牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定液相色谱-串联质谱法

牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22968一2008 牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、 多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的 测定液相色谱-串联质谱法 Determinationofivermectinabamectin,doramectinandeprinomectin residuesinmilkandmilkpowder一LC-s-Msmethot 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22968一2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局、广东出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:林峰、吴映漩、姚仰勋、欧阳少伦、林海丹、庞国芳
GB/T22968一2008 牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、 多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的 测定液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛奶和奶粉中伊维菌素(ivermectin)、阿维菌素abammecetin)、多拉菌素doramectin) 和乙酰氨基阿维菌素(eprinomeetin)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 本标准的方法检出限;牛奶中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素均为54g/kg,奶 粉中伊维菌素、阿维菌素,多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素均为404g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 GB/T6379.1一2004,1IsO5725-1l:1994,IDT GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,ISO5725-2:1994,IT GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO36961987,MOD 原理 牛奶中残留的伊维菌素、,阿维菌素,多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙睛-二氯甲婉提取后,正 己婉脱脂,液相色谱-串联质谱检测,外标峰面积法定量 奶粉中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素用乙睛提取后,正己炕脱脂,样品 溶液供液相色谱-串联质谱仪检测,外标峰面积法定量 试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 乙睛:色谱纯 4.2二氯甲烧 4.3甲醇 44正己婉,使用前以乙睛饱和 45氯化钠 4.6乙睛-二氧甲婉溶液(4十l);分别量取80ml.乙睛(4.1),20ml.二氯甲炕(4.2),混合均匀 4.7饱和氧化钠水溶液 4.8标准物质;伊维菌素、阿维菌素,多拉菌素,乙酰氨基阿维菌素,纯度>99% l00 /ml标准储备液;准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素,多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标 4g 准品(精确至0.lmg),用乙睛分别配制成1004g/mL的标准贮备液,在一18C储存
GB/T22968一2008 4.100.500g/mL混合标准工作液;准确吸取0.500mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基 阿维菌素标准储备液(4.9)至100ml容量瓶中,以乙腊稀释并定容,此混合工作液的浓度为 0.500 pE/ml. 在一20C储存 基质混合标准工作溶液;根据需要,吸取不同体积的混合标准工作液(4.10),用空白样品提取液 配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液,使用前配制 4.12滤膜:0.2m. 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾电离源 5.2分析天平;感量0.1mg和0.01g 5.3离心机;转速大于或等于40oo r/min 5.4超声波水浴 5.5涡旋混匀器 5.6氮吹浓缩仪 试样的制备与保存 6.1牛奶 取均匀样品约250g装人洁净容器作为试样,密封置4C下保存,并标明标记. 奶粉 取均匀样品约250g装人洁净容器作为试样,密封,并标明标记 制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化 测定步骤 提取 7.1 1.1牛奶 7. 准确称取2g样品准确至0.01g),置于25mL离心管中,加人5m 饱和氯化钠溶液(4.7),涡旋 混匀1 min 1,加人7.5ml乙肺-二氯甲烧混合溶液(4.6)涡旋混匀1" nmin,4000r/min离心5min,上清 液转移至50mL 氮吹管中,离心管中再加人7.5ml乙腊-二氯甲烧混合溶液涡旋混匀1min. 4000r/min离心5min,上清液合并至50mL氮吹管中,45C氮气吹干 准确加人2.00mL乙至氮 吹管中,涡旋混匀1min,加人3ml乙睛饱和正己婉(4 涡旋混匀lmin,静置30min,取下层溶液过 0.2Am滤膜后,供液相色谱谐-串联质谱测定 奶粉 准确称取0.5越样品C准确至0.0o1g).置于10mL离心管中,加人3ml乙睛,超声振荡5min. 4000r/min离心5min,上清液转移至15mL带盖离心管中,残渣再用2.0ml乙肮提取一次,离心后 的清液合并至15ml带盖离心管中,用乙睛定容至5.0mlL 刻度,混匀,加人3ml乙睛饱和正己烧 4.4),涡旋混匀1 1,静置30min,取下层溶液过0.2pm滤膜后,供液相色谱-串联质谱测定 min 7.2测定条件 7.2.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 a) 色谱柱:IntersilC8-3,5 1,150mm×4.6mm(内径)或相当者; 5m， b) 柱温;40C; e)进样量;25l; d) 流速:0.8mL/min; e流动相:甲醇十水,梯度洗脱程序见表1
