛋粉,或等效商业化标准品 7.1.2食品基质标准品;小麦粉(饼干基质)、腰果(坚果基质),燕麦粉(早餐谷物基质),可可粉(巧克力 基质)(以上基质均无7.1.1中提到的7种过敏原),或等效商业化标准品 7.1.3样品制备;称取每种过敏原标准品和食品基质标准品500g士0.1g,采用粉碎机粉碎后,再将其 研磨成细粉状,过50目筛,装人洁净盛样容器内,密封并标明标记,备用 7.1.4标准储备液;分别准确称取1g(士0.005g)(精确至0.001g)过敏原标准品和食品基质(7种过敏 原分别配制4种基质).充分混匀后加人Tris-HCl溶液,定容至20mL 震荡均匀使试样完全溶解,置 于水浴锅60C加热振荡提取3h 提取液以13800 高速离心5min,上清液过低蛋白质吸附的 0.22m聚艇碱滤膜后,用Bradford方法(考马斯亮蓝法)测定提取液中总蛋白的浓度,总蛋白浓度在 0.05g/ml以上视为有效提取,储备液置于 C冰箱内保存备用 20 7.1.5系列标准溶液;准确移取适量的标准储备液,用含不同基质的Tris-HCl溶液配制成最终浓度为 含全脂奶粉总蛋白0.25mg/L,0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L相当于过敏 原质量分数2.5mg/lkg,5mg/kg、10mg/kg,20mg/kg、100mg/kg500mg/kg、1000mg/kg),花生、 榛子、杏仁、大豆、鸡蛋、核桃总蛋白0.5mg/L、lmg/L2mg/L、4mg/L、20mg/L,80mg/L、160mg/L 相当于过敏原质量分数了m8/k.0mg/kg.320mgkg.0mg/ke、,20ms/kg.800mgkg.1600 mg kg)的系列标准工作溶液 7.2试样保存 试样与蛋白提取液均在一20C冰箱保存 在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留 物含量的变化
GB/T38163一2019 8 分析步骤 8.1蛋白提取与纯化 称取混合均匀的试样约2g(士0.005g)(精确至0.001g),于50ml具塞塑料离心管中,加人 20mlTris-HCl溶液,振荡均匀使试样完全溶解,置于水浴锅60C加热振荡提取3h 提取液以 13800高速离心5min,取上清液过低蛋白质吸附的0.224m聚酥碱滤膜,用Bradford法(考马斯亮 蓝法)测定提取液中总蛋白的浓度 准确移取上述蛋白粗提液200AL加人超滤离心管(10kD)中,以13800！高速离心15min,超滤 去除小分子杂质;向超滤离心管中加人100L500mmol/L的碳酸氢铵,润洗超滤膜以13800高速 离心15min至膜上完全无液体残留,重复3次 准确移取200AL500mmol/几碳酸氢铵溶液复溶膜上 的截留蛋白,涡旋超滤离心管 8.2炕基化与酶解 移取150AL500mmol/L碳酸氢铵溶液、10Al二硫苏糖醉溶液加人上述超滤管样品溶液中,混匀 13800 后置75c下恒温水浴30min;冷却至室温,加人30"L碘代乙酰胺溶液,暗处静置30min 8 高速离心30min至膜上干燥无液体残留 移取50mmol/几L的碳酸氢铵溶液200AL至超滤离心膜上,涡旋后13800从高速离心15min,超 滤去除反应剩余碘代乙酰胺等杂质,离心至膜上无液体残留,弃掉收集管中的废液,并加人超纯水清洗 在超滤膜上加人100L50mmol/几的碳酸氢铵溶液,并加人4L 胰蛋白酶乙酸溶液,充分混匀后置 于37C恒温水浴中酶解4h 将超滤管进行13800高速离心30nmin,至膜上干燥无液体残留,加人 100AL50mmol/L的碳酸氢铵溶液,涡旋后13800高速离心15min,重复3次 合并收集管中的膜 上酶切肽段,放人真空旋转蒸发仪中离心旋干 准确移取流动相A甲股水游液(o.1%,体积分数)10o0儿复落干燥后的肽段,涡能后13800片高速 移取上清液100L于进样瓶中供液相色谱-串联质谱仪检测 离心15min 8.3仪器参考条件 8.3.1液相色谐条件 色谱柱:C柱,150mm×4.6mtm(内径),填料粒径3.5m,孔径30nm(300A)或性能相 a 当者 柱温;40C; b 流动相.A:体积分数为0.1%的甲酸-水溶液,B.体积分数为0.1%的甲酸-乙胧溶液,梯度洗脱 c 见表1 d 流速:0.4mL/min:; 进样量:10!L e 表1梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0.00 97.0 3.0 1.00 97.0 3.0 l0.00 70.0 30.0
