GB/T35808-2018
林业生物质原料分析方法纤维素酶活性测定
Methodforanalysisofforestrybiomass—Determinationofcellulaseactivity
- 中国标准分类号（CCS）B60
- 国际标准分类号（ICS）79.010
- 实施日期2018-09-01
- 文件格式PDF
- 文本页数5页
- 文件大小371.07KB
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林业生物质原料分析方法纤维素酶活性测定
国家标准 GB/T35808一2018 林业生物质原料分析方法 纤维素酶活性测定 Methodfoanalysisofforestrybhiomass一Determinationofcelulaseaetivity 2018-02-06发布 2018-09-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/35808一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由国家林业局提出
本标准由全国林业生物质材料标准化技术委员会(SAC/TC416)归口
本标准起草单位:北京林业大学、厦门标普标准化服务有限公司
本标准主要起草人;赵宏飞、张柏林,常建民、周方、任学勇、许金飞
GB/35808一2018 林业生物质原料分析方法 纤维素酶活性测定 范围 本标准规定了在给定条件下与纤维素酶活性测定方法有关的术语和定义、原理,试剂和材料、仪器 与设备、标准曲线绘制、试样制备、测定步骤,结果计算、重复性要求、试验报告
本标准适用于林业生物质原料分析用纤维素酶活性的测定
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB/T6682分析实验用水规格和试验方法 GB/T303662013生物质术语 术语和定义 GB/T30366一2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件
为了便于使用,以下重复列出了 GB/T303662013中的一些术语和定义 3.1 林业生物质forestrybiomass 林业生产和加工过程中产生的生物质
主要包括林产品(如木材、竹材、藤材等、林业剩余物如枝 丫,锯末,木屑、梢头、板皮和截头,果壳和果核等采伐剩余物和加工剩余物,造纸废弃物以及废弃木材)、 能源林等
[GB/T303662013,定义2.1.3] 3.2 纤维素酶活力单位celulaseactivityunit 在37C,pH5.5的条件下,每分钟从浓度为5g/1的羚甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液中释放出相 当于14mol葡萄糖的还原糖量,为一个酶活力单位(U). 原理 纤维素酶在一定温度和pH条件下,水解叛甲基纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性 条件下的3.5-二硝基水杨酸(DNS)还原,生成棕红色的氨基化合物在540nm波长处有最大光吸收 在一定范围内酶解产生的还原糖的量与反应液的吸光值成正比,利用比色法测定还原糖生成量就可以 计算纤维素酶的活力
试剂和材料 5.1本标准所使用所有的试剂若无特殊说明,均为分析纯,水均为符合GB/T6682中规定的二级水
GB/T35808一2018 5.2氢氧化钠溶液(200g/L);称取氧氧化钠20.0g,加水溶解,定容至100mL 5.3葡萄糖标准贮备溶液制备(10mg/mL);称取于105C土2C下烘干至恒重的无水葡萄糖1g,精 mg.用水溶解并定容至100mL 确至0.1 5.4柠檬酸溶液(o.1nmol/L);称取一水柠檬酸21.01g,加水溶解定容至1000mL
5.5柠檬酸钠溶液(0.1mol/L);称取二水柠檬酸钠29.41g,加水溶解定容至1000mL
5.6柠檬酸盐缓冲液(0.05mol/儿L,pH5.5);称取一水柠檬酸10.5g,加人氢氧化钠5.0g,溶于约 800mL水中,用柠檬酸溶液(5.4)或柠檬酸钠溶液(5.5)调节pH至5.5,再用水定容至1000mL 5.7 梭甲基纤维素纳(cMcNa)溶液(5g1);称取梭甲基纤维素销(Sgmac5678)0.50g,加人柠檬股 盐缓冲液(5.6)80mL,磁力搅拌,同时缓慢加热,直至梭甲基纤维素钠全部溶解,然后停止加热,继续搅 拌30min,用柠檬酸盐缓冲液(5.6)定容至100mL
梭甲基纤维素钠溶液能立即使用,4C避光处放 置,有效期为3d
5.8 二硝基水杨酸试剂称取3,5-二硝基水杨酸(DNS)3.15g,置于约500mL水中,在50C水浴 3,5- 中搅拌溶解,逐渐加人氢氧化钠溶液100ml,再依次加人酒石酸钾钠91.0g苯酚2.5g和无水亚硫酸 钠2.5g,待全部溶解并澄清后,冷却至室温,用水定容至1000mL,过滤