GB/T22968一2008 表1梯度洗脱程序 时间/minm 甲醇/% 水/% 25 0.00 75 100 3,00 100 10.00 25 10.01 75 25 15.00 75 7.2.2质谱参考条件 质谱参考条件如下 a)离子源:电喷雾电离源(ESI); b)扫描方式;负离子扫描; c检测方式;多反应监测MIRM; d 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体;使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求 定性离子对、定量离子对,采集时间、去簇电压和碰撞能量见表2. 表2伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素参考质谱参数 化合物名称 定性离子对(m/:定量离子对(m/:) 采集时间/ms 去簇电压/V 碰撞能量/V 873.7/567.8 -37 伊维菌素 873.7/229.2 100 -75 873,7/229.2 一50 8717/565.2 40 阿维菌素 871.7/565.2 100 -80 871.7/229,3 -54 897.6/591. 38 多拉菌素 100 -70 897.6/591.2 897.6/229.0 -51 912.5/270,0 -49 912.5/565.4 100 -82 乙酷氨基阿维菌素 912.5/565.4 -37 7.2.3液相色谱-串联质谱测定 7.2.3.1定性测定 每种被测组分选择1个母离子,2个以上子离子,在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间 与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接 近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样 品中存在对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 K一50 20GB/T22968一2008 素和乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1 7.3平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.4空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行 结果计算 牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定按式(1)计算 1000 x X= (1 1000 式中: -试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(/ke 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL); 样品溶液所代表最终试样的质量,单位为克(g). 计算结果应扣除空白值 精密度 9 -般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其重复性和再现性的 值以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性实验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,被测物的添加浓度 范围及重复性方程见表4,表6 5 表4添加浓度范围及重复性和再现性方程(基质为牛奶 单位为微克每千克 添加浓度范围 重复性限r" 再现性限R 化合物名称 伊维菌素 广=0.332m一0.971 R=0.346m+0.182 550 阿维菌素 550 广=0.271m-0.318 R=0.272m0.323 多拉菌素 550 =0.259m一0,015 R=0.308m+0.599 550 乙酰氨基阿维菌素 广=0.230m+0.085 R=0,408m一1.24 注;"为两次测定结果的算术平均值 表5添加浓度范围及重复性和再现性方程(基质为奶粉》 单位为微克每千克 重复性限" 化合物名称 添加浓度范围 再现性限R 伊维菌素 40400 r=0.215m-0.662 R=0.188m-0.262 厂=0.220m+0.113 阿维菌素 40400 R=0.2661十0.333 多拉菌素 40一400 r=0.229m一0.122 R=0.196m十0.026 乙酰氨基阿维菌素 40400 广=0.11lm十0.437 R =0.147m十0.179 注:m为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性实验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R),被测物的添加浓 度范围及再现性方程见表4、表5
GB/T22968?2008 ?A ?? ?????(MRM)?? ????????????(MRM)?? ?A.1~?A.4 6. 1.5c4 1.0e4 5000.0 0.0 min ?A.1???????(MRM)?? 6.5 300o 2500 2000 1500 1000 500 min ?A.2???????(MRM)?? 6.3 1.00e4 8000.00 6000.00 4000.00 2000.00 0.00 ?A.3??????(NMIRM)??
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GB/T22968一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 本方法中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数 据,见表B.1 表B.1伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据 样品基质 化合物名称 添加浓度/(4g/kg 平均回收率/% 00.6 1o 97.2 伊维菌素 20 03.0 50 90. 82.4 10 97.2" 阿维菌素 87.7 20 50 88.3 牛奶 87.6 10 93. 多拉菌素 20 98.3 50 95.3 84.5 0 96.0 乙酰氨基阿维菌素 20 90.2 50 90. 40 96.7 105,0 80 伊维菌素 16o 86.0 400 86.6 40 81.8 80 83.3 阿维菌素 160 84.9 400 80.6 奶粉 40 88.9 80 89.1 多拉菌素 16o 89.7 00 87.3 40 86.6 80 86，7 乙酷氨基阿维菌素 160 89.0 400 85.5