GB/38163一2019 表1续) 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 13,00 45.0 55,0 13.10 20.0 80.0 16.00 20.0 80.,0 16.10 97.0 3.0 20.00 97.0 3.0 质谱条件(不同品牌、型号质谱仪可做相应调整) 8.3.2 电离方式;电喷雾电离,正离子 a 扫描方式:;多反应监测(MRM-Scheduled) b 雾化气、气帘气、辅助加热气,碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体;使用前应调节各气体流量 以使质谱灵敏度达到检测要求,参考质谱条件参见附录A中表A.1 电喷雾电压;4500V; d 离子源温度500C; ee 雾化器压力:0.448MPa65psi) fD 气帘气压力:0.241MPa(35psi) g 8.4空白试验 样品前处理时,除不加试样外,均按以上操作步骤进行 8.5定性测定 在相同使用条件下,按照液相色谱-串联质谱条件测定全脂奶粉花生、榛子杏仁、大豆、鸡蛋、核桃 的标准工作溶液,同时测定样品溶液 定性时样品中待测物质的保留时间,与基质标准溶液的保留时间 偏差在士2.5%之内;且样品中所选择的肽段定性离子均出现附录A中表A.1),各组分定性离子的相 对丰度与标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表2规定的范围,则可判定 为样品中存在对应的待测物 表2液相色谱-串联质谱法定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对丰度/% >50 2050 1020 10 允许的相对偏差/% 十20 十25 十30 十50 8.6定量测定 对标准工作溶液进样,每种过敏原选择一种丰度较高、线性关系较好的肽段,外标法通过标准曲线 进行定量,平行测定3次 标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内 标准品 提取离子色谱图(XIC)参见附录B中图B.1一图B.14 结果计算和表述 以定量离子的响应峰面积对相应的过敏原含量作图,试样中过敏原的含量按标准曲线所得结果计
GB/T38163一2019 算得到 各基质中各过敏原的含量按照式(1)进行计算 Y一B X一 式中 过敏原的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); Y -定量离子对的响应峰面积; B -标准曲线的截距; A 标准曲线的斜率 10精密度 在重复性条件下,获得的三次独立测定结果差值的绝对值,不得超过其算术平均值的15% 检出限、定量限和回收率 检出限和定量限 本方达牛奶过敏原的检出限为1mg/Akg,定量限为5mg/kg;鸡蛋、大豆、花生榛子、杏仁,核桃的 检出限为2.5mg/kg,定量限为10mg/kg 不同基质中的定量标准曲线及线性范围参见附录c中 表C.1 11.2回收率 不同基质中添加浓度水平各待测过敏原的回收率范围参见附录D中表D.1
GB/38163一2019 录 附 A 资料性附录 过敏蛋白特征肽段及其主要参考质谱参数 14种过敏蛋白特征肽段及其主要参考质谱参数参见表A.1 表A.114种过敏蛋白特征肽段及其主要参考质谱参数 保留时间去簇电压碰撞能量 特征肽段# 母离子m/:子离子朋/ 过敏蛋白 过敏原 min V 45 692.9(2十) 920.5(十 16.2 29 aSl-caseinm FFVAPFPEVFGK 692.9(2十 16.2 45 26 991.5(十 598.3(3十91l.5”十 12.3 50 25 aS2-caseinm NAVPITPTINR 50 34 598.3(3十) 701.4(十 12.3 牛奶 25 415.7(2十 400,2十) 5.73 40 caseinm AVPYPQR 415.7(2十 660.3(十 5.73 40 20 660.7(3十 65 315,2十) 10,85 24 