贮存于棕色试剂瓶中,避光 处放置7d后使用,有效期为6个月
6 仪器与设备 6.1分析天平:感量为0,000lg 6.2pH计:精确至0.01
6.3磁力搅拌器;附加热功能
6.4电磁振荡器
6.5离心机 6.6恒温水浴锅
6.7秒表;每小时误差不超过5、 6.8分光光度计
6.9移液器;精确度为1L
6.10植物粉碎机:配有2mm筛孔的植物粉碎机
6.11分样筛;孔径为0.25mm(60目) 标准曲线绘制 分别吸取葡萄糖标准贮备溶液0.00mlL、2.00mL、4.00mL,6.00mL、8.00mL,10.00mL,12.00mL 14.00ml,分别用柠檬酸盐缓冲液定容至100mL,配制成浓度为0.00mg/ml1.4mg/mL的葡萄糖 标准溶液
分别吸取葡萄糖标准溶液各1.00mL于刻度试管中,各加2.00mL水和2.00mLDNS试剂
置于 沸水浴中煮沸5min
取出,迅速冷却至室温,用水定容至25mL,在波长540nm处测量吸光度值
以 标准葡萄糖溶液含糖的毫克数为横坐标,以对应吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,获得线性回归方程
试样制备 8 固体样品用植物粉碎机粉碎,然后过0.25mm(60目)筛,称取试样2份,精确至0.0001g,加人 N9 mL
柠檬酸盐缓冲液,磁力搅拌30min,再用柠檬酸盐缓冲液定容至100ml,4C避光放置24h
摇 匀,取30ml50ml,以3000r/min离心3min,取上清液备用
GB/35808一2018 液体样品直接用柠檬酸盐缓冲液进行稀释定容
测定步骤 吸取10.0mL经过适当稀释的酶液,37C平衡10min 吸取10.0mL经过梭甲基纤维素钠溶液,37C平衡10min. 在25mL刻度具塞试管中,准确加人1.00mL叛甲基纤维素钠溶液(5.7),再依次加人2.001 m DNS试剂,0.5ml酶液,5ml水,电磁振荡3s,置于37C水浴中,准确计时,反应60min,然后放人沸 水浴中加热5min,冷却至室温,用水定容至25mL
540nm波长处测量吸光度A
在25ml刻度具塞试管中,准确加人1.00mL
拨甲基纤维素钠溶液,再依次加人0.5mL酶液， 5mL水，电磁振荡3s,置于37C水浴中,准确计时,反应60min,加2.00mLDNS试剂,然后放人沸 水浴中加热5min,冷却至室温,用水定容至25mL
540nm波长处测量吸光度A1 10结果计算 试样纤维素酶活力按下列公式计算 n X= -×1000×n M又 式中: 纤维素酶活力,单位为酶活力单位每克(U/g)或酶活力单位每毫升(U/mL); 根据标准曲线方程计算出(A1一A,)值对应的葡萄糖质量,单位为毫克(mg) n M 葡萄糖摩尔质量,180.2g/mol; -酶解反应时间,单位为分(min) 转化因子,1mmol=10004mol 1000 试样的总稀释倍数
酶活力计算结果表示到小数点后三位
重复性 每个试样取两份试料进行平行试验,测定结果用其算术平均值表示
同一试样两个平行测定值的 相对偏差不超过20%
12试验报告 试验报告至少应给出以下几个方面的内容 样品信息:试验或测试样品的名称、种类、尺寸、数量、取样信息等 aa b 所使用的标准(包括发布或出版年号); 所使用的试验方法; c d)结果; 观察到的异常现象; e fD 试验人员、日期
林业生物质原料分析方法纤维素酶活性测定GB/T35808-2018
随着人们对可再生能源的需求不断增加，林业生物质作为一种重要的资源得到了广泛关注。而对林业生物质进行有效利用的前提是了解其化学成分和酶解性能。其中，纤维素酶活性是衡量林业生物质酶解性能的重要指标之一。
目前，测定纤维素酶活性的方法较多，常见的有高温高压消解法、滴定法等。不过这些方法都存在一定的局限性，例如操作复杂、耗时长等。为解决这些问题，一种新的方法——纤维素酶活性测定应运而生。
该方法的原理是：将林业生物质样品与纤维素酶反应一段时间后，通过显色反应和吸光度测量的方式计算出样品中纤维素酶分解产生的还原糖量。根据还原糖量和反应时间之间的关系，可以计算出样品的纤维素酶活性。
该方法的优点主要有：
- 测量速度快：相较于传统的高温高压消解法等方法，纤维素酶活性测定的实验周期要短得多。
- 操作简单：纤维素酶活性测定不需要复杂的仪器设备和特殊试剂，因此操作起来比较简单。
- 适用范围广：纤维素酶活性测定不仅可以用于林业生物质的酶解性能评价，还可以应用于其他领域的相关研究。
根据GB/T35808-2018标准，纤维素酶活性测定已经成为林业生物质原料分析的标准方法之一。该标准规定了该方法的实验步骤、仪器设备和数据处理等内容。通过该标准的规范化应用，可以大大提高测量结果的精度和可靠性。
总之，纤维素酶活性测定是一种快速、准确的林业生物质原料分析方法。随着该方法的不断发展和完善，相信它将在林业生物质利用、环境保护和可持续发展等方面发挥重要作用。