K-casein SPAQIlQwQVISNTVPAK 65 27 660.73十) 829.5(十 10.85 121.5 70 3 844.4(2十 45 鸡蛋 ovalbummin GGLEPINFQTAADQAR 844.4(2十1007.5(+ 13.5 70 48 50 713.4(2十 501.3(十 15.2 30 L.vraNFvv Glyeinin(Gl VAAR 001.6'(十 40 30 713.4(2十) 15.2 50 33 704.3(2十) 193.5(十 14 B-conglycinin 大豆 TISSEDKPFNIR 3-chain 50 704.3(2十) 646.4(十 14 36 692.3(2十 127.6(十) 1 50 30 -conglyceinin QQQEEQPLEVR a-chain 692.3(2十) 870.5(十 1 50 30 60 29 564.8(2十 686.4(十 13.2 GTGNELVAVR Arahl 564.8(2十) 557,4(十) 13.2 60 30 花生 684.4(3十748,4'(十) 13.9 50 25 RPFYSNAPQEIFIQQ(GR Arah3/4 50 28 684.4(3+) 601.3(十) 13.9 40 30 576.3(2十 852.4(十 10.8 榛子 Cora9 ADIYTEQvGR 227 576.3(2十 10.8 40 689.4" 571.8(2十) 858.4(十 12.9 50 27 Prudul GNLDFvQPPR 50 571.8(2十) 12.9 24 497.3” 杏仁 514.3十 40 28 562.8(2十) 10.9 ADfYNPQGGiR Prudu2 562.8(2十 628.3(十 10.9 25 40 544(3+ 742.4(十 15.6 50 24 核桃 JJugr2 VFSNDVAALNTPR 544(3十) 671.4(十 50 22 15.6 定性时,每种过敏原的所有特征肽段同时出现视为“检出” 井 为定量离子对
GB/T38163一2019 录 附 B 资料性附录) 不同过敏原特征肽段定性检测提取离子色谱(xIC)图 B.1牛奶四种主要过敏原特征肽段定性检测xIc图(见图B.1一图B.4 xcefa酒alro:a00m1.wEgetedk LnL.7e66 Ma47dp 16.m 1622 5n6 1k-雅s1-en#eln-APpEwPCK-692.9-9a1,5 1.es L0eMlIk-asl-caseln-FFYAPFERCK-692,9920.6 I.2e 10 莫上e .e 发IM" 保留时间/minm 保留时间/min aS1- 图B1 1easein蛋白定性检测xIC图 Co28r5 tR M.32a6eps .30n/ol.4o0aBeeted象，" aL.《ese-xIc(mir;300L.ose 1232 12.32 6e e eePIPR 2-casein-AVPITPmR lk ""显 " 2 系了.ssR.-70.4 菩 ？.0s Ls F1 乐el 保m时间/min 保m时间/min 图B.2 S2-easein蛋白定性检测xIC图 CX =xrc呀ya满mlr们78/a3城Etd野spi4ic5育xAm2ktrlr6低 E304 1e 2M 品e wR4172)y3 集 ]叫 2M L. .叫 1,3 1 wee ono 4oa.心 3n6 保留时间/min 图B.3p-easein蛋白定性检测xIc图
GB/38163一2019 Mu1 X1Cof+Vl56par ecIe:57Dp56CSBNAhtfrmSsle6S 2e4 6a4 AoR4I52)ya3 2ed 23x4 .8e4 I.eg son0 omn0 n0 DD 保出时间/mtn 图B3(续 =xcd t群a9D aRsuatE MaL.p l5贴ra:66L702/L503E FuCSE L6e Le L L3x Lie k-ae Le 90000 6n.7o)/3其s.3 a 20.b6 11.0 保出时间/min UCo840702t109DO4CASNOU3t 树a0 " m m 76m 7om 600 k-- m 实KsF 0o.7o)9s w" 40e 2n se 16m 10m m 20 送00联.0送00 没新间丽 图B4x-easein蛋自定性检测xIc图
GB/T38163一2019 B.2大豆三种主要过敏原特征肽段定性检测XIc图(见图B.5~图B.7 E =xICof+(a8airn);713.400/1001,600nExpeetnd, MaL1.了e晒eps=xIcf+Ge(2sairs;:71340o0/Aia.600u uctnd Mhax.1.3e5cps. 159A 2础 Isoteaciyeinini-机rwewR-713.4-l0o. 1soybeanGlyeininG1-LIVQNVAR-713.4-1001.6 1ad B.00e4 L.oed 从.od" 6,00e4 oes 4.0oe4 毛05 200e 2.0es 保面时间， /min 保留时间/min 图B.5GlyeininG1蛋白定性检测XIc图 W3627.0p8 1Ce L.70H7Dcps xIcaf-ewmir;a30012n.00Epeted w(apalr;a.30M/r0,0aEaeeted 03 1103 ehaln Soyboan书-e一a Soybea-B-e-a'-ehai EQLR-69n.3-1127.6 awv-a.3-m.6 10 2000 oo 保时间/min 保解时间/min 图B.6B-conglyecinin-p-chain蛋白定性检测xIc图 HcG酒lr;704.30/640Eeted Hn,14l,0epn xIcW《a8alre)o4.30/,00wpcted， M.43.0ep 4001 Soytean一书-t-a”-ehain-TssDPNR-704.3-f46 250 20o 1劲0 10o 保留时间/min 保时间/mit 图B.7peonglyeinin-a-chain蛋白定性检测XIC图 0
GB/38163一2019 B.3花生两种主要过敏原特征肽段定性检测XIc图(见图B.8~图B.9) Icew(mir;M40/9uoeetd HL队cee Peanut-Arah1-GTGNL且VAR-664.8-686.4 Pearut-Arah1-GNLA-564.8-557 4 Aes .es e L6 .00s 6oe es s00 Les 4.00e 工as ,oe -es 2.o0e .0oa .es 保时间/minm 保m时间/min" 图B.8Arah1蛋白定性检测xIC图 cf hx2.oepsmxIcf-nw(渊plr);6.400/601,3， erL.sc后a aed 5aF=Heb/5=ectcsX 13.38 139 1,6e61 2S 1.4ata自3/4sweIFa没w440. 2.0ue l.2ed 1.0u6 L.5ee 8.0u6 1.0ue w,0e 40ed 5.0e6 2.0u6 保留时间/min" 保留时间/min 图B.9Arah3/4蛋白定性检测xIc图 B.4榛子主要过敏原特征肽段定性检测xIc图(见图B.10) Cr5T300E89p0eE xIcaa=ir);:sT3o/msa0-EsetedL， Lr毛pn 107 10.的 4.3e6 3.0u 4.0e6 ltor 争-oT8wrea 2.5eHaelmutCora9DITwGR a,.5oe s76.ea4 T32？" 2.0e6 1.0ee 1.5ne 5.,0et 5.0o5 保m时闻/min 保留时间/min 图B.10Cora9蛋白定性检测xIC图 11
GB/T38163一2019 B.5杏仁两种主要过敏原特征肽段定性检测XIc图(见图B.11~图B.12) Mn,2,o6cp6 12.33 12.933 2,0e6 1.8d Aand-Pruda 如1NDPQPP-671.8-49n.3 1.6e L.0d 1.4ef IR 8.00e 1.2 !,0e 乱.e ,0eb 6,0e6 4,00of6 4.0eb 2,00uf 2.0ob 保留时间/min 保留时/minm 图B.11Prudu1蛋白定性检测xIc图 TIC r90/62R .300pelL Mn2p Meet xicf-a(aair;:sa00/L30=eetd荒 10.8e 10,86 3.8od 2ed 22l Asond-Pru扣2-ADFaR Asond-Prud如2-DFNGR 2.0ue 662.8-628,3 562.8-14.3 3,0n6 1.6e6 2.5ee 哥 1.4nfe 2.0d 1.2e 1.0ue .fet 80os L.oud 我.oe 4.0n6 5.0al 2.0as 保图时间/minm 保留时间/min 图B.12Prudu2蛋白定性检测xIc图 B.6核桃主要过敏原特征肽段定性检测xIc图(见图B.13 ntadR =Icnair;s44on/6T.40E Mn.来36 =Ic(amir;44o0经400Etet 16.0 1660 8.oe4 9.0e4 8.0e4 7.0e4 alnut-Jur2-sLyALTPR-544-671.4 alnut-ugr2-FsLALm-644-742.4 7.0u 6.0e4 6.0n4 5.0e4 系.0u4 4.0o4 .0er 3.0e4 a.0ot 2.0e4 1.Oe4 1.0e4 保m时间/mi 保留时间/min" 图B.13Jugr2蛋白定性检测xIc图 12
GB/38163一2019 B.7鸡蛋主要过敏原特征肽段定性检测XIc图(见图B.14) 13.5 13.6 4.3e5 瓦.0s L.oa6 4.5ek Eg第-ovalbunin-CCLPINFTAADoAR-844,4-l121.6 E-ovalbumln-LPINFQTAMADQAR-844.4-1007,5 3.sl L0es 3.b 3.0es 量 3.0ee 2.as 2.bnb 20s 2.0as 1.5sa6 1,bo6 1.0e5 1.0es 5.0o 5.0e 保出时间/min 保出时间/min 图B.14ovabumin蛋白定性检测xIc图 13
GB/T38163一2019 录 附 C 资料性附录) 过敏原特征肽段在不同基质中定量标准曲线 7种过敏原特征肽段在不同基质中定量标准曲线参见表C.1 表c.17种过敏原特征肽段在不同基质中定量标准曲线 线性范围 过敏原 过敏蛋白 定量肽段序列 基质 标准曲线 R'(n=3 mg/kg y=1062.2r一20167 0.9224 饼干 早餐谷物 y=1973.8r十4111.3 0.9985 NAVPTPTLNR 51000 牛奶 aS2-casein 坚果 =833.67r-1492.7 0.9998 巧克力 =3667.9.r+14229 0.9999 饼千 =517.24.r一853.49 0.9997 =445.04r+1355 早餐谷物 0.9997 ovalbumin GGLEPINFQTAADQAR101600 鸡蛋 坚果 y=167.24.r-866.68 0.9997" y=244.4.r一2607.2 0.9989 巧克力 饼干 =139.39.r十2513.3 0.9992 早餐谷物 y=l.0907.r+830.64 0.9977 大豆 GlyeininG1 VLIVPQNFVVAAR 101600 坚果 y=25.327.r十1542.9 0.9870 巧克力 y=28.913r+1215.4 0.9969 -639.1.r-3o46.7 饼干 0.9981 y=1381.8.r-9631o 0.8960 早餐谷物 花生 Arah3/4 RPFYSNAPQEIFIQQGR10~1600 坚果 y=111.06.r一3786 0,9781 巧克力 y=26.406.r-550.31 0.9251 y=204.57.r十7887.6 饼干 0.9955 早餐谷物 y=21l.99r+10548 0.9936 榛子 Cora9 ADIYTEQVGR 10l600 坚果 y=41.832.r一2440.2 0,922 =88.795.r十5266.3 0.9858 巧克力 y=297.92.r一6994.4 0.9961 饼干 早餐谷物 =883.69r十3973.2 0.9997" GNLDFvQPPR 101600 杏仁 Prudu1 坚果 y=104.37.r一6528 0.9286 巧克力 y=50,.974.r十1755,3 0.9136 饼干 y=375,09.r十5582.7 0.9967 早餐谷物 y=967.59r一3877.9 0.9991 核桃 Jugr2 VFSNDILVAALNTPR 10l600 y=112.67.r-3774.6 0.9767 坚果 y=1373.l.r一31038 0.9915 巧克力 14
GB/38163一2019 附 录 D 资料性附录 回 收 率 目标过敏原在各个基质中的添加回收率参见表D.1 表D.1目标过敏原在各个基质中的添加回收率 回收率 添加水平 肽段序列 过敏原蛋白名称 mg/kg 测定次数1 测定次数2 饼干燕麦腰果巧克力饼干燕麦腰果巧克力 75.6106.197.6 104.l 105.1 100 l08.591.0 104.9 20 牛奶a-S2-casein NAVPITPTLNR 107.590.1103.9 91.0 104.370.193.4 87.2 10 103.369.4 234.982.3109.6 92.5 72.2 69,1 200 110.1101.8103.3 89.0 128.5103.0104.6 90,1 鸡蛋 ovalbuminGGLEPINFQTAADQAR 40 83.990.7112.1109.597.9691.75113.371l0.80 20 84.673.5141.6135.2 98,874,4143.3 136.8 200 117.5 96.5 114.0 95.469.4107.8 67.4104.5 152.3120." 78.1 大豆Glyceinin" VL.VPQNFVVAAR 76.6 154.1116.675.1 G1 40 89.0 20 123.4231.260.9 56.2 124.8224.289,4 84.5 200 112.2116.897.9 11l4.9 70.9108.297.2 138.8 花生 Arah3/4RPFYSNAPQEIFIQQGR 40 95.5117.496.4 106.5 92.5216.0159.l 1861 20 106.6103.5106.8 81.2 122.7173.41l6.0121.6 81.971.2137.1130.9 200 09,3143,6117.7 172.0 榛子 ADYTEQvGR Cora9 40 98.,6100,086,2 92.4 79,083,6216,392.3 87.8 147.4 82.071.1 75,1 20 108.5106.0 348.2 200 119,4223.889.3 54.4 59.2102.9113.9 85,4 40 杏仁 Prudu1 GNLDFVQPPR 67.2104.3113,7 91.2 47.768.4234.8 90,5 16.3115.1128.0 97.8212.580,.9346.2 20 72.2 200 166.8202.0271.5310.961.8103.2113.859,5 核桃 Jugr2 VFSNDILVAALNTPR 40 78.2100.686.5 40,7" 72.083.7119.5139.9 20 151.8153.287.3 92.2 82.7 89,2l45. 128.9

常见过敏蛋白的测定液相色谱-串联质谱法GB/T38163-2019

随着人民生活水平的提高以及环境污染的加剧，过敏症状在日常生活中越来越普遍。而常见过敏原中的过敏蛋白是引发过敏反应的主要因素之一。因此，如何快速、准确地检测出常见过敏蛋白成为了过敏诊断中的一个重要问题。

GB/T38163-2019《常见过敏蛋白的测定液相色谱-串联质谱法》是我国最新发布的对常见过敏蛋白检测的国家标准。该标准采用液相色谱-串联质谱法作为测定方法，能够快速、准确地检测出常见过敏蛋白。同时，该标准还规定了样品的处理、仪器的选择和操作、检测结果的判定等方面的要求。

相较于传统的免疫学检测试剂盒方法，液相色谱-串联质谱法具有检测灵敏度高、特异性强、检测通量大、自动化程度高等优点。该方法不仅适用于血清、血浆等生物样品，也适用于食品、药品、化妆品等产品中的过敏蛋白检测。

而在过敏诊断中，常见过敏原检测是非常重要的一步。通过对过敏蛋白的检测，医生可以根据检测结果进行针对性治疗，从而更好地控制患者的过敏反应。此外，在食品、药品、化妆品等行业中，对过敏蛋白的检测也具有重要意义。企业可以通过对产品中过敏蛋白的检测，保证产品的质量和安全性。

总的来说，GB/T38163-2019《常见过敏蛋白的测定液相色谱-串联质谱法》的发布，标志着我国在常见过敏蛋白检测领域迈出了坚实的一步。该标准的实施将促进过敏诊断和产品安全监管的规范化和科学化，为人民健康和生产安全保障提供强有力的技术支撑。

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